Die Rolle von Peroxisome Proliferator-Activated Receptor gamma Coactivator-1alpha (PGC-1a) in der Pathogenese der Sklerodermie:
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2012
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IMAGE 1
INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
1.1 WISSENSCHAFTLICHER HINTERGRUND 1
1.2 METHODEN 1
1.3 ERGEBNISSE 1
1.4 SCHLUSSFOLGERUNG 2
2 ABSTRACT 3
2.1 BACKGROUND 3
2.2 METHODS 3
2.3 RESULTS 3
2.4 CONCLUSION 4
3 EINLEITUNG 5
3.1 SKLERODERMIE 5
3.1.1 BEGRIFFSDEFINITION UND KLINISCHE KLASSIFIKATION 5
3.1.2 EPIDEMIOLOGIE 6
3.1.3 AETIOLOGIE 7
3.1.4 PATHOGENESE 7
3.2 PGC-1A 11
3.2.1 UEBERBLICK 11
3.2.2 PGC-1 A ALS TRANSKRIPTIONS-KOAKTIVATOR 11
3.2.3 INDUKTION VON PGC-1 A UND PHYSIOLOGISCHE ROLLE IM
ZELL-METABOLISMUS 12
3.2.4 MECHANISMUS UND EFFEKTE DER PGC-1 A-AKTIVIERUNG UEBER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 12
3.2.4.1 MITOCHONDRIALE EFFEKTE 13
3.2.4.2 GEWEBESPEZIFISCHE EFFEKTE 14
3.2.5 REGULATION VON PGC-1 A 14
3.2.6 PPARY BEI FIBROTISCHEN VORGAENGEN 16
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IMAGE 2
II
3.2.7 PGC-1A BEI FIBROTISCHEN VORGAENGEN UND
VASKULONEOGENESE 17
4 MATERIAL UND METHODEN 19
4.1 MATERIAL 19
4.1.1 CHEMIKALIEN 19
4.1.2 HILFSMATERIALIEN 23
4.1.3 GERAETE 24
4.1.4 SPEZIFISCHE SOFTWARE 25
4.1.5 KOMMERZIELLE PAKETE (KITS) 26
4.1.6 ANTIKOERPER 26
4.1.7 PRIMER 27
4.1.8 VERSUCHSTIERE 27
4.1.9 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 28
4.1.9.1 PUFFER UND LOESUNGEN FUER HISTOLOGIE UND IMMUNHISTOCHEMIE 28
4.1.9.2 MEDIEN UND PUFFER FUER ZELLKULTUR 29
4.1.9.3 PUFFER FUER HYDROXYPROLIN-ASSAY 29
4.2 METHODEN 29
4.2.1 MAUSMODELLE. 29
4.2.1.1 MAUSMODELL DER BLEOMYCIN-INDUZIERTEN DERMALEN FIBROSE 30
4.2.1.2 TSK-1-MAUSMODELL 31
4.2.1.3 MAUSMODELL DER ADENOVIRALEN UEBEREXPRESSION VON KONSTITUTIV
AKTIVEM TGF-SS-REZEPTOR I (TGF-SS-RI CA ) 33
4.2.1.4 MAUSMODELL DER BLEOMYCIN-INDUZIERTEN DERMALEN FIBROSE BEI
PGC-W'-MAEUSEN 34
4.2.2 HISTOLOGIE 35
4.2.2.1 HAUTDICKE 35
4.2.2.2 KOLLAGENFASERDARSTELLUNG 36
4.2.2.3 ENTZUENDUNGSZELLEN 37
IMAGE 3
III
4.2.3 IMMUNHISTOCHEMIE 38
4.2.3.1 PGC-1A 38
4.2.3.2 MYOFIBROBLASTEN 39
4.2.3.3 MAKROPHAGEN 40
4.2.4 KOLLAGEN-QUANTIFIZIERUNG 41
4.2.4.1 ENTNAHME VON GEWEBE 41
4.2.4.2 HYDROXYPROLIN-ASSAY 42
4.2.5 ZELLKULTUR 43
4.2.6 RNA-ISOLATION 44
4.2.6.1 RNA-ISOLATION AUS GEWEBE 44
4.2.6.2 RNA-ISOLATION AUS FIBROBLASTEN 45
4.2.7 REVERSE TRANSKRIPTION 45
4.2.8 REAL-TIME PCR 47
4.2.9 STATISTIK 50
5 ERGEBNISSE 51
5.1 DIE EXPRESSION VON PGC-1A IST BEI SSC ERHOEHT 51
5.1.1 PGC-1AWIRD IN HUMANEN SSC-GEWEBEBIOPSIEN UEBEREXPRIMIERT 51
5.1 ;2 PGC-1A WIRD IN HUMANEN SSC-FIBROBLASTEN UEBEREXPRIMIERT 52
5.1.3 PGC-1A WIRD IM MODELL DER BLEOMYCIN-INDUZIERTEN DERMALEN FIBROSE
UEBEREXPRIMIERT 53
5.1.4 PGC-1A WIRD IM TSK-1-MAUSMODELL UEBEREXPRIMIERT 55
5.1.5 PGC-1A WIRD IM TGF-SS-RI CAE -MAUSMODELL UEBEREXPRIMIERT 58
5.2 KNOCKOUT VON PGC-1A HEMMT FIBROTISCHE EFFEKTE IM MAUSMODELL DER
BLEOMYCIN-INDUZIERTEN DERMALEN FIBROSE 60
5.2.1 KNOCKOUT VON PGC-1A VERHINDERT EINE BLEOMYCINVERMITTELTE ZUNAHME
DER HAUTDICKE 61
5.2.2 KNOCKOUT VON PGC-1A VERHINDERT EINE BLEOMYCINVERMITTELTE
STEIGERUNG DER KOLLAGEN-PRODUKTION 63
IMAGE 4
I V
5.2.3 KNOCKOUT VON PGC-1A VERHINDERT EINE BLEOMYCINVERMITTELTE ZUNAHME
DER MYOFIBROBLASTEN-ANZAHL 66
5.2.4 KNOCKOUT VON PGC-1A HEMMT EINE BLEOMYCINVERMITTELTE ZUNAHME DER
ANZAHL VON DERMALEN ENTZUENDUNGSZELLEN 68
5.2.5 KNOCKOUT VON PGC-1A VERHINDERT EINE BLEOMYCINVERMITTELTE ZUNAHME
DER MAKROPHAGEN-ANZAHL 69
5.3 ZYTOKIN-STIMULATION SUPPRIMIERT PGC-1A IN FIBROBLASTEN VON NORMALER
UND SSC-HAUT 71
5.3.1 PGC-1A IST IN SSC-FIBROBLASTEN NACH STIMULATION FUER 24 H MIT PDGF
UND TGF-SS SUPPRIMIERT 72
5.3.2 PGC-1A IST IN FIBROBLASTEN AUS NORMALER HAUT NACH STIMULATION FUER
24 H MIT TGF-SS SUPPRIMIERT 73
5.3.3 DIE PGC-1A-SUPPRESSION IN FIBROBLASTEN AUS NORMALER HAUT DURCH
STIMULATION MIT TGF-SS IST ZEITABHAENGIG 74
6 DISKUSSION 79
7 LITERATURVERZEICHNIS 89
8 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 117
9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 125
10 ANHANG 127
10.1 EINHEITEN 127
10.2 DIMENSIONEN 127
10.3 VERHAELTNISANGABEN 127
11 DANKSAGUNG 129
12 LEBENSLAUF 131 |
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