Masernvirus-Infektion von Dendritischen Zellen und Virus-Transmission an T-Zellen:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2012
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INDEX
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS MASERNVIRUS (MV) 1
1.1.1 TAXONOMIE 1
1.1.2 EPIDEMIOLOGIE, PATHOGENESE UND KLINISCHE MERKMALE 2
1.1.3 MV-INDUZIERTE IMMUNSUPPRESSION 4
1.1.4 MORPHOLOGIE UND GENOM 5
1.1.5 GENOMORGANISATION, REPLIKATION UND TRANSKRIPTION 8
1.1.6 MV MATRIX-PROTEIN UND MV-PARTIKELMORPHOGENESE 9
1.1.7 VIRUS-AUFNAHME UND FUSION 11
1.2 DENDRITISCHE ZELLEN (DC) 12
1.2.1 ANTIGEN-PRAESENTATION 12
1.2.2 MASERNVIRUS-INFEKTION VON DCS 14
1.3 VIRALE TRANSMISSION IN DER VIROLOGISCHEN SYNAPSE 15
1.4 FRAGESTELLUNG 20
2 MATERIAL 21
2.1 ZELLEN 21
2.1.1 ZELLLINIEN 21
2.1.2 PRIMAERE ZELLEN 22
2.2 BAKTERIEN 22
2.3 MASERNVIREN 22
2.4 PLASMIDE 23
2.5 PRIMAERE ANTIKOERPER 23
2.5.1 MODIFIZIERTE PRIMAERANTIKOERPER 23
2.5.2 UNMODIFIZIERTE PRIMAERANTIKOERPER 24
2.6 FLUORESZIERENDE FARBSTOFFE 27
2.7 ZELLKULTURMEDIEN UND ZUSAETZE 28
2.7.1 EUKARYONTISCHE ZELLEN 28
2.7.2 BAKTERIEN 29
2.7.3 KITS 29
2.8 REAGENZIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 30
2.9 CHEMIKALIEN 33
2.10 VERBRAUCHSMATERIALIEN 34
2.11 EQUIPMENT 34
2.12 SOFTWARE 35
I
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IMAGE 2
INDEX
3 METHODEN 3 6
3.1 ZELLKULTUR 36
3.1.1 ZELLKULTUR ADHAERENTER UND SEMIADHAERENTER ZELLLINIEN UND
SUSPENSIONSZELLLINIEN 36
3.1.2 BESTIMMUNG DER LEBENDZELLZAHL 36
3.1.3 KRYOKONSERVIERUNG & AUFTAUEN VON ZELLLINIEN 37
3.1.4 ISOLATION VON PBMCS 37
3.1.5 ISOLIERUNG VON MONOZYTEN, IN VITRO DIFFERENZIERUNG IN UNREIFE DCS
(IDC) UND
AUSREIFUNG VON DC (MDCS) 37
3.1.6 AUFREINIGUNG UND AKTIVIERUNG VON T-ZELLEN 38
3.2 VIROLOGISCHE METHODEN 39
3.2.1 PRAEPARATION VON VIRUSSTOCKS 39
3.2.2 BESTIMMUNG DER TITER MITTELS ENDPUNKTTITRATION NACH SPEARMAN UND
KAERBER 40
3.2.3 MV-INFEKTION ADHAERENTER UND SEMIADHAERENTER ZELLLINIEN 41
3.2.4 MV-INFEKTION VON SUSPENSIONSZELLEN 41
3.2.5 MV-BELADUNG (JRAS-MV-DCS) UND INFEKTION VON DCS (CW-MV-DCS) 42
3.2.6 MV-TRANSMISSION VON TRANS- MV-DC ODER CW-MV-DCS AN T-ZELLEN 42
3.2.7 VIRUSTITRAION ZUR ANALYSE DER PRODUKTION INFEKTIOESER VIRALER
PARTIKEL VON MV-DCS UND
MV-B95A ZELLEN 43
3.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 44
3.3.1 HITZESCHOCK-TRANSFORMATION VON KOMPETENTEN BAKTERIEN 44
3.3.2 GLYCEROL-BAKTERIENSTOCKS 44
3.3.3 PLASMID-DNA PRAEPARATION 44
3.3.4 PHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER DNA-KONZENTRATION 45
3.3.5 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 45
3.4 TRANSFEKTION 45
3.4.1 TRANSFEKTION VON HELA-ZELLEN MIT PEI 45
3.4.2 TRANSFEKTION VON T-ZELLEN (AMAXA) 46
3.5 DURCHFLUSSZYTOMETER / FLUORESCENCE-ACTIVATED CELL SORTER (FACS) 46
3.5.1 FIXIERUNG 46
3.5.2 OBERFLAECHENFAERBUNG (FACS) 47
3.5.3 INTRAZELLULAERE FAERBUNG (FACS) 47
3.6 IMMUNFLUORESZENZMIKROSKOPIE 47
3.6.1 AUSSAEEN DER DCS AUF PLL-BESCHICHTETEN CHAMBER SLIDES 47
3.6.2 BILDUNG VON AUTOLOGEN DC / T-ZELL-KONJUGATEN A U F CHAMBER SLIDES
48
3.6.3 AUSSAAT VON SEMIADHAERENTEN UND ADHAERENTEN ZELLLINIEN A U F
DECKGLAESERN 48
3.6.4 OBERFLAECHENFAERBUNG (IF) 48
