Analyse des microRNA-Expressionsprofils im Urin von Patienten mit Nierenerkrankungen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2012
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
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I INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 MICRORNAS 1
1.1.2 BIOGENESE 2
1.1.3 EXTRAZELLULAERE RRURNA 4
1.1.3.1 MIRNA IM SERUM 5
1.1.3.2 MIRNA IM URIN 7
1.2 EXOSOMEN - TRANSPORTVESIKEL MIT DIAGNOSTISCHEM POTENTIAL 8
1.2.1 BIOGENESE 8
1.2.2 VORKOMMEN UND FUNKTION 9
1.3 NIERENERKRANKUNGEN 11
1.3.1 NICHT-INVASIVE DIAGNOSTIK 12
1.3.2 GLOMERULONEPHRITIS 14
1.3.2.1 KLINISCHE EINTEILUNG: NEPHRITISCHES UND NEPHROTISCHES SYNDROM 15
1.3.2.2 MINIMAL-CHANGE-GLOMERULONEPHRITIS 18
1.3.2.2.1 EPIDEMIOLOGIE UND DEFINITION 18
1.3.2.2.2 PATHOPHYSIOLOGIE 18
1.3.2.2.3 KLINISCHE EINTEILUNG 18
1.3.2.2.4 HISTOPATHOLOGIE 19
1.3.2.2.5 KLINIK 19
1.3.2.2.6 DIAGNOSTIK 19
1.3.2.2.7 THERAPIE 20
1.3.2.3 MEMBRANOESE GLOMERULONEPHRITIS 20
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
1.3.2.3.1 EPIDEMIOLOGIE UND DEFINITION 20
1.3.2.3.2 PATHOPHYSIOLOGIE UND HISTOPATHOLOGIE 21
1.3.2.3.3 KLINISCHE EINTEILUNG 22
1.3.2.3.4 KLINIK 22
1.3.2.3.5 DIAGNOSTIK 23
1.3.2.3.6 THERAPIE 23
1.3.2.3.7 PROGNOSE 23
1.3.2.4 IGA-NEPHROPATHIE 24
1.3.2.4.1 EPIDEMIOLOGIE UND DEFINITION 24
1.3.2.4.2 KLASSIFIKATION 24
1.3.2.4.3 HISTOPATHOLOGIE : 25
1.3.2.4.4 KLINIK 25
1.3.2.4.5 DIAGNOSTIK 26
1.3.2.4.6 THERAPIE 27
1.3.2.5 LUPUSNEPHRITIS 27
1.3.2.5.1 EPIDEMIOLOGIE UND DEFINITION 27
1.3.2.5.2 PATHOGENESE 28
1.3.2.5.3 KLASSIFIKATION - 28
1.3.2.5.4 HISTOPATHOLOGIE 30
1.3.2.5.5 KLINIK 30
1.3.2.5.6 DIAGNOSTIK 31
1.3.2.5.7 THERAPIE 31
2 AUFGABENSTELLUNG 32
3 MATERIAL UND METHODEN 33
3.1 MATERIALIEN 33
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.1 GLAS- UND PLASTIKWAREN 33
3.1.2 GERAETE UND LOESUNGEN 33
3.2 ZUSAMMENSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES PATIENTENKOLLEKTIVS 33
3.2.1 ASSERVIERUNG UND LAGERUNG DER PROBEN 39
3.3 GESAMT-RNA-ISOLIERUNG AUS URIN 39
3.4 CDNA-SYNTHESE MITTELS REVERSER TRANSKRIPTION UND POLYADENYUEERUNG 41
3.5 REAL-TIME PCR MIT QIAGEN PRIMERN UND ABI SYBR GREEN ALS
FLUORESZENZFARBSTOFF 42
3.5.1 AUSWERTUNG DER REAL-TIME PCR-ERGEBNISSE MIT DER 2 AAC,-METHODE 47
3.5.2 QUANTIFIZIERUNG AUSGEWAEHLTER MIRNAS DURCH EINZEL-REAL-TIME
PCR-NACHWEISE 50
3.5.3 NORMALISIERUNG MIT MIRNA-SV40 51
3.6 BEHANDLUNG MIT VERSCHIEDENEN RNASEN 51
3.7 RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG UND QUALITAETSKONTROLLE 52
