Untersuchung zum Einfluss des Lipidgehaltes in Oozyten des Rindes auf die embryonale Entwicklungsfahigkeit nach In-vitro-Maturation und In-vitro- Fertilisation:
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Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch und Buch Verl.
2010 [erschienen] 2012
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Beschreibung: | Nebentitel: Research on the bovine oocyte's lipid content and its influence in embryonic developmental capacity before and after in vitro maturation and in vitro fertilization |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS 3
VERZEICHNIS DER VERWENDETEN ABKUERZUNGEN 6
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 8
TABELLENVERZEICHNIS 9
1. EINLEITUNG 11
2. SCHRIFTTUM 13
2.1. OOZYTENREIFUNG 13
2.1.1. OOZYTENREIFUNG IN VIVO 13
2.1.2. OOZYTENREIFUNG IN VITRO 16
2.2. FERTILISATION 18
2.2.1. FERTILISATION IN VIVO 18
2.2.2. FERTILISATION IN VITRO 19
2.3. EMBRYONALENTWICKLUNG 22
2.4. DIE ROLLE DER LIPIDE ALS EINE ENERGIEQUELLE WAEHREND DER
OOZYTENREIFUNG
UND FRUEHEN EMBRYONALENTWICKLUNG 23
2.4.1. BEDEUTUNG DER LIPIDE IN DEN OOZYTEN WAEHREND DER REIFUNG UND
BEFRUCHTUNG 24
2.4.2. VERAENDERUNG DER LIPIDE IN EMBRYONEN 28
2.5. SERUM ALS ZUSATZ ZUM MEDIUM 30
2.6. METHODEN ZUM NACHWEIS VON LIPIDEN 35
3. MATERIAL UND METHODEN 37
3.1. UNTERSUCHUNGSMATERIAL 37
3.2. GEWINNUNG DER OVARIEN 42
3.3. GEWINNUNG UND KLASSIFIZIERUNG DER CUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE (COK) 42
3.4. IN-VITRO-MATURATION (IVM) 44
3.5. IN-VITRO-FERTILISATION (IVF) 44
3.5.1. SPERMIENAUFBEREITUNG 44
3.5.2. BEFRUCHTUNG 45
3.6. IN-VITRO-KULTIVIERUNG 45
3.7. BEURTEILUNG DER CHROMATINKONFIGURATION IN DEN OOZYTEN UND DER KERNE
IN DEN
EMBRYONEN UND BESTIMMUNG DER VERTEILUNG UND AKTIVITAET VON LIPIDTROPFEN
IM
OOPLASMA 45
3.7.1. ENTFERNEN DES CUMULUS OOPHORUS 45
3.7.2. FAERBUNG VON LIPIDEN 46
3.7.3. FIXIERUNG 46
3.7.4. FAERBUNG DES CHROMATINS IN DEN ZELLKERNEN 48
3.7.5. FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG 48
3.8. STATISTISCHE AUSWERTUNG 49
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IMAGE 2
4. ERGEBNISSE 50
4.1. UNTERSUCHUNGEN ZUR VERAENDERUNG DES CHROMATINS IN BOVINEN OOZYTEN
WAEHREND DER IVM 50
4.2. UNTERSUCHUNGEN ZU DEN VERAENDERUNGEN DER LIPIDE IN BOVINEN OOZYTEN
WAEHREND DER IVM 53
4.2.1. UNTERSUCHUNGEN ZU DEN LIPIDMUSTERN IM OOPLASMA BOVINER OOZYTEN 53
4.2.2. UNTERSUCHUNGEN ZUM LIPIDGEHALT, GEMESSEN AN DER INTENSITAET DER
FLUORESZENZ
57
4.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR ENTWICKLUNGSKOMPETENZ VON OOZYTEN
UNTERSCHIEDLICHER
KLASSEN 61
4.4 UNTERSUCHUNGEN ZUM LIPIDGEHALT IN BOVINEN OOZYTEN IN ABHAENGIGKEIT
VON DER
SERUMSUPPLEMENTIERUNG WAEHREND DER IN VITRO ENTWICKLUNG 61
4.4.1 EINFLUSS VERSCHIEDENER SEREN WAEHREND DER IVM 61
4.4.2 EINFLUSS VERSCHIEDENER SEREN AUF DEN LIPIDGEHALT WAEHREND DER
EMBRYONALENTWICKLUNG 66
5 DISKUSSION 72
5.1 UNTERSUCHUNGEN ZU NUKLEAREN VERAENDERUNGEN IN OOZYTEN DER
COK-KLASSEN I BIS IV 72
5.2 UNTERSUCHUNGEN ZUM LIPIDGEHALT UND LIPIDMUSTER IN OOZYTEN DER
COK-KLASSEN I BIS IV 74
5.3 ENTWICKLUNGSKOMPETENZ DER OOZYTEN DER COK-KLASSEN I BIS IV 78
5.4 UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS VERSCHIEDENER SEREN 79
5.4.1 UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS DER SEREN WAEHREND DER IVM 80
6 ZUSAMMENFASSUNG 83
7 SUMMARY 85
8 LITERATURVERZEICHNIS 87
9 ANHANG 121
9.1 ZUSAMMENSETZUNG DER VERWENDETEN MEDIEN FUER DIE GEWINNUNG DER
EIZELLEN,
DER IN-VITRO-MATURATION, -FERTILISATION UND -KULTIVIERUNG 121
9.1.1 MEDIUM ZUR COK-GEWINNUNG 121
9.1.2 MEDIEN FUER DIE MATURATION UND KULTIVIERUNG 121
9.1.3 SERUM 123
9.1.4 KAPAZITATIONS- UND BEFRUCHTUNGSMEDIUM (SPERM-TALP, FERT-TALP) 124
9.1.5 HEPARIN- STOCK-LOESUNG ALS ZUSATZ ZUM BEFRUCHTUNGSMEDIUM 125
9.1.6 GENTAMYCIN-STOCK-LOESUNG ALS ZUSATZ ZUM BEFRUCHTUNGSMEDIUM 125
9.1.7 HYPOTAURIN-EPINEPHRIN-STAMM-LOESUNG ALS ZUSATZ ZUM
BEFRUCHTUNGSMEDIUM 125
9.2 MEDIEN FUER DIE ZELLPHYSIOLOGISCHEN UNTERSUCHUNGEN 126
9.2.1 TRYPSIN-EDTA-LOESUNG ZUR ENTFERNUNG DES CUMULUS OOPHORUS 126
IMAGE 3
9.2.2 PBS NACH DULBECCO MIT POLYVENYLALKOHOL (PVA) 126
9.2.3 NILROTFAERBUNG 127
9.2.4 FIXATIONSLOESUNG PARAFORMALDEHYD (3%) 127
9.2.5 PBS-LOESUNG OHNE CA 27MG2 127
9.2.6 CHROMATINFAERBUNG HOECHST 33258 127
10 PUBLIKATIONSVERZEICHNIS 128
11 DANKSAGUNG 129
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title_alt | Research on the bovine oocyte's lipid content and its influence in embryonic developmental capacity before and after in vitro maturation and in vitro fertilization |
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