Die Charakterisierung des rezeptornahen Signalweges der TRAIL-induzierten Aktivierung von NF-k[Kappa]B:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS 1
1. ZUSAMMENFASSUNG 3
2. EINLEITUNG 5
2.1. DER NF-KB-SIGNALWEG 5
2.2. DIE TNF-FAMILIE 7
2.3. DER TNF-VERWANDTE APOPTOSE INDUZIERENDE LIGAND TRAIL 8
2.3.1. TRAIL-INDUZIERTE APOPTOSE 9
2.3.2. BIOLOGISCHE BEDEUTUNG VON TRAIL 15
2.3.3. TRAIL-INDUZIERTE AKTIVIERUNG VON N F - K B 1 6
3. ZIELSETZUNG 19
4. MATERIAL UND METHODEN 20
4.1. MATERIAL 20
4.1.1. ANTIKOERPER 20
4.1.2. BAKTERIENSTAEMME 20
4.1.3. CHEMIKALIEN UND GEBRAUCHSFERTIGE LOESUNGEN 21
4.1.4. ENZYME 22
4.1.5. GERAETE UND SOFTWARE 22
4.1.6. KOMMERZIELLE REAGENZIENSAETZE 23
4.1.7. MEDIEN 23
4.1.8. OLIGONUKLEOTIDE 24
4.1.9. PUFFERLOESUNGEN 26
4.1.10. VEKTOREN 27
4.1.11. VERBRAUCHSMATERIALIEN 29
4.2. METHODEN 30
4.2.1. MOLEKULARBIOLOGIE 30
4.2.2. PROTEINBIOCHEMIE 36
4.2.3. ZELLBIOLOGIE 42
5. ERGEBNISSE 49
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INHALTSVERZEICHNIS
5.1. HERSTELLUNG VON REKOMBINANTEM HUMANEM TRAU 49
5.1.1. KLONIERUNG DER TRAIL-VARIANTEN 49
5.1.2. EXPRESSION IN E. COLI UND AUFREINIGUNG 51
5.1.3. FUNKTIONALITAET VON RENATURIERTEM TRAIL 54
5.2. UNTERSUCHUNG DER TRAIL-REZEPTOREN UND IHRER TODESDOMAENE 58
5.2.1. KLONIERUNG DER FUSIONSPROTEINE 59
5.2.2. FUNKTIONALITAET DER FUSIONSPROTEINE 60
5.2.3. ENTSCHEIDENDE BEDEUTUNG DER TODESDOMAENE FUERTRI UND TR2 63
5.3. FADD ALS ADAPTORPROTEIN DES NF-KB-SIGNALWEGES 64
5.3.1. ABHAENGIGKEIT DER NF-KB-AKTIVIERUNG IN HEK 293T VON FADD 64
5.3.2. FEHLENDE AKTIVIERUNG VON N F - K B IN FADD DEFIZIENTEN ZELLEN 6 6
5.3.3. TRAIL-INDUZIERTE N F - K B AKTIVIERUNG NACH REEXPRESSION VON FADD
6 7
5.3.4. ABHAENGIGKEIT DER FADD FUNKTION VON DER MULTIMERISIERUNG VON FADD
69
5.4. MOEGLICHE ROLLE VON CASPASE 8 IM NF-KB-SIGNALWEG 75
5.4.1. ABHAENGIGKEIT DER NF-KB-AKTIVIERUNG IN HEK 293T VON CASPASE 8 76
5.4.2. FEHLENDE AKTIVIERUNG VON N F - K B IN CASPASE 8 DEFIZIENTEN
ZELLEN 7 8
5.4.3. STABILE INDUZIERBARE REEXPRESSION IN CASPASE 8 DEFIZIENTEN ZELLEN
80
6. DISKUSSION 83
6.1. EFFIZIENTE METHODE DER GEWINNUNG VON REKOMBINANTEM HUMANEN TRAIL IN
E. CO//83
6.2. TODESDOMAENEN VON TR1 UND TR2 VERMITTELN DIE N F - K B AKTIVIERUNG
DURCH TRAIL . 8 5
6.3. F A D D ALS UEBERMITTLER DES N F - K B SIGNALS DURCH T R A I L 8 6
6.4. EINFLUSS DER CASPASE 8 AUF DIE N F - K B AKTIVIERUNG DURCH TRAIL 88
6.5. AUSBLICK AUF WEITERFUEHRENDE UNTERSUCHUNGEN DES SIGNALWEGES 91
7. LITERATURVERZEICHNIS 93
8. ANHANG 102
8.1. ABKUERZUNGEN 102
8.2. DANKSAGUNG 103
8.3. LEBENSLAUF 104
8.4. EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 105
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