Effekte von Hyper-IL-6 in der Vaccinia-Virus-vermittelten Krebstherapie:
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2011
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 1
SUMMARY 4
1 EINLEITUNG 7
1.1 KREBS - STATISTISCHE HOCHRECHNUNG 7
1.2 KONVENTIONELLER THERAPIEANSATZ - CHEMOTHERAPIE 8
1.3 ONKOLYTISCHE VIRUSTHERAPIE 10
1.3.1 DAS VACCINIA-VIRUS 12
1.3.1.1 POCKEN - GESCHICHTE DER INFEKTIONSKRANKHEIT 12
1.3.1.2 SYSTEMATIK DER POXVIRIDAE 12
1.3.1.3 MORPHOLOGIE DES VACCINIA-VIRUS 12
1.3.1.4 VACCINIA-VIRUS ALS ONKOLYTISCHES VIRUS IN DER KREBSTHERAPIE 13
1.4 DAS PROINFLAMMATORISCHE ZYTOKIN LNTERLEUKIN-6 14
1.4.1 ZYTOKINE 14
1.4.2 LNTERLEUKIN-6 15
1.4.2.1 REZEPTOREN UND SIGNALWEGE FUER LNTERLEUKIN-6 16
1.4.2.2 DIE JAK/STAT-SIGNALKASKADE 18
1.4.2.3 PLEIOTROPE FUNKTIONEN VON LNTERLEUKIN-6 20
1.4.2.4 DAS DES/GNER-ZYTOKIN HYPER-IL-6 23
1.5 KOMBINATIONSSTRATEGIEN MIT ONKOLYTISCHEN VIREN 24
1.6 ZIEL DER ARBEIT 27
2 MATERIAL 28
2.1 CHEMIKALIEN UND ENZYME 28
2.2 ZUSAMMENSETZUNG VON PUFFER UND LOESUNGEN 30
2.3 VERWENDETE ZELLLINIEN UND ENTSPRECHENDE ZELLKULTURMEDIEN 33
2.3.1 ZELLLINIEN 33
2.3.2 ZELLKULTURMEDIEN 34
2.4 VERWENDETE ANTIKOERPER UND REKOMBINANTE PROTEINE 34
2.5 GERAETE UND SONSTIGE MATERIALIEN 35
2.6 REKOMBINANTE VACCINIA-VIRUS-KONSTRUKTE 37
2.7 VERSUCHSTIERE 38
2.8 SOFTWARE 38
3 METHODEN 39
3.1 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 39
3.1.1 KULTIVIERUNG ADHAERENT WACHSENDER SAEUGETIERZELLEN 39
3.1.1.1 KULTIVIERUNG VON CV-1 ZELLEN 39
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IMAGE 2
3.1.1.2 KULTIVIERUNG VON DU-145-ZELLEN 40
3.1.2 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL MIT HILFE DER NEUBAUER-ZAEHLKAMMER 40
3.1.3 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN 40
3.1.4 MTT-PROLIFERATIONS-ASSAY 41
3.2 VIROLOGISCHE METHODEN 41
3.2.1 INFEKTION VON SAEUGERZELLEN MIT VACCINIA-VIREN 41
3.2.2 BESTIMMUNG DES VIRUSTITERS MITTELS PLAQUE ASSAY 42
3.2.3 ANALYSE DER VIRUSREPLIKATION 43
3.3 PROTEINANALYTISCHE METHODEN 43
3.3.1 PROTEINEXTRAKTION AUS SAEUGERZELLEN 43
3.3.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION NACH BRADFORD 44
3.3.3 FAELLUNG VON PROTEINEN MIT TRICHLORESSIGSAEURE (TCA) 44
3.3.4 ANALYSE VON PROTEINEN IN DENATURIERENDEN POLYACRYLAMIDGELEN
(SDSPAGE) 44
3.3.5 PROTEINTRANSFER AUF NITROCELLULOSE-MEMBRANEN (WESTERN BLOT) 46
3.3.6 IMMUNDETEKTION MIT HILFE DER ECL-METHODE 47
3.3.7 QUANTIFIZIERUNG DER HYPER-IL-6-EXPRESSION MITTELS ENZYME-IINKED
IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) 48
3.3.8 NACHWEIS DER FUNKTIONELLEN AKTIVITAET DES EXPRIMIERTEN
DESIGNER- ZYTOKINS HYPER-IL-6 49
3.3.8.1 DETEKTION VON STAT3 UND PHOSPHO-STAT3 IN ZELLLYSATEN 49