3.7.1 SPEKTROPHOTOMETRISCHE RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG MITTELS
NANODROP 52
3.7.2 RNA-QUALITAETSKONTROLLE MIT DEM AGILENT 2100 BIOANALYZER 53
3.8 MIRNA-PROFILANALYSE DURCH TAQMAN LOW DENSITY ARRAYS 55
3.8.1 FUNKTIONSWEISE DER TAQMAN PCR 55
3.8.2 DURCHFUEHRUNG DER TAQMAN LOW DENSITY ARRAYS 57
3.8.2.1 REVERSE TRANSKRIPTION 61
3.8.2.2 PRAEAMPLIFIKATION 62
3.8.2.3 TAQMAN LOW DENSITY ARRAY-AMPLIFIKATION 63
3.8.3 ANALYSE DER TAQMAN LOW DENSITY ARRAYS DURCH DAS PROGRAMM REALTIME
STATMI- NER 65
4 ERGEBNISSE . 66
4.1 UEBERPRUEFUNG DER MIRNA-STABILITAET IM URIN 66
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
4.1.1 MIRNA-NACHWEIS IN ABHAENGIGKEIT DES PH-WERTES 66
4.1.1.1 NACHWEIS VON MIRNA-SV40 ALS QUALITAETSREFERENZ 66
4.1.1.2 MIRNA-SV40-NACHWEIS IN ABHAENGIGKEIT DES PH-WERTES 67
4.1.1.3 MIRNA-SV40-NACHWEIS IN ABHAENGIGKEIT VON PH-WERT UND
INKUBATIONSZEIT 68
4.1.2 ETABLIERUNG DER DETEKTION ENDOGENER MIRNA AUS URIN 69
4.1.2.1 BESTIMMUNG DER CDNA-EINSATZMENGE FUER DIE REAL-TIME PCR 70
4.1.2.2 DARSTELLUNG VON MIR-16 UND MIR-192 AUS URIN 71
4.1.2.3 VORBEREITUNG DES URINS FUER DEN MIRNA-NACHWEIS 72
4.1.3 RNASE-RESISTENZ ENDOGENER MIRNA IM URIN 75
4.1.3.1 RNASEN-BEHANDLUNG VON URIN 76
4.2 SICHTUNG VON DIFFERENTIELL AUFTRETENDEN MIRNAS IM URIN VON PATIENTEN
MIT NEPHROPA
THIE GEGENUEBER KONTROLLURINEN 78
4.2.1 CHARAKTERISIERUNG DER FUER DIE SICHTUNG AUSGEWAEHLTEN RNA-PROBEN AUS
URIN 78
4.2.2 MIRNA-EXPRESSIONSPROFILE IM URIN VON PATIENTEN MIT
MINIMAL-CHANGEGLOMERULONEPHRITIS 82
4.2.3 VERGLEICH DER MIRNA-EXPRESSIONSPROFILE VON PATIENTEN MIT
MINIMAL-CHANGEGLOMERULONEPHRITIS UND KONTROLLEN 85
4.3 UNTERSUCHUNG AUSGEWAEHLTER MIRNAS IM URIN VON PATIENTEN MIT
NIERENERKRANKUNGEN MITTELS REAL-TIME PCR-AMPLIFIKATION 94
4.3.1 AUSWAHL DER MIRNAS ZUR ANALYSE IN ERWEITERTER KOHORTE 94
4.3.2 MIRNA-EXPRESSIONSPROFIL IN ABHAENGIGKEIT VOM GESCHLECHT 97
4.3.3 MIRNA-EXPRESSIONSPROFIL IN ABHAENGIGKEIT VON KLINISCHEN PARAMETERN
100
4.3.4 MIRNA-EXPRESSIONSPROFIL IN ABHAENGIGKEIT VON DER ERKRANKUNG 100
5 DISKUSSION 108
5.1 MIRNA-STABILITAET IN ABHAENGIGKEIT VON UMGEBUNGSBEDINGUNGEN 108
IMAGE 5
INHALTSVERZEICHNIS
5.2 ISOLIERUNG VON MIRNA: VORTEILE DER ISOLIERUNG VON EXOSOMALER MIRNA
111
5.3 EINFLUSSFAKTOREN AUF DIE DIAGNOSTIK: VON DER PROBENENTNAHME UND
ASSERVIERUNG BIS HIN ZUM DIAGNOSTISCHEN VERFAHREN 115
5.4 MIRNAS IM URIN ALS POTENTIELLE INDIKATOREN AKUTER UND CHRONISCHER
NIERENERKRANKUN GEN 119
6 ZUSAMMENFASSUNG 126
7 LITERATURVERZEICHNIS 128
8 LEBENSLAUF 147
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