Entwicklung und Anwendung eines Enzymimmuntests zum Nachweis des Mykotoxins Tenuazonsäure in Lebensmitteln:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2012
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| Online-Zugang: | Volltext Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 168 S. 210 mm x 146 mm, 259 g |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
TABELLENVERZEICHNIS V
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VII
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS XII
1 EINLEITUNG 1
2 SCHRIFTTUM 3
2.1 CHARAKTERISIERUNG VON TEA 3
2.1.1 ALLGEMEINES 3
2.1.2 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE EIGENSCHAFTEN 6
2.1.3 BIOLOGISCHE EIGENSCHAFTEN 10
2.1.3.1 TOXIZITAET 10
2.1.3.2 ANDERE WIRKUNGEN 13
2.1.4 RISIKOBEWERTUNG 14
2.1.5 BILDUNG, VORKOMMEN U N D METABOLISMUS 15
2.1.5.1 TEA-BILDENDE SCHIMMELPILZE 15
2.1.5.2 BIOSYNTHESE UND CHEMISCHE SYNTHESE VON TEA 19
2.1.5.3 VORKOMMEN VON TEA IN PFLANZLICHEN PRODUKTEN 20
2.1.5.4 MOEGLICHKEITEN DER VERMINDERUNG EINES ALTERNARIA- BEFALLS IN
PFLANZLICHEN PRODUKTEN 28
2.1.5.5 UEBERGANG VON TEA IN LEBENSMITTEL TIERISCHEN URSPRUNGS 3 0
2.2 VERFAHREN ZUM NACHWEIS VON TENUAZONSAEURE 3 0
2.2.1 EXTRAKTION U N D REINIGUNG 30
2.2.2 BIOLOGISCHE NACHWEISVERFAHREN 34
2.2.3 IMMUNOLOGISCHE NACHWEISVERFAHREN 35
2.2.4 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE NACHWEISVERFAHREN 3 8
2.2.4.1 CHROMATOGRAPHISCHE VERFAHREN 3 8
2.2.4.1.1 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE (DC) 3 8
I
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IMAGE 2
2.2.4.1.2
2.2.4.1.3
GASCHROMATOGRAPHIE (GC) / MASSENSPEKTROMETRIE (MS)
FLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE (LC) UND
HOCHDRUCKFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE (HPLC)
41
43
3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN 46
3.1 MATERIAL UND GERAETE 46
3.1.1 CHEMIKALIEN UND BIOCHEMIKA 46
3.1.2 MYKOTOXINE 47
3.1.3 IMMUNREAGENZIEN 47
3.1.4 PUFFER U N D LOESUNGEN 4 1
3.1.5 GERAETE UND SONSTIGE MATERIALIEN 48
3.1.5.1 HARD- UND SOFTWARE 48
3.1.5.2 PHOTOMETER 48
3.1.5.3 ENZYMIMMUNTESTS 4 8
3.1.5.4 HOCHDRUCKFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE 49
3.1.5.5 MYKOLOGISCHE UNTERSUCHUNG 49
3.1.5.6. SONSTIGES 49
3.1.6 PROBENMATERIALIEN 50
3.1.6.1 LEBENSMITTEL 50
3.1.6.1 PILZKULTUREN 50
3.2 METHODIK 52
3.2.1 UEBERPRUEFUNG DES TEA-STANDARDMATERIALS 52
3.2.2 HERSTELLUNG DER IMMUNREAGENZIEN 53
3.2.2.1 KOPPLUNGSMETHODEN 53