_
IMAGE 3
INDEX
3.6.5 INTRAZELLULAERE FAERBUNG (IF) 49
3.6.6 ZENON LABELLING KIT 49
3.6.7 HRP-FAERBUNG 49
3.6.8 FAERBUNG DES ZELLKERNS 50
3.6.9 KOLOKALISATIONSANALYSE - WCIF IMAGE J 50
3.6.10 PROTEINLOKALISATIONSANALYSE IN DC / T-ZELL-KONJUGATEN 50
3.7 BIARSENICAL DYE - FLUORESCEIN ARSENICAL HAIRPIN BINDER (FLASH) 51
3.7.1 FLASH & REASH-MARKIERUNG 51
3.8 PROTEINBIOCHEMIE 53
3.8.1 PRAEPARATION VON ZELLLYSATEN 53
3.8.2 PHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION MITTELS
BICINCHONINSAEURE (BCA)ASSAY 53
3.8.3 FRAKTIONIERUNG DETERGENZRESISTENTER MEMBRANFRAKTIONEN (DRM) 53
3.8.4 VIRUSPARTIKEL- / VIRUS LIKE /? 3R//C/E-FREISETZUNGSASSAY 54
3.8.5 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 54
3.8.6 WESTERN-BLOT-ANALYSE UND QUANTIFIZIERUNG 55
3.9 STATISTISCHE ANALYSE 56
4 ERGEBNISSE 57
4.1 MV-INFEKTION VON DCS (MV-DCS) 57
4.1.1 EFFIZIENZ DER MV-INFEKTION 57
4.1.2 DC-AUSREIFUNG NACH MV-INFEKTION 60
4.1.3 PARTIKELMORPHOGENESE UND FREISETZUNG INFEKTIOESER VIRIONEN IN
MV-DCS 62
4.1.4 AKKUMULATION VON MV-PROTEINEN IN MV-DCS 63
4.1.5 SUBZELLULAERE VERTEILUNG DER MV-PROTEINE IN DCS 64
4.1.5.1 DRM-ASSOZIATION DES M-PROTEINS 6 4
4.1.5.2 KOLOKALISATIONSANALYSE DER MV-PROTEINEN IN INFIZIERTEN D C S 65
4.1.5.3 KOLOKALISATION DER MV-PROTEINE 6 6
4.1.5.4 KOLOKALISATION DES M-PROTEINS MIT KOMPONENTEN DES SEKRETORISCHEN
TRANSPORTWEGES 6 7
4.1.5.5 KOLOKALISATION DER MV-PROTEINE MIT MARKERPROTEINEN D E R
ENDOSOMALEN UND LYSOSOMALEN
TRANSPORTWEGE 6 8
4.1.5.6 KOLOKALISATION DER MV-PROTEINE MIT TETRASPANINEN 6 9
4.2 MV M-TETRACYSTEIN-FUSIONSPROTEIN 73
4.2.1 DAS REKOMBINANTE MV M-TC PROTEIN 73
4.2.2 CHARAKTERISIERUNG DES REKOMBINANTEN M323-TC PROTEINS 74
4.2.3 RMV323 M-TC - INFEKTION VON ZELLEN 76
4.3 TRANSMISSION DES MV VON DCS AN AUTOLOGE T-ZELLEN 78
III
IMAGE 4
INDEX
4.3.1 MV-INFEKTION VON T-ZELLEN IST ABHAENGIG VON DER
CD150-0BERFLAECHENEXPRESSION 78 4.3.2 EFFIZIENTE MV-TRANSMISSION DURCH
DC-VERMITTELTE C/S-INFEKTION 79
4.3.3 DIE ABHAENGIGKEIT DER MV-TRANSMISSION VON MV-GLYKOPROTEINEN UND
CD150 AUF DER
T-ZELLE 82
4.3.4 MV-DCS BILDEN POLYKONJUGATE MIT STIMULIERTEN T-ZELLEN 84
4.3.5 ABHAENGIGKEIT DER MV-TRANSMISSION VON ZELL-ZELL-KONTAKTEN 85
4.3.6 MV-PROTEINE AKKUMULIEREN IN DER MV-INDUZIERTEN VS 85
4.3.7 CD150-UMVERTEILUNG IN DIE VS IST AKTINABHAENGIG 88
4.3.8 POLARISATION VON ICAM-1, INTEGRIN LFA-1, MV-KOREZEPTOREN DC-SIGN
UND SUBSTANZ
P REZEPTOR (SPR) ZUR VS 89
4.3.9 CD81 IST EIN KOMPONENT DER VS UND SEINE ZUGAENGLICHKEIT VERBESSERT
DIE MVTRANSMISSION 91
4.3.10 MOESIN UND PERM AKKUMULIEREN IN DER VS 92
5 DISKUSSION 94
5.1 MV-INFEKTION VON IDCS 94
5.2 DIE DETEKTION VON MV M-TC-FUSIONSPROTEINEN 101
5.3 MV-TRANSMISSION VON DCS AN AUTOLOGE T-ZELLEN INNERHALB DER
VIROLOGISCHEN SYNAPSE
103
6 ZUSAMMENFASSUNG 114
7 SUMMARY 116
8 LITERATURVERZEICHNIS 118
9 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 130
10 V EROEFFENTLICHUNGEN 134
10.1 PUBLIKATIONEN 134
10.2 VORTRAEGE 134
10.3 POSTER 135
11 LEBENSLAUF 136
IV
|
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| topic_facet | Transmission Dendritische Zelle Masernvirus Hochschulschrift |
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