3.3.8.2 LOKALISATION VON STAT3 UND PHOSPHO-STAT3 IN TUMORZELLEN MIT
HILFE VON IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG 50
3.4 TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 51
3.4.1 IMPLANTATION VON HUMANEN TUMORZELLEN 51
3.4.2 INTRAVENOESE INJEKTIONEN 51
3.4.2.1 APPLIKATION VON REKOMBINANTEN VACCINIA-VIREN 51
3.4.2.2 APPLIKATION VON CHEMOTHERAPEUTIKA 51
3.4.3 NARKOSE 52
3.4.4 VISUALISIERUNG DER VIRALEN REPLIKATION MITTELS FLUORESZENZ
-IMAGING 52
3.4.5 TUMOR-UND ORGANENTNAHME 52
3.4.6 RETRO-ORBITALE BLUTENTNAHME 53
3.4.7 HERSTELLUNG VON GEWEBE-HOMOGENISATEN 53
3.5 IMMUNHISTOCHEMISCHE METHODEN 54
3.5.1 HERSTELLUNG VON AGAROSE-GEWEBESCHNITTEN 54
3.5.1.1 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG VON AGAROSE-GEWEBESCHNITTEN 54
3.5.1.2 KONFOKALE LASER-SCANNING MIKROSKOPIE 55
3.5.2 SEMI-DUENNSCHNITTE VON KNOCHENMARK-PROBEN 55
4 ERGEBNISSE 57
4.1 CHARAKTERISIERUNG DES HYPER-IL-6-EXPRIMIERENDEN VACCINIA-VIRUS-
KONSTRUKTS GLV-1H90 IN ZELLKULTUR 57
IMAGE 3
4.1.1 VERGLEICH DER VIRALEN REPLIKATION VON GLV-1H68 UND GLV-1H90 57
4.1.2 DETEKTION DER MARKERGEN-EXPRESSION SOWIE DER EXPRESSION DES
DESIGNER- ZYTOKINS HYPER-IL-6 IN WESTERN BLOTS 59
4.1.3 DETEKTION UND QUANTIFIZIERUNG DER HYPER-IL-6-EXPRESSION MITTELS
ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT-ASSAY (ELISA) 61
4.2 NACHWEIS DER FUNKTIONELLEN AKTIVITAET DES EXPRIMIERTEN DESIGNER-
ZYTOKINS HYPER-IL-6 IN ZELLKULTUR 63
4.2.1 DETEKTION VON STAT3 UND PHOSPHO-STAT3 IN ZELLLYSATEN MITTELS
WESTERN BLOT 63
4.2.2 LOKALISATION VON STAT3 UND PHOSPHO-STAT3 IN TUMORZELLEN MIT HILFE
VON IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG 64
4.3 CHARAKTERISIERUNG DES HYPER-IL-6-EXPRIMIERENDEN
VACCINIA-VIRUSKONSTRUKTS GLV-1H90 IN EINEM DU-145 XENOGRAFT MAUS MODELL
67
4.3.1 REPLIKATION VON GLV-1H68 UND GLV-1H90 IN DU-145-TUMOR-TRAGENDEN
MAEUSEN NACH I.V. INJEKTION 67
4.3.1.1 DETEKTION DER VIRALEN REPLIKATION IN TUMOREN MITTELS FLUORESZENZ
IMAGING 67
4.3.1.2 BESTIMMUNG DER VIRUSTITER IN TUMOREN VON GLV-1H68- UND
GLV-1H90-INJIZIERTEN MAEUSEN MIT HILFE VON PLAQUE ASSAYS 69
4.3.1.3 BESTIMMUNG DER VIRUSTITER IN ORGANEN VON GLV-1H68- ODER
GLV-1H90-INJIZIERTEN MAEUSEN MIT HILFE VON PLAQUE ASSAYS 70
4.3.2 EXPRESSION VON HYPER-IL-6 IN DU-145-TUMOR-TRAGENDEN MAEUSEN NACH
I.V. INJEKTION VON GLV-1 H90 72
4.3.2.1 IMMUNHISTOLOGISCHE DETEKTION DER HYPER-IL-6-EXPRESSION IN GLV-1
H90-INFIZIERTEN TUMOREN 72
4.3.2.2 QUANTIFIZIERUNG DES DESIGNER- ZYTOKINS HYPER-IL-6 IN TUMOREN UND
BLUTSEREN VON GLV-1 H90-INJIZIERTEN MAEUSEN MITTELS ELISA 73
4.3.3 EFFEKTE DES GLV-1 H90-EXPRIMIERTEN HYPER-IL-6 AUF DIE
TUMORREGRESSION DES HUMANEN PROSTATAKARZINOMS DU-145 75
