Einfluss von Hyperthermie, magnetischen Eisenoxidnanopartikeln und Mitomycin C auf die Expression des Hitze-Schock-Proteins HSP70 in vitro:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 5
2.1 BRUSTKREBS UND DESSEN AKTUELLE THERAPIEOPTIONEN 5
2.2 THERMOTHERAPIEVERFAHREN ALS KREBSTHERAPIEOPTION 6
2.3 MOLEKULARE CHAPERONE UND DIE BEDEUTUNG VON HSP70 14
3 ZIELSTELLUNG 19
4 MATERIAL UND METHODEN 25
4.1 GERAETE, MATERIALIEN UND SUBSTANZEN 25
4.1.1 GERAETE 25
4.1.2 MATERIALIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 26
4.1.3 CHEMIKALIEN 27
4.1.4 MEDIEN FUER ZELLKULTUR 28
4.1.5 ASSAYS UND KITS 28
4.1.6 MATERIALIEN FUER MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 29
4.1.7 ANTIKOERPER 29
4.1.8 PRIMER 30
4.1.9 PUFFER, LOESUNGEN UND REAGENZIEN 31
4.1.10 SOFTWARE-PROGRAMME 32
4.2 ZELLKULTUR 32
4.2.1 CHARAKTERISIERUNG DER BRUSTKREBSZELLLINIE BT-474 32
4.2.2 AUFTAUEN KRYOKONSERVIERTER BT-474-ZELLEN 33
4.2.3 MYKOPLASMEN-KONTAMINATIONSTEST 34
4.2.4 KULTIVIERUNG VON BT-474-ZELLEN 34
4.2.5 PASSAGIEREN BZW. ZELLERNTE VON BT-474-ZELLEN 34
4.2.6 ZELLZAHLBESTIMMUNG MIT HILFE DES CASY-ZELLZAEHLER 35
4.2.7 KRYOKONSERVIERUNG VON BT-474-ZELLEN 36
4.3 EXPRESSIONSANALYSE DES HITZE-SCHOCK-PROTEINS HSP70 ZUR IN VITRO
CHARAKTERISIERUNG DES MOLEKULARBIOLOGISCHEN EFFEKTES VON HYPERTHERMIE,
MAGNETISCHER EISENOXIDNANOPARTIKEL UND MITOMYCIN C 36
4.3.1 BEHANDLUNG VON BT-474-ZELLEN MIT VERSCHIEDENEN THERAPIEMODALITAETEN
ZUR EXPRESSIONSANALYSE VON HSP70 IN VITRO 36
4.3.2 MRNA-EXPRESSIONSANALYSE VON HSP70 IN BT-474-ZELLEN 46
4.3.3 PROTEINEXPRESSIONSANALYSE VON HSP70 IN BT-474-ZELLEN 54
4.4 UNTERSUCHUNG DES ZELLSTOFFWECHSELS VON BT-474-ZELLEN ZUR IN VITRO
CHARAKTERISIERUNG DES THERAPEUTISCHEN EFFEKTES VON HYPERTHERMIE,
MAGNETISCHEN EISENOXIDNANOPARTIKELN UND MITOMYCIN C 61
4.4.1 BESTIMMUNG DER INTRAZELLULAEREN NADH/NADPH-KONZENTRATION ZUR
ANALYSE DER THERAPEUTISCHEN INDUKTION VON ZELLTOD 64
4.4.2 BESTIMMUNG DER INTRAZELLULAEREN ATP-KONZENTRATION ZUR EVALUATION
DES INDUZIERTEN ZELLTODMECHANISMUS 65
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INHALTSVERZEICHNIS
4.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG 67
5 ERGEBNISSE 68
5.1 DIE EXPRESSION DES HITZE-SCHOCK-PROTEINS HSP70 ZUR IN VITRO
CHARAKTERISIERUNG DES MOLEKULARBIOLOGISCHEN EFFEKTES VON HYPERTHERMIE,
MAGNETISCHER EISENOXIDNANOPARTIKEL UND MITOMYCIN C 68
5.1.1 DER DIE HSP70-EXPRESSION STEIGERNDE EINFLUSS VON HYPERTHERMIE 68
5.1.2 DER KONZENTRATIONSABHAENGIGE EINFLUSS AUF DIE HSP70-EXPRESSION
EINER KOMBINIERTEN APPLIKATION MAGNETISCHER EISENOXIDNANOPARTIKEL UND
HYPERTHERMIE 78
5.1.3 DER KONZENTRATIONSABHAENGIGE EINFLUSS AUF DIE HSP70-EXPRESSION
EINER KOMBINIERTEN APPLIKATION VON MITOMYCIN C UND HYPERTHERMIE 82
5.1.4 DER KONZENTRATIONSUNABHAENGIGE EINFLUSS EINER KOMBINIERTEN
APPLIKATION MAGNETISCHER EISENOXIDNANOPARTIKEL, HYPERTHERMIE UND
MITOMYCIN C AUF DIE GESTEIGERTE EXPRESSION VON HSP70 85
5.2 DIE ZELLULAERE STOFFWECHSELSITUATION ZUR IN VITRO CHARAKTERISIERUNG
DES THERAPEUTISCHEN EFFEKTES VON HYPERTHERMIE, MAGNETISCHEN
EISENOXIDNANOPARTIKELN UND MITOMYCIN C.. 89 5.2.1 DIE VERMINDERTE
INTRAZELLULAERE NADH/NADPH-KONZENTRATION 89
5.2.2 DIE UNVERAENDERTE INTRAZELLULAERE ATP-KONZENTRATION 92
6 DISKUSSION 94
7 SCHLUSSFOLGERUNG 135
8 BIBLIOGRAFIE 136
9 ANHANG 147
9.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 147
9.2 TABELLENVERZEICHNIS 158
9.3 FORMELVERZEICHNIS 159
9.4 DANKSAGUNG 160
9.5 LEBENSLAUF 161
9.6 EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 164
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