Untersuchung von humoralen und zellulären Immunabwehrmechanismen gegen das murine Cytomegalovirus:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG UND SUMMARY 3
1.1 ZUSAMMENFASSUNG 3
1.2 SUMMARY 4
2 EINLEITUNG UND FRAGESTELLUNGEN 5
3 ERGEBNISSE DER 1. AUFGABENSTELLUNG 14
3.1 GENERIERUNG DER REKOMBINANTEN VIREN 14
3.1.1 KONSTRUKTION DER BACS (GALK REKOMBINATION) 14
3.1.2 KONSTRUKTION DER REKOMBINATIONSFRAGMENTE 16
3.1.3 BESTAETIGUNG UND REKONSTITUTION DER REKOMBINANTEN VIREN 18
3.2 IN VITRO CHARAKTERISIERUNG DER REKOMBINANTEN VIREN 19
3.3 IN VIVO CHARAKTERISIERUNG DER REKOMBINANTEN VIREN 23
3.4 SCHUTZVERSUCHE 26
4 ERGEBNISSE DER 2. AUFGABENSTELLUNG 32
4.1 VERGLEICH DES MCMV-INFEKTIONSVERLAUFES IN MAEUSEN MIT UND OHNE CD8 +
T-ZELLEN.. 32 4.2 VERGLEICH DER MCMV-INFEKTION IN CDS 7 UND CDS^JHT 7
MAEUSEN: 37
4.3 PROTEKTIONSPOTENTIAL VON CD4 + ZELLEN 39
4.4 DEPLETION VERSCHIEDENER ZELLTYPEN VOR INFEKTION MIT MCMV 4 1
4.5 ZYTOTOXISCHES POTENTIAL VON TCRASS + UND TCRY6 + T-ZELLEN IN VITRO 48
4.6 ADOPTIVER TRANSFER VON TCRASS + UND TCRY6 + T-ZELLEN NACH INFEKTION
MIT MCMV 50
5 DISKUSSION 53
5.1 VIRUSKONTROLLE DURCH ADCC 53
5.2 MCMV IMMUNKONTROLLE IN CDS 7 MAEUSEN 57
5.3 DN T-ZELLEN 58
5.4 TCRY6 + T-ZELLEN 59
6 MATERIAL 66
6.1 PLASTIK UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 66
6.2 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 66
6.3 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 66
6.4 BIOLOGISCHE MATERIALIEN 69
6.4.1 BAKTERIEN UND VIRUSSTAEMME 69
6.4.2 NUKLEINSAEUREN UND ENZYME 69
6.4.3 ZELLLINIEN 7 1
1
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IMAGE 2
6.4.4 IN VITRO VERWENDETE ANTIKOERPER UND KONJUGATE 72
6.4.5 PROTEINE UND IN VIVO APPLIZIERTE REAGENZIEN 73
6.4.6 VERSUCHSTIERE 73
6.5 GERAETE 74
7 METHODEN 75
7.1 GENERIERUNG DER REKOMBINANTEN HGB-VIREN 75
7.1.1 KLONIERUNGEN 75
7.1.2 SEQUENZIERUNG 77
7.1.3 TRANSFORMATION VON PLASMIDEN UND BACS 77
7.1.4 TRANSFEKTION DER BACS UND REKONSTITUTION DER VIREN 77
7.1.5 IN VITRO AMPLIFIKATION UND REINIGUNG VON VIRIONEN 77
7.2 WEITERE MOLEKULARBIOLOGISCHE UND ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 78
7.2.1 QUANTITATIVE PROTEINBESTIMMUNG 78
7.2.2 ZELLKULTURVERFAHREN 78
7.3 IMMUNOLOGISCHE METHODEN 8 1
7.3.1 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG 8 1
7.3.2 ENZYMGEKOPPELTER IMMUNOADSORPTIONSTEST (ELISA) 8 1
7.3.3 SDS-PAGE UND WESTERN BLOT ANALYSE (WB) 82
7.3.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 83
7.4 TIEREXPERIMENTELLE TECHNIKEN 84
7.4.1 INFEKTIONEN UND UEBERLEBEN 84
7.4.2 BLUTENTNAHME UND SERUMGEWINNUNG 84
7.4.3 ANALYSE DER IN VIVO BIOLUMINESZENZ 85
7.4.4 BESTIMMUNG DER VIRUSLAST IN DEN ORGANEN 85
7.4.5 IN VIVO DEPLETIONEN 86
7.4.6 ISOLATION UND AUFREINIGUNG MURINER ZELLEN 86
7.4.7 ADOPTIVER ZELL- UND SERUMTRANSFER 88
7.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG 88
8 LITERATURVERZEICHNIS 89
9 ABKUERZUNGEN 105
2
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