4.3.4 SYSTEMISCH-VERMITTELTE HYPER-IL-6 EFFEKTE 77
4.3.4.1 PHAENOTYPISCHE UNTERSCHIEDE VON DU-145-TUMOR-TRAGENDEN MAEUSEN
NACH INTRAVENOESER INJEKTION VON GLV-1 H90 77
4.3.4.2 HYPER-IL-6-VERMITTELTE AKTIVIERUNG DER AKUTE-PHASE-ANTWORT IN
DER LEBER VON GLV-1 H90-INJIZIERTEN MAEUSEN 81
4.3.4.3 VERBESSERTER GESUNDHEITSZUSTAND VON DU-145-TUMOR-TRAGENDEN
MAEUSEN NACH INTRAVENOESER INJEKTION VON GLV-1 H90 82
4.3.4.4 HYPER-IL-6-VERMITTELTE BEEINFLUSSUNG DER HAEMOSTASE IN
DU-145TUMOR-TRAGENDEN MAEUSEN NACH INTRAVENOESER INJEKTION VON GLV- 1H90
88
4.4 MOEGLICHE KLINISCHE ANWENDUNG VON GLV-1 H90 - KOMBINATIONSTHERAPIE
MIT CHEMOTHERAPEUTIKA AM BEISPIEL VON MITOMYCIN C 95
4.4.1 UNTERSUCHUNG VON ONKOLYTISCHEN VACCINIA-VIREN IN KOMBINATION MIT
DEM CHEMOTHERAPEUTIKUM MITOMYCIN C IN ZELLKULTUR 95
4.4.1.1 EINFLUSS VON MITOMYCIN C AUF DIE VIRALE REPLIKATION IN
ZELLKULTUR 95
4.4.1.2 EINFLUSS VON MITOMYCIN C AUF VACCINIA-VIRUS-VERMITTELTE ANTI
TUMOR-EFFEKTE IN ZELLKULTUR 96
IMAGE 4
4.4.2 KOMBINATORISCHE EFFEKTE VON GLV-1H90 UND MITOMYCIN C IM
TIERVERSUCH 98
4.4.2.1 KOMBINATORISCHE WIRKUNG VON ONKOLYTISCHEN VACCINIA-VIREN UND
MITOMYCIN C AUF DIE TUMORREGRESSION BEIM HUMANEN PROSTATAKARZINOMS
DU-145 98
4.4.2.2 EINFLUSS VON MITOMYCIN C AUF SYSTEMISCH-VERMITTELTE HYPER-IL-6
EFFEKTE 100
5 DISKUSSION 107
6 REFERENZEN 120
7 ANHANG 132
7.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 132
7.2 DANKSAGUNG 136
7.3 EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 138
8 LEBENSLAUF 139
9 PUBLIKATIONEN 140
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| spelling | Sturm, Julia 1984- Verfasser (DE-588)1029929661 aut Effekte von Hyper-IL-6 in der Vaccinia-Virus-vermittelten Krebstherapie von Julia Sturm Effects of Hyper-IL-6 in vaccinia virus-mediated cancer therapy 2011 140 Bl. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Zsfassung in dt. und engl. Sprache Würzburg, Univ., Diss., 2011 Chemotherapie (DE-588)4127083-6 gnd rswk-swf Mitomycin C (DE-588)4122286-6 gnd rswk-swf Vaccinia-Virus (DE-588)4187306-3 gnd rswk-swf Prostatakrebs (DE-588)4047511-6 gnd rswk-swf Interleukin 6 (DE-588)4246734-2 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Prostatakrebs (DE-588)4047511-6 s Vaccinia-Virus (DE-588)4187306-3 s Interleukin 6 (DE-588)4246734-2 s Chemotherapie (DE-588)4127083-6 s Mitomycin C (DE-588)4122286-6 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:20-opus-66831 https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:20-opus-66831 Resolving-System kostenfrei Volltext DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=025666287&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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