Die Rolle des induzierbaren Kostimulators (ICOS) in der Kooperation von T- und B-Zellen im entzündeten Gewebe:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGS VERZEICHNIS IV
ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS VI
1 EINLEITUNG
1.1 DIE T-ZELL-ABHAENGIGE, HUMORALE IMMUNANTWORT 1
1.2 DIE ROLLE KOSTIMULATORISCHER MOLEKUELE - ICOS UND ICOS-L 1
1.3 T-EFFEKTORZELLEN 4
1.3.1 UEBERBLICK 4
1.3.2 T-HELFERZELLEN VOM TYP 1 UND 2 (T H 1/T H 2-ZELLEN) 5
1.3.3 FOLLIKULAERE T-HELFERZELLEN (T F H) 7
1.4 B-EFFEKTORZELLEN 8
1.5 BEDEUTUNG DER T- UND B-ZELLEN FUER DIE ASTHMATISCHE REAKTION 11
1.6 B-ZELLEN ALS ANTIGENPRAESENTIERENDE ZELLEN 12
1.7 AUSGANGSPUNKT DER ARBEIT UND ZIELSTELLUNG 13
2 MATERIAL UND METHODEN 2.1 GERAETE UND SOFTWAREPROGRAMME 15
2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN UND REAGENZIEN 15
2.3 PUFFER, LOESUNGEN UND MEDIEN 18
2.4 MONOKLONALE ANTIKOERPER (MAK) 20
2.5 TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 21
2.5.1 MAEUSE 21
2.5.3 IMMUNISIERUNG DER TIERE 22
2.5.3.1 HERSTELLUNG DES NITROPHENOL-OVALBUMIN (NP-OVA)-KONJUGATS 22
2.5.3.2 KOPPLUNG VON NP-OVA AN ALUM (ALUMINIUMHYDROXID) 23
2.5.3.3 INTRANASALE ANTIGENGABE 23
2.6 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 23
2.6.1 ISOLIERUNG MURINER ZELLEN 23
2.6.1.1 ISOLIERUNG VON ZELLEN AUS DER MILZ 23
2.6.1.2 ISOLIERUNG VON ZELLEN AUS DER LUNGE 24
2.6.1.3 ISOLIERUNG VON ZELLEN AUS DEM LYMPHKNOTEN 24
2.6.2 MAGNETISCHE ZELLSORTIERUNG (MACS) 24
2.6.3 ZELLZAEHLUNG 25
2.6.4 ANALYSE DER ZYTOKINPRODUKTION 25
2.6.5 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 26
2.6.5.1 MARKIERUNG VON ZELLOBERFLAECHENPROTEINEN 26
2.6.5.2 DARSTELLUNG VON INTRAZELLULAEREN PROTEINEN 26
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
2.6.5.3 MESSUNG DER ZELLPROLIFERATION MITTELS CFSE 27
2.6.5.4 ANALYSE DER DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN DATEN 27
2.6.6 FLUORESZENZAKTIVIERTE ZELLSORTIERUNG 28
2.6.7 IN VITRO T H 2-POLARISIERUNG VON T-LYMPHOZYTEN 28
2.7 IMMUNHISTOCHEMIE (IHC) 29
2.7.1 SILANISIEREN VON OBJEKTTRAEGERN 29
2.7.2 GEWEBEAUFARBEITUNG 29
2.7.3 ANFERTIGUNG VON GEFRIERSCHNITTEN 29
2.7.4 INDIREKTE IMMUNPEROXIDASETECHNIK 29
2.7.5 PAS-FAERBUNG 30
2.7.6 BRONCHOALVEOLAR-LAVAGE (BAL) UND DIFF-QUICK FAERBUNG 30
2.7.7 BEARBEITUNG HISTOLOGISCHER AUFNAHMEN 31
2.8 ENZYMGEKOPPELTER IMMUNADSORPTIONSTEST (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT
ASSAY, ELISA).... 31
2.8.1 GEWINNUNG VON SERUM 31
2.8.3 MESSUNG VON EL-2 IM ZELLKULTURUEBERSTAND 32
3 ERGEBNISSE
3.1 ETABLIERUNG EINES MURINEN ATEMWEGSINFLAMMATIONSMODELLS 33
3.1.1 GRUNDLEGENDE UEBERLEGUNGEN 33
3.1.2 BASISPROTOKOLL DES ATEMWEGSINFLAMMATIONSMODELLS 33
3.1.3 WIRKUNG VON LPS AUF DIE T-ZELL-AKTIVIERUNG 35
