Thomas Bayrle, Strippenzieher: published on the occasion of dOCUMENTA (13)
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| Veröffentlicht: |
Köln
König
2012
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| Beschreibung: | Text engl. und dt. |
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IMAGE 1
INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
2. ABSTRACT 3
3. EINLEITUNG 5
3.1. AUTOSOMAL DOMINANTE POLYZYSTISCHE NIERENERKRANKUNG (ADPKD) 5
3.1.1. EPIDEMIOLOGIE 5
3.1.2. KRANKHEITSBILD 5
3.1.3. GENETISCHER HINTERGRUND 7
3.2. DER HYPOXIE-INDUZIERBARE FAKTOR (HIF) 8
3.2.1. DIE REGULATION VON HIF 8
3.2.2. HIF IN DER ADULTEN NIERE 10
3.2.3. HIF IN DER ADPKD 11
3.3. ZIELSETZUNG DER DOKTORARBEIT 12
4. MATERIAL UND METHODEN 13
4.1. REAL TIME POLYMERASE CHAIN REACTION (RT-PCR) 13 4.1.1. PRINZIP DER
RT-PCR 13
4.1.2. RNA-ISOLIERUNG 13
4.1.3. REVERSE TRANSKRIPTION (RT) 14
4.1.4. DURCHFUEHRUNG DER RT-PCR 15
4.1.5. TESTUNG DER PRIMER 17
4.1.6. AUSWERTUNG DER RT-PCR ERGEBNISSE 18
4.2. WESTERN BLOT 19
4.2.1. PROTEINGEWINNUNG UND KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 19
4.2.2. SODIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE) 20
4.2.3. DURCHFUEHRUNG DES WESTERN BLOTS 22
HTTP://D-NB.INFO/1029512108
IMAGE 2
4.3. IMMUNHISTOCHEMIE 24
4.3.1. GEWINNUNG UND AUFBEREITUNG DER HISTOLOGISCHEN
PRAEPARATE 24
4.3.2. FAERBUNG DER HISTOLOGISCHEN PRAEPARATE 25
4.3.3. AUSWERTUNG DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN FAERBUNGEN 26
4.4. VERWENDETE ZELLEN 27
4.4.1. MADIN-DARBY CANINE KIDNEY (MDCK)-ZELLEN 27
4.4.2. HUMAN KIDNEY CELLS (HKC-8)-ZELLEN 28
4.5. IN WFRO-ZYSTENMODELL 28
4.5.1. HERSTELLUNG DER KOLLAGENMATRIX UND
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 28
4.5.2. BESTIMMUNG DER ZYSTENGROESSEN IM IN W'FRO-ZYSTENMODELL 30
4.6. HIF-STABILISATOREN UND HIF-INHIBITOREN 32
4.7. STATISTIK 32
4.8. LUCIFERASE-REPORTERGEN-ASSAY 33
4.8.1. VERWENDETE VEKTOREN 33
4.8.2. TRANSFEKTION DER HKC-8 ZELLEN MIT DEN
HIF-1ALUCIFERASE-REPORTERGEN-PLASMIDEN 33
4.8.3. MESSUNG DER LUCIFERASE- UND DER SS-GALACTOSIDASE
AKTIVITAET 34
4.9. CHEMIKALIEN 35
4.10. MATERIALIEN 38
5. ERGEBNISSE 39
5.1. HIF-1A LAESST SICH IN MDCK-ZELLEN STABILISIEREN UND
NACHWEISEN 39
5.2. PHD-INHIBITION FUEHRT ZU EINER STABILISIERUNG VON HIF-1A UND
ZU EINER ZUNAHME DES ZIELGENS GLUT-1 AUF PROTEINEBENE
IM MDCK-ZYSTENMODELL 41
5.3. PHD-INHIBITOREN BEWIRKEN EINE SIGNIFIKANTE ZUNAHME DER
ZYSTENGROESSE IN VITRO 46
IMAGE 3
5.4. PHD-INHIBITOREN FUEHREN ZU EINER VERMEHRTEN PROLIFERATION
DES ZYSTENEPITHELS IM IN WFRO-ZYSTENMODELL 49
5.5. PHD-INHIBITION FUEHRT ZU EINER GESTEIGERTEN
GLUKOSEAUFNAHME DES ZYSTENEPITHELS 50
5.6. TOPOTECAN FUEHRT ZU EINER DOSISABHAENGIGEN INHIBITION DER
HIF-1A-LNDUKTION IN HKC-8 ZELLEN 51
5.7. TOPOTECAN FUEHRT ZU EINER DOSISABHAENGIGEN REDUKTION DER
ZYSTENGROESSE IN VITRO 52
5.8.17-ALLYLAMINO-17-DEMETHOXYGELDANAMYCIN (17AAG) FUEHRT
IM MDCK-ZYSTENMODELL ZUR DEGRADATION VON HIF-1A 53
5.9. HSP90-LNHIBITION FUEHRT ZU EINER VERMINDERTEN ZYSTENGROESSE
IM MDCK-ZYSTENMODELL 54
6. DISKUSSION 56
6.1. VOR- UND NACHTEILE DES MDCK-ZYSTENMODELLS 56 6.2. EXPERIMENTELLE
MOEGLICHKEITEN DAS HIF-SYSTEM ZU
BEEINFLUSSEN 57
6.3. IST HYPOXIE GLEICHBEDEUTEND MIT EINER VERMEHRTEN
STABILISIERUNG VON HIF-1A? 60
6.4. UEBER WELCHE MECHANISMEN STEIGERT HIF-1A DIE PROLIFERATION
DES ZYSTENEPITHELS? 60
6.5. WELCHE ROLLE SPIELEN HIF-2A UND HIF-3A IN MDCK-ZELLEN? 62
6.6. SPIELT HIF-1A MOEGLICHERWEISE AUCH EINE ROLLE BEI DER
ZYSTOGENESE? 62
6.7. KOENNTE HYPOXIE UND DIE AKTIVIERUNG HIF-1A-ABHAENGIGER
ZIELGENE EINEN "3RD-HIT" BEI DER ADPKD BEWIRKEN? 63
6.8. KOENNTE DIE INHIBITION VON HIF-1A EINEN MOEGLICHEN
THERAPIEANSATZ DER ADPKD DARSTELLEN? 64
LITERATURVERZEICHNIS 67
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 74
VORVEROEFFENTLICHUNGEN 76
IMAGE 4
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