Multiplexing in homogenen FRET-Immunoassays: Detektion von Lungenkrebs-Tumormarkern mittels zeitaufgelöster Laserspektroskopie durch Förster-Resonanzenergietransfer (FRET)
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2012
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| Beschreibung: | VIII, 105, XLII S. graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG UND MOTIVATION 1
2. THEORETISCHE GRUNDLAGEN 5
2.1. MOLEKULARE ERKENNUNG IN FRET-ASSAYS 5
2.1.1. FRET-LMMUNOASSAYS 5
2.1.2. BIOTIN-STREPTAVIDIN ALS MODELLSYSTEM 10
2.2. FOERSTER-RESONANZENERGIETRANSFER (FRET) 11
2.2.1. FRET-THEORIE 12
2.2.2. FRET MIT LUMINESZENTEN TB 3+-KOMPLEXEN 15
2.3. TERBIUM-KOMPLEXE ALS FRET-DONOREN 16
2.3.1. DAS LANTHANOID-ION T B 3 + 16
2.3.2. LUMINESZENTE TERBIUM-KOMPLEXE (LTC) 18
2.3.3. LTC ALS FRET-DONOREN 20
2.4. QUANTENPUNKTE ALS FRET-AKZEPTOREN 22
2.4.1. QUANTENPUNKTE IN FRET-ANWENDUNGEN 2 3
3. MATERIALIEN UND METHODEN 25
3.1. VERWENDETE CHEMIKALIEN 25
3.1.1. ANTIGENE UND ANTIKOERPER 25
3.1.2. FRET-DONOREN 26
3.1.3. FRET-AKZEPTOREN 26
3.1.4. PUFFERLOESUNGEN 28
3.2. EXPERIMENTELLE METHODEN 29
3.2.1. STATIONAERE ABSORPTIONSSPEKTROSKOPIE 29
3.2.2. STATIONAERE LUMINESZENZSPEKTROSKOPIE 29
3.2.3. ZEITAUFGELOESTE FRET-ASSAYS 30
3.3. DURCHFUEHRUNG DER FRET-ASSAYS 32
3.3.1. BIOTIN-STREPTAVIDIN-ASSAYS 3 3
3.3.2. OPTIMIERTE BIOTIN-STREPTAVIDIN-ASSAYS 3 3
3.3.3. EINZELIMMUNOASSAYS 3 3
3.3.4. MULTIPLEXING-IMMUNOASSAYS 3 3
3.3.5. OPTIMIERTE MULTIPLEXING-IMMUNOASSAYS 34
3.4. DATENAUSWERTUNG 34
3.4.1. ZEITAUFGELOESTE FRET-ASSAYS 35
4. ERGEBNISSE UND DISKUSSION 39
4.1. FRET-DONOREN UND -AKZEPTOREN 39
4.1.1. CHARAKTERISIERUNG DER TERBIUM-KOMPLEXE 39
4.1.2. CHARAKTERISIERUNG DER QUANTENPUNKTE 4 3
VII
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
4.1.3. CHARAKTERISIERUNG DER FLUORESZENZFARBSTOFFE 4 4
4.1.4. FRET-DATEN DER DONOR-AKZEPTOR-PAARE 4 6
4.2. BIOTIN-STREPTAVIDIN-ASSAYS 4 7
4.2.1. FRET-ASSAYS MIT BIOT-QD605 UND BIOT-QD655 4 8
4.2.2. FRET-ASSAYS MIT FUENF BIOT-QD 55
4.2.3. OPTIMIERTE FRET-ASSAYS MIT FUENF BIOT-QD 62
4.3. FRET-LMMUNOASSAYS ZUR DETEKTION VON LUNGENKREBS-TUMORMARKERN 69
4.3.1. CEA-EINZELIMMUNOASSAY MIT QD-AKZEPTOREN 7 0
4.3.2. EINZELIMMUNOASSAYS 72
4.3.3. MULTIPLEXING-IMMUNOASSAYS 7 6
4.3.4. MULTIPLEXING-IMMUNOASSAYS MIT CROSSTALK-KORREKTUR 85
5. ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 99
5.1. ZUSAMMENFASSUNG 9 9
5.2. AUSBLICK 104
A. ANHANG I
A.L. VERWENDETE ABKUERZUNGEN I
A.2. DICHROITISCHE SPIEGEL UND BANDPASSFILTER II
A.3. VERWENDETE ANTIKOERPER-KONJUGATE IV
A.4. DURCHFUEHRUNG DER FRET-ASSAYS V
A.4.1. BIOTIN-STREPTAVIDIN-ASSAYS AM KRYPTOR V
A.4.2. BIOTIN-STREPTAVIDIN-ASSAYS AM ICCD-KAMERA-SYSTEM VI
A.4.3. FRET-EINZELIMMUNOASSAYS VII
A.4.4. MULTIPLEXING-IMMUNOASSAYS VIII
A.4.5. MULTIPLEXING-IMMUNOASSAYS MIT CROSSTALK-KORREKTUR IX
A.5. LUMINESZENZABKLINGKURVEN XI
A.6. ERGEBNISSE DER BIOTIN-STREPTAVIDIN-ASSAYS XII
A.6.1. BIOTIN-STREPTAVIDIN-EINZELASSAYS XII
A.6.2. BIOTIN-STREPTAVIDIN-MULTIPLEXING-ASSAYS XIII
A.7. ERGEBNISSE DER FRET-IMMUNOASSAY XV
A.7.1. EINZELASSAYS DER LUNGENKREBS-TUMORMARKER XV
A.7.2. CEA/NSE ZWEIFACH-MULTIPLEXING XIX
A . L . 3 . CEA/NSE/SCC DREIFACH-MULTIPLEXING XX
A.7.4. NSE/CEA/SCC/CYFRA21-L VIERFACH-MULTIPLEXING XXI
A.7.5. FUENFFACH-MULTIPLEXING MIT CROSSTALK-KORREKTUR XXII
A.7.6. KONTROLLEXPERIMENTE ZUM FUENFFACH-MULTIPLEXING XXIX
LITERATURVERZEICHNIS XXXI
VIII
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