Strukturelle Analyse der Reninfreisetzung in juxtaglomerulären Epitheloidzellen:
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INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG 6
2. EINLEITUNG 10
2.1. DAS RENIN-ANGIOTENSIN-ALDOSTERON SYSTEM 11
2.2. RENINSYNTHESE UND -SEKRETION IN DER JUXTAGLOMERULAEREN
EPITHELOIDZELLE 13
2.3. REGULATION DER RENINSYNTHESE UND -SEKRETION 14
2.3.1. REGULATION DURCH LOKALE UND SYSTEMISCHE FAKTOREN 14
2.3.1.1. SYSTEMISCHER BLUTDRUCK 14
2.3.1.2. SALZHAUSHALT 15
2.3.1.3. SYMPATHISCHES NERVENSYSTEM 17
2.3.1.4. ANGIOTENSIN II 17
2.3.1.5. WEITERE HORMONE UND AUTACOIDE 18
2.3.2. REGULATION AUF ZELLULAERER EBENE 19
2.3.2.1. ZYKLISCHES AMP UND DER CAMP-SIGNALWEG 19
2.3.2.2. INTRA- UND EXTRAZELLULAERE CA 2+ -KONZENTRATION 20
2.3.2.3. ZYKLISCHES GMP UND DER CGMP-SIGNALWEG 2 1
2.4. SEKRETIONSMECHANISMEN 22
2.4.1. DER KLASSISCHE REGULIERTE SEKRETIONSMECHANISMUS 23
2.4.1.1 SNARE-PROTEINE UND DER SNARE-KOMPLEX 23
2.4.1.2. DER SNARE-ZYKLUS 24
2.4.1.3. RAB-PROTEINE UND RAB-EFFEKTOREN 27
2.4.1.4. CA 2+ -BINDENDE PROTEINE 28
2.4.2. DER KISS-AND-RUN -MECHANISMUS 29
2.4.3. DIE REGULIERTE LYSOSOMALE SEKRETION 29
2.4.4. DER COMPOUND-EXOZYTOSE-MECHANISMUS 30
2.5. ZIELSETZUNG 32
3. MATERIAL UND METHODEN 35
3.1. MATERIAL 36
3.1.1. GERAETE 36
3.1.2. VERBRAUCHSMATERIAL 37
3.1.3. CHEMIKALIEN, ENZYME, KITS 38
* 3 -
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IMAGE 2
3.1.4. PRIMER 40
3.1.5. ANTIKOERPER 40
3.1.6. PUFFER UND LOESUNGEN 42
3.1.7. SOFTWARE UND INTERNETDIENSTE 45
3.2. METHODEN 45
3.2.1. VERSUCHSTIERE 45
3.2.2. HISTOLOGIE 46
3.2.2.1. FIXIERUNG DES NIERENGEWEBES 46
3.2.2.2. EINBETTUNG IN PARAFFIN 46
3.2.2.3. ANFERTIGUNG VON PARAFFINSCHNITTEN UND ENTPARAFFINIERUNG 47
3.2.2.4. IMMUNOHISTOCHEMISCHE FAERBUNG ....47
3.2.2.5. LICHTMIKROSKOPIE - AKQUISITION UND DIGITALISIERUNG 49
3.2.3. ISOLIERT PERFUNDIERTE NIERE (IPN) 49
3.2.3.1. PRAEPARATION DER NIEREN 49
3.2.3.2. PHARMAKOLOGISCHE STIMULATION DER RENINSEKRETION 50
3.2.3.4. FIXIERUNG DES NIERENGEWEBES ! 50
3.2.4. TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE (TEM) 50
3.2.4.1. EINBETTUNG UND TRIMMEN 50
3.2.4.2. ANFERTIGEN VON ULTRADUENNSCHNITTEN 52
3.2.4.3. KONTRASTIEREN DER SCHNITTE 52
3.2.4.4. ELEKTRONENMIKROSKOPIE - AKQUISITION UND DIGITALISIERUNG 52
3.2.5. DREIDIMENSIONALE REKONSTRUKTION 53
3.2.5.1. DATENAUFBEREITUNG MITTELS IMAGEJ 53
3.2.5.2. REKONSTRUKTION MITTELS AMIRA 53
3.2.6. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 55
3.2.6.1. GENOTYPISIERUNG 55
3.2.6.2. BESTIMMUNG DER RENINAKTIVITAET 56
4. ERGEBNISSE 57
4.1. MORPHOLOGIE DER RENINSPEICHERVESIKEL IN JG-ZELLEN EINER
WILDTYP-MAUS 58
4.1.1. UNTERSUCHUNG VON UNSTIMULIERTEN JG-ZELLEN 58
4.1.2. UNTERSUCHUNG VON STIMULIERTEN JG-ZELLEN 60
4.1.2.1. MESSUNG DER RENINSEKRETIONSRATE UNTER KONTROLLIERTEN
BEDINGUNGEN 61
4.1.2.2. STIMULATION MIT ISOPROTERENOL 62
4.1.2.3. STIMULATION MIT EGTA 64
* 4 -
IMAGE 3
4.1.2.4. STIMULATION MIT ISOPROTERENOL UND EGTA 67
4.2. MORPHOLOGIE DER RENINSPEICHERVESIKEL IN JG-ZELLEN EINER BEIGE-MAUS
78
4.2.1. UNTERSUCHUNG VON UNSTIMULIERTEN JG-ZELLEN EINER BEIGE-MAUS 79
4.2.2. UNTERSUCHUNG VON STIMULIERTEN JG-ZELLEN EINER BEIGE-MAUS 82
4.2.2.1. MESSUNG DER RENINSEKRETIONSRATE UNTER KONTROLLIERTEN
BEDINGUNGEN 82
4.2.2.2. STIMULATION MIT ISOPROTERENOL UND EGTA 83
4.3. MORPHOLOGIE DER SPEICHERVESIKEL IN JG-ZELLEN EINER
REN-LD-CRE/CRE-MAUS 86
4.4. IMMUNHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNG VON JG-ZELLEN 89
5. DISKUSSION 92
5.1. DIE MORPHOLOGIE VON RENINSPEICHERVESIKELN IN JG-ZELLEN DES WILDTYPS
93
5.2. DER EXOZYTOSEMECHANISMUS IN JG-ZELLEN 94
5.3. UNTERSUCHUNGEN DER VESIKELMORPHOLOGIE IN JG-ZELLEN DER BEIGE-MAUS
100
5.4. UNTERSUCHUNGEN DER VESIKELMORPHOLOGIE IN JG-ZELLEN DER
REN-LD-CRE/CRE-MAUS 102
5.5. HISTOLOGISCHER NACHWEIS VON SNARE-PROTEINEN IN JG-ZELLEN 103
6. LITERATURVERZEICHNIS 105
7. ANHANG 130
7.1. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 130
7.2. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 132
7.3. VEROEFFENTLICHUNGEN 135
7.4. DANKSAGUNG 135
* 5 -
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