Zelluläre Seneszenz von Chondrozyten unter oxidativem Stresseinfluss:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS I
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
ABBILDUNGSVERZEICHNIS IV
TABELLENVERZEICHNIS VI
ABKUERZUNGS- UND SYMBOLVERZEICHNIS VII
1 EINLEITUNG 1
1.1 THERAPIE VON (OSTEO-)CHONDRALEN DEFEKTEN 2
1.2 DAS PHAENOMEN D E R ZELLULAEREN SENESZENZ UND IHRE BEDEUTUNG 3
1.3 SIGNALWEGE D E R ZELLULAEREN S E N E S Z E N Z 5
1.4 REAKTIVE SAUERSTOFFSPEZIES UND SENESZENZ 10
2 FRAGESTELLUNG 1 3
3 MATERIAL UND METHODEN 1 4
3.1 MATERIAL 14
3.1.1 GERAETE UND HILFSMITTEL 14
3.1.2 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 16
3.1.3 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 19
3.2 BIOLOGISCHES UNTERSUCHUNGSMATERIAL 2 2
3.3 METHODEN 2 3
3.3.1 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 2 3
3.3.1.1 GEWINNUNG UND KULTIVIERUNG H U M A N E R CHONDROZYTEN.. 2 3
3.3.1.2 BESTIMMUNG VON ZELLZAHL UND ZELLPROLIFERATION 2 4
3.3.2 BESTIMMUNG D E R LETALEN H 202-DOSIS 2 5
3.3.3 SENESZENZNACHWEIS MITTELS X-GAL-FAERBUNG 2 6
3.3.4 BESTIMMUNG DERTELOMERLAENGE (TRF-ASSAY) 2 6
3.3.4.1 DNA-ISOLATION 2 6
3.3.4.2 BESTIMMUNG D E R DNA-KONZENTRATION 2 7
3.3.4.3 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 2 7
3.3.4.4 RESTRIKTION 2 8
3.3.4.5 SOUTHERN BLOT 3 0
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IMAGE 2
II INHALTSVERZEICHNIS
3 . 3 . 4 . 6 HYBRIDISIERUNG 3 2
3.3.4.7 DETEKTION DERTELOMER-RESTRIKTIONSFRAGMENTE 3 3
3.3.4.8 AUSWERTUNG UND BERECHNUNG D E R MITTLEREN
RESTRIKTIONSFRAGMENTLAENGEN 3 4
3.3.5 ANALYSE D E R GENEXPRESSION 3 6
3.3.5.1 RNA-ISOLATION 3 6
3.3.5.2 DNASE-VERDAU 3 6
3.3.5.3 MESSUNG D E R RNA-KONZENTRATION 3 7
3.3.5.4 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 3 7
3.3.5.5 CDNA-SYNTHESE 3 7
3.3.5.6 PCR 3 8
3.3.6 STATISTISCHE AUSWERTUNG 3 9
4 ERGEBNISSE 4 0
4.1 OPTIMIERUNG DES TRF-ASSAYS 4 0
4.1.1 DNA-ISOLATION 4 0
4 . 1 . 2 HYBRIDISIERUNG UND DETEKTION 4 1
4 . 2 BESTIMMUNG D E R LETALEN H 202-DOSIS 4 1
4.3 ANALYSE D E R ZELLPROLIFERATION 4 3
4.3.1 PROLIFERATIONSVERHALTEN D E R CHONDROZYTEN UNTER
KONTROLLBEDINGUNGEN 4 3
4.3.2 PROLIFERATIONSVERHALTEN D E R CHONDROZYTEN U N T E R CHRONISCH
OXIDATIVEM STRESS 4 4
4.3.3 PROLIFERATIONSVERHALTEN NACH A K U T OXIDATIVEM STRESS 4 5
4 . 4 ANALYSE D E R ZEILMORPHOLOGIE 4 6
4 . 5 ANALYSE D E R SA SS-GALAKTOSIDASE EXPRESSION 4 8
4 . 6 ANALYSE D E R TELOMERLAENGE 5 0
4.6.1 TELOMERLAENGE ZUNEHMEND S E N E S Z E N T E R CHONDROZYTEN U N T E
R
KONTROLLBEDINGUNGEN UND CHRONISCH OXIDATIVEM S T R E S S 5 0
4 . 6 . 2 EINFLUSS VON A K U T OXIDATIVEM STRESS A U F DIE TELOMERLAENGE
J U N G E R
UND ALTER CHONDROZYTEN 5 2
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
4 . 7 ANALYSE D E R GENEXPRESSION 5 3
4.7.1 EXPRESSION VON TRF1 UND TRF2 5 3
4.7.2 EXPRESSION VON XRCC5 5 5
4.7.3 EXPRESSION VON SIRT1 5 6
4 . 7 . 4 EXPRESSION VON P21 5 7
5 DISKUSSION 5 9
5.1 DISKUSSION D E R ZELLPROLIFERATION 6 0
5.2 DISKUSSION D E R ZELLMORPHOLOGIE 6 2
5.3 DISKUSSION D E R SA-SS-GALAKTOSIDASE-AKTIVITAET 6 3
5.4 DISKUSSION D E R TELOMERLAENGE 6 5
5.5 DISKUSSION D E R GENEXPRESSION 6 8
5.6 PERSPEKTIVEN 7 2
6 ZUSAMMENFASSUNG . * 7 3
LITERATURVERZEICHNIS 7 5
DANKSAGUNG 8 9
ERKLAERUNG ZUR DISSERTATION 9 0
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