Burnout: eine Folge der neuen Organisation der Arbeit ; ein Leitfaden zum Verständnis für Interessenvertretungen und Beschäftigte
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Bielefeld
AJZ
2012
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TABLE OF CONTENTS
1. ABSTRACT 6
2. INTRODUCTION 8
2.1. HAEMATOPOIESIS 9
2.2. HAEMATOPOIETIC STEM CELLS AND EXTRATHYMIC PRECURSORS 9
2.3. INTRATHYMICT-CELL DEVELOPMENT 12
2.4. TRANSCRIPTION FACTORS OF INTRATHYMIC T-CELL DEVELOPMENT AND
COMMITMENT 15
2.5. MODELS OF CD4/CD8 LINEAGE CHOICE 16
2.6. MICRORNAS 19
2.6.1. MIR SYNTHESIS AND GENE REGULATION 19
2.6.2. ROLE OF MIRS IN HAEMATOPOIESIS AND LYMPHOPOIESIS 20
2.7. MIR-17-92 22
2.7.1. MIR-17-92 IN LYMPHOPROLIFERATIVE DISEASES 23
2.7.2. MIR-17~92 IN LYMPHOID DEVELOPMENT 25
2.7.3. MIR-17~92 TARGETS 26
2.8. AIMS 29
3. MATERIALS AND METHODS 30
3.1. MICE 31
3.1.1. MIR-17-92 DEFICIENT MICE 31
3.1.2. C57BL/6 CD45.2 OR CD45.1 OR CD45.1/CD45.2 MICE 31
3.1.3. BM CHIMAERAS 31
3.2. CELL ISOLATION AND PREPARATION 31
3.2.1. FLOW CYTOMETRY AND ANTIBODIES USED 31
3.2.2. LINEAGE NEGATIVE BM CELLS 32
3.2.3. CD4~CD8~CD44 - CD25~ CELL SORT 32
3.2.4. CELL COUNTS 32
3.3. MICROARRAY 32
3.4. GSEA ANALYSIS 33
3.5. CLONING AND MOLECULAR BIOLOGY 33
3.5.1. MIR-17-92 PROMOTER 33
3.5.2. CLONING OF THE PUTATIVE PROMOTER OF MIR-17-92 INTO PGL4.20 AND
PGL4.23 LUCIFERASE VECTORS 33
3.5.3. CLONING OF E2F1 INTO PIRES-GFP 34
3.5.4. CLONING OF EGR3 INTO MIGR1 35
3.5.5. TRANSFORMATION OF E.COLI 35
3.5.6. PLASMID PURIFICATION 36
4
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IMAGE 2
3.5.7. PLASMID DIGESTS 36
3.5.8. AGAROSE GELS 36
3.5.9. TAE BUFFER 36
3.5.10. DNA LOADING BUFFER 36
3.5.11. PCR PRIMERS 36
3.5.12. MRNA AND MIR EXTRACTION 36
3.5.13. CDNA SYNTHESIS 37
3.5.14. TAQMAN GENE EXPRESSION ASSAYS 37
3.6. CELL LINES 37
3.6.1. OP9-DL1 37
3.6.2. BA/F3 38
3.6.3. ELECTROPORATION 38
3.6.4. LUCIFERASE ASSAYS 38
4. RESULTS 42
4.1. MIR-17-92 EXPRESSION IN WILDTYPE HAEMATOPOIETIC POPULATIONS 43
4.2. CORE PROMOTER ACTIVITY AND INHIBITORY FUNCTION OF THE MIR-17~92
UPSTREAM REGION ..44
4.3. MIR-17-92 IS NECESSARY FOR CORRECT LYMPHOID AND MYELOID DEVELOPMENT
UNDER COMPETITIVE CONDITIONS 49
4.4. THE ROLE OF MIR-17-92 IN STEADY STATE T-CELL DEVELOPMENT 57
4.5. MIR-17-92^ CD4 + CD8 + SHOW INCREASED APOPTOSIS IN VITRO 64
4.6. MICROARRAY ANALYSIS OF GENE EXPRESSION IN MIR-17-92* AND MIR-17-92^
THYMOCYTES 67
5. DISCUSSION 79
5.1. MIR-17-92 IS DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN HAEMATOPOIETIC PROGENITOR
POPULATIONS FROM BM AND THYMUS 80
5.2. CORE PROMOTER ACTIVITY AND INHIBITORY FUNCTION OF THE MIR-17-92 5
REGION 81
5.3. MIR-17-92 REGULATES EARLY DEVELOPMENT OF T- AND B-LYMPHOID LINEAGES
83
5.4. ROLE OF MIR-17-92 IN STEADY STATE 85
5.5. ROLE OF MIR-17-92 IN COMPETITIVE BM CHIMAERAS 87
5.6. MIR-17-92 DELETION DISTURBS NORMAL CELL CYCLE PROGRESSION 88
5.7. IMPLICATIONS FOR CANCER AND AUTOIMMUNITY 89
5.8. CONCLUSION 91
6. REFERENCES 92
7. APPENDIX 104
7.1. LIST OF ABBREVIATIONS USED 105
7.2. CURRICULUM VITAE 107
7.3. ACKNOWLEDGEMENTS 108
5
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