3.1.6 DURCH IN VITRO T H 2-POLARISIERUNG DER T-ZELLEN KANN DIE ZAHL AN
EOSINOPHILEN IN DER LUNGE ERHOEHT WERDEN 41
3.1.7 VERGLEICH DES NEUEN MODELLS MIT EINEM STANDARDMODELL 43
3.2 GLOBALE BEDEUTUNG VON ICOS IM ENTZUENDETEN GEWEBE 46
3.2.1 MODELLSYSTEM ZUR UNTERSUCHUNG DER GLOBALEN ROLLE VON ICOS 46
3.2.2 ICOS FORDERT DIE EXPANSION NAIVER ANTIGENSPEZIFISCHER T- UND
B-ZELLEN 47 3.2.3 ICOS IST WICHTIG FUER DIE DIFFERENZIERUNG DER T- UND
B-ZELLEN ZU FOLLIKULAEREN T-HELFERZELLEN
UND KEIMZENTRUMS-B-ZELLEN 50
3.2.4 DIE IN VITRO T H 2-POLARISIERUNG DER T-ZELLEN KANN DEN IN VIVO
EXPANSIONSDEFEKT NICHT KOMPENSIEREN 51
3.3 ROLLE VON ICOS IN DER INTERAKTION VON T- UND B-ZELLEN IM VERLAUF
EINER T-ZELL-ABHAENGIGEN IMMUNANTWORT 55
3.3.1 MODELLSYSTEM ZUR UNTERSUCHUNG DER ROLLE VON ICOS IN DER T-DZ- VS.
T-B-INTERAKTION 55 3.3.2 DIE EXPANSION DER ANTIGENSPEZIFISCHEN T- UND
B-ZELLEN IST VON ICOS-L AUF B-ZELLEN
UNABHAENGIG 57
3.3.3 FOLLIKULAERE T-HELFERZELLEN UND KEIMZENTRUMS-B-ZELLEN SIND NICHT
AUF DIE T-B-INTERAKTION UEBER ICOS/ICOS-L ANGEWIESEN 58
3.3.4 DIE AUFRECHTERHALTUNG DER T H 2-EFFEKTORFUNKTIONEN IN DER LUNGE
IST VON DER KOSTIMULATION UEBER ICOS ABHAENGIG 63
II
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
3.3.5 PLASMAZELLEN ENTWICKELN SICH UNABHAENGIG VON DER KOSTIMULATION UEBER
ICOS 68
3.3.6 DER KLASSENWECHSEL ZU BESTIMMTEN ISOTYPEN WIRD VON ICOS
DIFFERENZIELL REGULIERT 71 3.3.7 B-GEDAECHTNISZELLEN SIND AUF DIE
ICOS/ICOS-L-INTERAKTION MIT T-ZELLEN ANGEWIESEN 73 3.4 DIE ROLLE VON
ICOS FUER DIE ANTIGENPRAESENTIERENDE FUNKTION VON B-ZELLEN IM ENTZUENDETEN
GEWEBE 75
3.4.1 DIE ANTIGENPRAESENTIERENDE FUNKTION VON B-ZELLEN WIRD DURCH ICOS
POSITIV BEEINFLUSST 75 3.4.2 DIE INTERAKTION VON ICOS/ICOS-L ZWISCHEN T-
UND B-ZELLEN FINDET IM VERLAUF DER
ATEMWEGSENTZUENDUNG IN BRONCHUS-ASSOZIIERTEN LYMPHOIDEN STRUKTUREN STATT
77 3.4.3 KEIMZENTRUMS-AEHNLICHE B-ZELLEN ABER NICHT FOLLIKULAERE
T-HELFERZELL-AEHNLICHE ZELLEN LASSEN
SICH IM LUNGENGEWEBE FINDEN 80
4 DISKUSSION
4.1 ETABLIERUNG EINES NEUARTIGEN ATEMWEGSINFLAMMATIONSMODELLS 84
4.2 DIE ROLLE VON ICOS/ICOS-L IN DER INTERAKTION VON T- UND B-ZELLEN 86
4.2.1 EINFLUSS AUF DIE KLONALE EXPANSION ANTIGENSPEZIFISCHER T- UND
B-ZELLEN 86
4.2.2 EINFLUSS AUF DIE DIFFERENZIERUNG ZU FOLLIKULAEREN T-HELFERZELLEN
UND KEIMZENTRUMS-B-ZELLEN.. 88
4.2.3 EINFLUSS AUF DIE ENTSTEHUNG VON T- UND B-EFFEKTORZELLEN 90
4.3 ROLLE DER B-ZELLEN ALS ANTIGENPRAESENTIERENDE ZELLEN IM ENTZUENDETEN
GEWEBE 100
LITERATURVERZEICHNIS 104
ZUSAMMENFASSUNG 121
SUMMARY 122
LEBENSLAUF 123
PUBLIKATIONEN UND KONGRESSBEITRAEGE 124
DANKSAGUNG 125
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 126
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