3.2.2.1.1 KOPPLUNG MITTELS AKTIVER ESTERMETHODE 54
3.2.2.1.2 KOPPLUNG VON TEA AN BSA UND KLH MITTELS MANNICH-KONDENSATION
57
3.2.2.1.2.1 KOPPLUNG VON TEA AN KEYHOLE LIMPET HEMOCYANIN (TEA-KLH) 57
3.2.2.1.2.2 HERSTELLUNG EINES TEA-BOVINES SERUMALBUMIN-KONJUGATES
(TEA-BSA) 57
3.2.2.1.3 KOPPLUNG MITTELS REDUKTIVER ALKYLIERUNG UNTER VERWENDUNG VON
NATRIUMPERJODAT (PJ) 58
3.2.2.1.4 CHARAKTERISIERUNG DER HERGESTELLTEN TEA-KONJUGATE 59
IMAGE 3
3.2.3 GEWINNUNG SPEZIFISCHER ANLI-TENUAZONSAEURE-ANTISEREN 60
3.2.3.1 IMMUNISIERUNG 60
3.2.3.2 BLUTENTNAHME UND SERUMGEWINNUNG 62
3.2.3.3 KONTROLLE DES IMMUNISIERUNGSVERLAUFS 62
3.2.3.4 AUSWAHL GEEIGNETER ANTISEREN DURCH PARALLELE KOMPETITIVE
TITRATION
(HEMMTITRATION) 63
3.2.4 ENTWICKLUNG EINES KOMPETITIVEN INDIREKTEN ENZYMIMMUNTESTS 66
3.2.5 ENTWICKLUNG EINES KOMPETITIVEN DIREKTEN ENZYMIMMUNTESTS
(DOPPELANTIKOERPERTECHNIK) 66
3.2.6 UNTERSUCHUNGEN ZUR ANWENDBARKEIT DES KOMPETITIVEN DIREKTEN
ENZYMIMMUNTESTS 69
3.2.6.1 NACHWEIS VON TEA IN APFELSAFT 70
3.2.6.2 NACHWEIS VON TEA IN TOMATENERZEUGNISSEN 71
3.2.6.2.1 TOMATENSAFT 71
3.2.6.2.2 TOMATENKETCHUP 72
3.2.6.2.3 TOMATENMARK 72
3.2.6.3 NACHWEIS VON TEA IN SCHIMMELBEFALLENEN TOMATEN NACH
VERSCHIEDENER LAGERUNGSZEIT 7 3
3.2.6.4 ORIENTIERENDE UNTERSUCHUNGEN ZUM TEA-BILDUNGSVERMOEGEN
VERSCHIEDENER SCHIMMELPILZE 74
4 ERGEBNISSE 75
4.1 UEBERPRUEFUNG DES TEA-STANDARDMATERIALS 75
4.2 HERSTELLUNG DER IMMUNREAGENZIEN 80
4.3 GEWINNUNG SPEZIFISCHER ANTISEREN GEGEN TENUAZONSAEURE 85
4.3.1 ANTIKOERPER-TITERVERLAUF 85
4.3.2 AUSWAHL GEEIGNETER ANTISEREN 88
4.4 ENTWICKLUNG EINES KOMPETITIVEN INDIREKTEN ENZYMIMMUNTESTS 89
4.5 ENTWICKLUNG EINES KOMPETITIVEN DIREKTEN ENZYMIMMUNTESTS
(DOPPELANTIKOERPERTECHNIK) 89
4.6 ANWENDBARKEIT DES NACHWEISVERFAHRENS UNTER VERWENDUNG VON
KUENSTLICH UND NATUERLICH KONTAMINIERTEN PROBENMATERIALIEN 95
I I I
IMAGE 4
4.6.1 NACHWEIS VON TEA IN APFELSAFT 95
4.6.2 NACHWEIS VON TEA IN TOMATENERZEUGNISSEN 96
4.6.3 UNTERSUCHUNG VON NATUERLICH VERSCHIMMELTEN TOMATEN A U F TEA 101
4.6.4 UNTERSUCHUNG VON SCHIMMELPILZ-KULTURMATERIAL A U F TEA 105
5 DISKUSSION 107
5.1 SYNTHESE VON TEA-PROTEINKONJUGATEN 108
5.2 ANTIKOERPER GEGEN TEA UND ENTWICKLUNG DES
ENZYMIMMUNOLOGISCHEN NACHWEISVERFAHRENS 109
6 ZUSAMMENFASSUNG 115
7 SUMMARY 117
8 LITERATURVERZEICHNIS 119
DANKSAGUNG 146
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 147
VEROEFFENTLICHUNGEN 147
I V
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