Wiedereinsetzen der Steroidbiosynthese nach Downregulation der Hodenfunktion beim Rüden: Expression von StAR-Protein, P450scc und P450c17
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Giessen
DVG Service
2012
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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| Beschreibung: | 176 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 4
TABELLENVERZEICHNIS 5
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 6
1 EINLEITUNG 9
2 LITERATURUEBERSICHT 1 1
2.1 NEUROENDOKRINE REGULATION DER HODENFUNKTION 11
2.1.1 GONADOTROPIN-RELEASING HORMON 11
2.1.2 FOLLIKEL-STIMULIERENDES HORMON UND LUTEINISIERENDES HORMON . . .
13 2.1.3 INHIBIN, AKTIVIN UND FOLLISTATIN 15
2.1.4 GONADALE STEROIDHORMONE 18
2.1.5 ANDROGEN-BINDENDES PROTEIN 21
2.2 MOEGLICHKEITEN ZUR BLOCKIERUNG DER HODENFUNKTION BEIM H U N D 2 3
2.2.1 IMMUNISIERUNG GEGEN G N R H 23
2.2.2 IMMUNISIERUNG GEGEN GONADOTROPINE 26
2.2.3 EINSATZ VON GNRH-ANALOGA 27
2.2.4 ANWENDUNG VON GESTAGENEN 31
2.2.5 ANWENDUNG VON OESTROGENEN 32
2.2.6 ANWENDUNG VON ANDROGENEN 33
2.2.7 G A B E VON 5A-REDUKTASE-HEMMER 34
2.2.8 VERABREICHUNG VON ANDROGENREZEPTOR-BLOCKERN 35
2.2.9 VERABREICHUNG VON OSTROGENREZEPTOR-BLOCKERN 36
2.2.10 SCHLUSSFOLGERUNGEN FUER DIE EIGENEN UNTERSUCHUNGEN 36
2.3 TESTIKULAERE STEROIDBIOSYNTHESE 37
2.3.1 AUSGANGSSUBSTRAT CHOLESTEROL 37
2.3.2 P450SCC U N D TRANSDUCEOSOM 40
2.3.3 P450CL7 UND 3/3HSD 45
2.3.4 17.IL ISI) 48
2.3.5 MOEGLICHKEITEN DER METABOLISIERUNG VON TESTOSTERON 48
2.3.6 REGULATION DER STEROIDBIOSYNTHESE 49
3 MATERIAL UND M E T H O D E N 5 3
3.1 VERSUCHSDESIGN 53
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IMAGE 2
2
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
3.2 TIERVERSUCHSANTRAG 54
3.3 EINTEILUNG DER HUNDE IN G R U P P E N U N D ZUORDNUNG ZU KOLLEKTIV 1
U N D 2 . 54 3.4 PROBENGEWINNUNG U N D -KONSERVIERUNG 57
3.5 HORMONANALYTIK 58
3.5.1 BESTIMMUNG VON TESTOSTERON IM BLUTPLASMA 58
3.5.2 BESTIMMUNG VON LH IM BLUTPLASMA 58
3.5.3 BESTIMMUNG VON FSH IM BLUTPLASMA 59
3.G AUSMESSUNG DER FLAECHE DER LEYDIGZELLKERNE 59
3.6.1 VORBEREITUNG DER GEWEBESCHNITTE 59
3.6.2 HAEMATOXYLIN-EOSIN (HE) - FAERBEPROTOKOLL 59
3.6.3 MESSUNG DER ZELLKERNE 60
3.7 WESTERN BLOT ZUR UEBERPRUEFUNG DER SPEZIFITAET DER IN DER
IMMUNHISTOCHEMIE EINGESETZTEN PRIMAERANTIKOERPER 62
3.7.1 HERSTELLUNG VON GESAMTPROTEINEXTRAKTEN AUS GEWEBE 62
3.7.2 ISOLIERUNG VON MITOCHONDRIEN AUS GEWEBE 62
3.7.3 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 63
