Die Bedeutung von verkürzten Spleißvarianten des Lamin A-Gens für die Meiose und für die Pathogenese von Laminopathien:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 7
SUMMARY 9
1. EINLEITUNG 1 1
1.1. LAMINE UND DIE KERNHUELLE 12
1.2. LAMINE UND DIE GAMETOGENESE 17
1.3. LAMINE UND LAMIN-ASSOZIIERTE KRANKHEITEN 22
2. TEIL A: DIE ROLLE DES VERKUERZTEN A-TYP LAMINS C2 WAEHREND DER OOGENESE
DER MAUS 28
2.1. ERGEBNISSE 28
2.1.1. DAS EXPRESSIONSMUSTER VON A-TYP LAMINEN WAEHREND DER OOGENESE 28
2.1.2. IN LAMIN C2-DEFIZIENTEN OOCYTEN IST DIE SYNAPSE DER HOMOLOGEN
CHROMOSOMEN GESTOERT 3 1
2.1.3. DAS FEHLEN VON LAMIN C2 IN OOCYTEN BEEINTRAECHTIGT DIE HOMOLOGE
REKOMBINATION 35
2.1.4. DIE MOLEKULARE EIGENSCHAFTEN DES MEIOSESPEZIFISCHEN LAMIN C2
UNTERSCHEIDEN SICH
ERHEBLICH VON DENEN SOMATISCHER LAMINE 39
2.2. DISKUSSION 49
3. TEIL B: DIE LAMIN A MUTANTE AA8-11 PERSISTIERT IN DER LMNA 1
MAUSLINIE 56
3.1. ERGEBNISSE 56
3.1.1. MEHRERE A-TYP LAMIN-ANTIKOERPER REAGIEREN MIT EINEM
KERNHUELL-ANTIGEN VERMEINTLICH A- TYP LAMIN-DEFIZIENTER ZELLEN 56
3.1.2. KLONIERUNG EINES BISHER UNENTDECKTEN LMNA GENPRODUKTS AUS LMNA 1
MEFS UND
GEWEBEN 59
3.1.3. LAMIN AA8-11 IST IN LMNA 1 ZELLEN ALS STABILES PROTEIN
VORHANDEN ^ 6 1
3.2. DISKUSSION 67
4. MATERIAL 74
4.1. ORGANISMEN 74
4.1.1. TIERE 74
4.1.2. ZELLLINIEN 74
4.1.3. BAKTERIENSTAEMME 74
4.2. ANTIKOERPER 74
4.3. MOLEKULARBIOLOGISCHES MATERIAL 75
4.3.1. OLIGONUKLEOTIDE 75
4.3.2. VEKTOREN 76
4.3.3. REKOMBINANTE DNA-KONSTRUKTE 78
4.3.4. ENZYME, KITS UND VERBRAUCHSMATERIAL 79
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IMAGE 2
4.4. CHEMIKALIEN 80
4.5. GERAETE 80
4.6. COMPUTERPROGRAMME 80
5. METHODEN 8 1
5.1. MIKROBIOLOGISCHE METHODEN 8 1
5.1.1. BAKTERIEN-FLUESSIGKULTUR...: 8 1
5.1.2. KULTIVIERUNG VON BAKTERIEN AUF AGAR 8 1
5.1.3. HERSTELLUNG CHEMISCH KOMPETENTER BAKTERIEN 8 1
5.1.4. TRANSFORMATION VON BAKTERIEN 82
5.2. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 82
5.2.1. ISOLATION VON PLASIMD-DNA AUS BAKTERIEN 82
5.2.2. ISOLATION VON RNA AUS KULTURZELLEN UND GEWEBE 82
5.2.3. ISOLATION VON GENOMISCHER DNA AUS GEWEBE 82
5.2.4. AMPLIFIZIERUNG VON DNA DURCH POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR) 83
5.2.5. AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 84
5.2.6. GELEXTRAKTION VON DNA 85
5.2.7. HERSTELLUNG REKOMBINANTER DNA (KLONIERUNG) 85
5.3. PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 86
5.3.1. SDS-PAGE 86
5.3.2. SILBERFAERBUNG VON PROTEINGELEN 88
5.3.3. WESTERN BLOT MIT IMMUNDETEKTION 88
5.3.4. HOCHSALZEXTRAKTION VON PROTEINEN AUS KULTURZELLEN 89
5.3.5. LONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE . % 9 1
5.3.6. METHANOL/CHLOROFORM-FAELLUNG VON PROTEINEN 92
5.3.7. MASSENSPEKTROMETRIE 92
5.4. ZELLKULTUR 92
5.4.1. KULTIVIEREN UND PASSAGIEREN VON KULTURZELLEN ( LMNA MEFS) 92
5.4.2. TRANSFEKTION VON KULTURZELLEN MIT MATRA 93
5.5. MIKROSKOPISCHE METHODEN 93
5.5.1. ANFERTIGUNG VON GEFRIERSCHNITTEN 93
5.5.2. ANFERTIGUNG VON PARAFFINSCHNITTEN VON EMBRYONALEM OVAR 94
5.5.3. OOCYTEN-SPREITUNG VON EMBRYONALEM OVAR 94
5.5.4. IMMUNFLUORESZENZ-ANALYSE VON KULTURZELLEN UND GEFRIERSCHNITTEN 95
5.5.5. IMMUNFLUORESZENZ-ANALYSE VON PARAFFINSCHNITTEN 96
IMAGE 3
5.5.6. IMMUNFLUORESZENZ-ANALYSE VON SPREITUNGEN 96
5.5.7. FRAP 97
5.5.8. FLIP 99
6. LITERATURVERZEICHNIS 101
ABKUERZUNGEN 111
ERKLAERUNG : 112
LEBENSLAUF 113
DANKSAGUNG 115
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