Shp2 reguliert die Differenzierung intestinaler Epithelzellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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| Veröffentlicht: |
2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 6
2 EINLEITUNG 8
2.1 DIE TYROSINPHOSPHATASE SHP2 8
2.1.1 DIE PHOSPHATASE SHP2 - STRUKTUR UND AKTIVITAET 8
2.1.2 SHP2-MUTATIONEN - GENETISCHE ERKRANKUNGEN 8
2.1.3 SHP2 IN DER ENTWICKLUNG 9
2.1.4 SHP2 IST IN VERSCHIEDENE SIGNALTRANSDUKTIONSWEGE INTEGRIERT 10
2.2 ENTWICKLUNGSBIOLOGIE DES DARMS 13
2.3 FUNKTION DES DARMS 15
2.3.1 STAMMZELLEN UND ZELLTYPEN IM DARMEPITHEL 15
2.3.2 DIE INTESTINALEN STAMMZELLEN 17
2.4 SIGNALWEGE REGULIEREN DARMEPITHEL UND ZELLDIFFERENZIERUNG 18
2.4.1 DER WNT-SIGNALWEG IM DARMEPITHEL 18
2.4.2 DER NOTCH-SIGNALWEG IM DARMEPITHEL 20
2.4.3 INTESTINALE STAMMZELLEN - WNT- UND NOTCH-SIGNALWEG 2 0
2.4.4 REZEPTORTYROSINKINASE-SIGNALWEGE IM DARMEPITHEL. KINASEN UND
PHOSPHATASEN 21
2.5 ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT 27
3 ERGEBNISSE 28
3.1 MORPHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN DES DARMEPITHELS DURCH DEN VERLUST AN
SHP2..28
3.2 VERLUST AN SHP2 VERRINGERT GOBLET-ZELLEN 2 9
3.3 ZUNAHME AN PSTAT3 IN SHP2-MUTANTEN 33
3.4 ZELLULAERE VERAENDERUNGEN IM DICKDARM DURCH DEN VERLUST AN SHP2 34
3.5 ENTEROENDOKRINE ZELLEN UND BESCHLEUNIGTE DIFFERENZIERUNG VON
PANETH-ZELLEN... 34
3.6 VERLUST AN AKTIVITAET DES MAPK-SIGNALWEGS DURCH DEN VERLUST AN SHP2
36
3.7 PHAENOTYP-RETTUNG DURCH AKTIVIERUNG DES MAPK-SIGNALWEGES 39
3.8 SHP2-VERLUST VERRINGERT GOBLET-ZELLPRODUKTION IN NOTCH-INAKTIVEM
INTESTINALEN
EPITHEL 45
2
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IMAGE 2
3.9 IN VITRO- ANALYSE - LS174T GOBLET-ZELL-ASSAY 4 6
3.10 ANALYSE DER GENEXPRESSION - ILLUMINA-ARRAY UND QRT-PCR 50
3.11 AKTIVITAET VON SHP2 BEEINFLUSST DIE LGR5-STAMMZEL!EN 53
4 DISKUSSION 55
4.1 VERLUST AN SHP2 INDUZIERT EINE KOLITIS - IST ES EIN NEUES
KOLITIS-MAUSMODEL? 55
4.2 SHP2 REGULIERT DIE DIFFERENZIERUNG DER GOBLET-ZELLEN 56
4.3 SHP2 IST INVOLVIERT IN DIE TERMINALEN DIFFERENZIERUNG DER
PANETH-ZELLEN 59
4.4 SHP2 IM Y-SEKRETASE-ABHAENGIGEN GOBLET-PANETH-ZELLASSAY 60
4.5 SHP2 UND DER PI3K/AKT-SIGNALWEG 6 2
4.6 SHP2 UND DIE PROLIFERATION IM KRYPT-KOMPARTIMENT 63
4.7 SHP2 IM SIGNALWEG 63
4.7.1 WELCHE RTK STEUERT DIE SHP2-AKTIVIERUNG? 63
4.7.2 SHP2 UND DER WNT-SIGNALWEG 65
4.7.3 REGULIERT SHP2 UEBER ID2 DIE DIFFERENZIERUNG DER GOBLET-ZELLEN UND
DER
ENTEROZYTEN? 66
4.8 SHP2 UND DER MAPK-SIGNALWEG REGULIEREN DIE ZELLDIFFERENZIERUNG DES
DARMEPITHELS 67
5 MATERIAL UND METHODEN 71
5.1 KRYPT/VILLI-FRAKTIONIERUNG 71
5.2 PROTEINLYSATE UND WESTERNBLOT 71
5.3 PARAFFINSCHNITTE 72
5.4 IHC UND IMMUNFLOURESZENZ 73
5.5 MAUSLINIEN UND GENOTYPISIERUNG 74
5.6 AUFREINIGUNG DER RNA UND GENERIERUNG VON CDNA, QRT-PCR 75
5.7 ZELLKULTUR 78
5.8 LS174T GOBLET-ZELL-ASSAY 78
5.9 GENERIERUNG DER SHRNA FUER SHP2 78
5.10 TRANSFEKTION 79
5.11 GENERIERUNG VON INDUZIERBAREN SHSHP2 ZELLENLINIEN 80
3
IMAGE 3
5.12 ILLUMINA-ARRAY 80
6 TABELLENVERZEICHNIS 81
7 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 82
8 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 84
9 LITERATURVERZEICHNIS 86
10 PUBLIKATIONSVERZEICHNIS 98
11 DANKSAGUNG 99
12 ERKLAERUNG 100
4
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