Funktionelle Bedeutung des thrombozytären Kalzium abhängigen Kaliumkanals KCa3.1:
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INHALT
1 EINLEITUNG 1
1.1 THROMBOZYTEN UND DEREN FUNKTIONEN 1
1.2 AKTIVIERUNG VON THROMBOZYTEN 2
1.3 ROLLE DER THROMBOZYTEN IN VERSCHIEDENEN KRANKHEITSBILDERN 5
1.4 ENDOGENE HEMMUNG VON THROMBOZYTEN IN GESUNDEN BLUTGEFAESSEN 8
1.5 ROLLE DES EDHF FUER DIE THROMBOZYTENFUNKTION 10
1.6 KALIUMKANAELE UND DEREN EXPRESSION AUF THROMBOZYTEN 12
2 FRAGESTELLUNG - 1 3
3 MATERIAL UND METHODEN 14
3.1 TIERMODELL 14
3.2 NARKOSE 15
3.3 ISOLIERUNG UND REINIGUNG VON THROMBOZYTEN 16
3.3.1 THROMBOZYTENISOLIERUNG FUER AGGREGATIONSUNTERSUCHUNG IN VITRO 17
3.3.2 THROMBOZYTENISOLIERUNG UND FAERBUNG FUER IN VIVO VERSUCHE 17
3.3.3 ISOLIERUNG VON THROMBOZYTEN ZUR HERSTELLUNG VON PROTEINLYSAT 18
3.4 PROTEINCHEMISCHE METHODEN 19
3.4.1 PROTEINISOLATION AUS THROMBOZYTEN 19
3.4.2 PROTEINBESTIMMUNG (NACH BIURET) 19
3.4.3 SDS - POLYACRYLAMID - GELELEKTROPHORESE 20
SEITE | I
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3.4.4 WESTERN - BLOTTING 22
3.4.5 FAERBUNG VON PROTEINEN 22
3.5 IMMUNOLOGISCHE METHODEN 23
3.5.1 LMMUNOPRINTFUERKCA3.1 23
3.6 HAEMATOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 24
3.7 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 25
3.7.1 THROMBOZYTAERES MEMBRANPOTENTIAL 25
3.7.2 REZEPTOREXPOSITION AUF THROMBOZYTEN 26
3.8 AGGREGOMETRIE 28
3.9 CHIRURGISCHE TECHNIKEN 29
3.9.1 RUECKENHAUTKAMMERMODELL 29
3.9.2 ARTERIELLE UND VENOESE KATHETERISIERUNG 32
3.10 INTRAVITALMIKROSKOPIE 33
3.10.1 MATERIAL, TECHNISCHER AUFBAU DES ARBEITSPLATZES 33
3.10.2 DIGITALE DATENAQUISITION 35
3.10.3 DATENVERARBEITUNG 35
3.11 INTRAVITALE VERSUCHE 36
3.11.1 THROMBOZYTEN-ENDOTHEL-INTERAKTION IN VIVO 36
3.11.2 THROMBUSBILDUNG NACH GEFAESSVERLETZUNG 37
3.12 STATISTIK 38
SEITE | II
IMAGE 3
4 ERGEBNISSE 39
4.1 PROTEINANALYSE VON THROMBOZYTEN AUF KCA3.1 39
4.2 BLUTBILD VON WILDTYP UND KCA3.1 KO MAEUSEN 40
4.2.1 KLEINES BLUTBILD. 40
4.2.2 THROMBOZYTEN-GROESSE 4 1
4.3 REZEPTOREXPOSITION AUF RUHENDEN THROMBOZYTEN 42
4.4 MEMBRANPOTENTIALMESSUNG AN MAUS-THROMBOZYTEN 44
4.5 REVERSIBLE UND IRREVERSIBLE THROMBOZYTENAKTIVIERUNG BEI WILDTYP UND
KCA3.1 KO
THROMBOZYTEN 46
4.6 THROMBOZYTEN-ENDOTHEL-INTERAKTION AN KCA3.1 KO MAEUSEN 49
4.7 ROLLE DES KCA3.1 KANALS AUF THROMBOZYTEN BEIM THROMBOTISCHEN
GEFAESSVERSCHLUSS
NACH EXPERIMENTELLER GEFAESSVERLETZUNG 5 1
5 DISKUSSION 54
5.1 PHAENOTYP KCA3.1-DIFIZIENTER MAEUSE 55
5.2 KCA3.1 KO THROMBOZYTEN ZEIGEN EIN SCHNELLERES ERREICHEN DER
AKTIVIERUNGSSCHWELLE
IN VITRO 56
5.3 AUSSCHALTUNG DER KCA3.1 KANAELE FUEHRT ZU ERHOEHTER
THROMBOZYTEN-AKTIVITAET IN VIVO61
5.3.1 POTENTIELLE MECHANISMEN EINER VERSTAERKTEN THROMBOZYTEN-ENDOTHEL-
INTERAKTION MIT KO THROMBOZYTEN 6 1
5.3.2 ERHOEHTES RISIKO ZUR THROMBUSBILDUNG IN KCA3.1 KO MAEUSEN 62
5.4 LIMITATIONEN UND SCHLUSSFOLGERUNG 64
SEITE | III
IMAGE 4
6 ZUSAMMENFASSUNG 66
7 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 68
8 TABELLENVERZEICHNIS 6 9
9 ABKUERZUNGEN 70
10 REFERENZEN 76
SEITE | IV
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