3.7.4 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 64
3.7.5 ELEKTROBLOTTING 65
3.7.6 UEBERPRUEFUNG DES PROTEINTRANSFERS MITTELS PONCEAU-S-FAERBUNG . . .
66 3.7.7 NACHWEISREAKTION 66
3.8 IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS VON STAR-PROTEIN, P450SCC U N D
P450CL7 68 3.8.1 VORBEREITUNG DER GEWEBESCHNITTE 68
3.8.2 IMMUNHISTOCHEMISCHES FAERBEPROTOKOLL 68
3.8.3 AUSWERTUNG DER IMMUNHISTOCHEMIE 70
3.9 QUALITATIVER NACHWEIS VON ZIELGEN-MRNA MITTELS R T - P C R 75
3.9.1 RNA-ISOLIERUNG AUS GEWEBE 75
3.9.2 BESTIMMUNG DER RNA-KONZENTRATION 75
3.9.3 DNASE-BEHANDLUNG 76
3.9.4 REVERSE TRANSKRIPTION (RT) 77
3.9.5 POLYMERASE-KETTENREAKTION ( P C R ) 78
3.9.6 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG DER P C R - P R O D U K T E 80
3.9.7 ISOLIERUNG U N D SEQUENZIERUNG VON P C R - P R O D U K T E N 80
3.10 BESTIMMUNG DER RELATIVEN MRNA-EXPRESSION MITTELS R T - Q P C R , 8
1
3.10.1 VORBEREITUNG DER PROBEN 81
3.10.2 VORBEREITUNG DER PRIMER-SONDEN-SYSTEME 81
3.10.3 PRINZIP DER R T - Q P C R M I T HYDROLYSE-SONDEN 82
3.10.4 DURCHFUEHRUNG DER R T - Q P C R 8 3
3.10.5 ERMITTLUNG DER EFFIZIENZ DER PCR-REAKTION 85
3.10.6 AUSWERTUNG DER RT-QPCR-ERGEBNISSE 87
3.11 STATISTISCHE AUSWERTUNG 87
IMAGE 3
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S 3
4 ERGEBNISSE 8 9
4.1 ERGEBNISSE DER EINFAKTORIELLEN VARIANZANALYSE 89
4.2 HORMONANALYTIK 89
4.2.1 BESTIMMUNG VON TESTOSTERON IM BLUTPLASMA 91
4.2.2 BESTIMMUNG VON LH IM BLUTPLASMA 91
4.2.3 BESTIMMUNG VON FSH IM BLUTPLASMA 93
4.3 AUSMESSUNG DER FLAECHE DER LEYDIGZELLKERNE 96
4.4 PROZENTUALE VERTEILUNG DER KOMPARTIMENTE IM HODENGEWEBE 98
4.5 STAR-PROTEIN 100
4.5.1 EXPRESSION A U F PROTEIN-EBENE 100
4.5.2 EXPRESSION AUF MRNA-EBENE 107
4.6 P450SCC 109
4.6.1 EXPRESSION A U F PROTEIN-EBENE 109
4.6.2 EXPRESSION AUF MRNA-EBENE 116
4.7 P450CL7 118
4.7.1 EXPRESSION A U F PROTEIN-EBENE 118
4.7.2 EXPRESSION AUF MRNA-EBENE 125
5 DISKUSSION 1 2 7
5.1 DISKUSSION DER METHODIK 127
5.2 DISKUSSION DER ERGEBNISSE 133
6 ZUSAMMENFASSUNG 1 4 1
7 SUMMARY 1 4 3
8 LITERATURVERZEICHNIS 1 4 5
ANHANG 1 6 1
A . L EINGESETZTE CHEMIKALIEN 161
A.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 165
A.3 VERWENDETE GERAETE 167
A.4 SOFTWARE 169
A.5 PUFFER UND LOESUNGEN 170
A.5.1 PROBENGEWINNUNG UND -KONSERVIERUNG 170
A.5.2 HE-FAERBUNG UND IMMUNHISTOCHEMIE 170
A.5.3 PROTEIN-EXTRAKTION U N D WESTERN BLOT 172
A.5.4 RNA-ISOLIERUNG UND P C R 176
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