Proteolytische Aktivität von APC bei der Inaktivierung verschiedener Faktor VIII-Präparate und bei der Faktor VIIIa-Inaktivierung in Gegenwart eines APC-DNA-Aptamers:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch-und-Buch-Verl.
2012
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| Beschreibung: | Nebentitel: Proteolytic activity of APC on inactivation of different Factor VIII-preparations and on factor VIIIa-inactivation in presence of an APC-DNA-Aptamer |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKTTRZUNGSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG UND FRAGESTELLUNG 1
2. LITERATURUEBERSICHT 3
2.1. HAEMOSTASE 3
2.1.1. PRIMAERE HAEMOSTASE 3
2.1.2. SEKUNDAERE HAEMOSTASE 4
2.1.2.1. EXTRINSISCHES SYSTEM 5
2.1.2.2. INTRINSISCHES SYSTEM 6
2.1.3. INHIBITOREN DER GERINNUNG 6
2.2. DAS PROTEIN-C-SYSTEM 7
2.2.1. THROMBOMODULIN 7
2.2.2. PROTEIN C 8
2.2.3. AKTIVIERTES PROTEIN C 9
2.2.4. PROTEIN S 10
2.2.5. ANTIKOAGULATORISCHE AKTIVITAET VON A P C 10
2.2.6. REGULATION DER APC-AKTIVITAET IM PLASMA 11
2.3. FAKTOR VIII 11
2.3.1. FAKTOR VIII-GEN 11
2.3.2. FAKTOR VHI-PROTEIN 11
2.3.3. FAKTOR VIII-VWF 13
2.3.4. FAKTOR VIII-AKTIVIERUNG 14
2.3.5. FAKTOR V I L L A 15
2.3.6. FAKTOR VLLLA-INAKTIVIERUNG 16
2.4. HAEMOPHILIE A 17
2.5. APTAMERE 19
2.5.1. APTAMERE UND IHRE FUNKTIONELLEN EIGENSCHAFTEN 19
2.5.2. VORTEILE VON APTAMEREN IM HINBLICK A U F IHRE ANWENDUNG 20
2.5.3. EINSATZGEBIETE VON APTAMEREN 22
2.5.3.1. TARGET-VALIDIERUNG 22
2.5.3.2. DIAGNOSTIK 22
2.5.3.3. THERAPIE 23
2.5.4. SELEX 24
2.5.4.1. SELEX-PROZESS ZUR GEWINNUNG VON DNA-APTAMEREN 25
2.5.4.2. SELEX-PROZESS ZUR GEWINNUNG VON RNA-APTAMEREN 26
2.6. SELEKTION VON DNA-APTAMEREN GEGEN APC 27
2.6.1. SELEX-PROZESS 2 7
2.6.2. BINDUNGSEIGENSCHAFTEN UND KLONIERUNG DES SELEKTIERTEN DL-POOLS 2
7
2.6.3. HERSTELLUNG DER APTAMERE H S 0 2 , H S 0 3 , H S 0 4 UND H S 0 8
29
2.6.4. BINDUNGSEIGENSCHAFTEN DER MONOKLONALEN APTAMERSEQUENZEN 29
2.6.5. SPEZIFITAET DER MONOKLONALEN APTAMERSEQUENZEN 30
2.6.6. SEKUNDAERSTRUKTUR-ANALYSE, HERSTELLUNG UND AUFREINIGUNG DER
HS02-VARIANTEN 31 3. MATERIAL UND METHODEN 33
3.1. BLUTGERINNUNGSFAKTOR VHI-PRAEPARATE 33
3.2. PUFFER 33
3.3.1. KOAGULOMETRISCHE GERINNUNGSTESTE 35
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.3.1.1. MESSUNG MIT IMMUNADSORBIERTEM FAKTOR VIIL-MANGELPLASMA 35
3.3.1.2. MESSUNG MIT NATUERLICHEM FAKTOR VIII-MANGELPLASMA 36
3.3.2. AMIDOLYTISCHE AKTIVITAETSTESTUNG 36
3.4. WIRKUNG VON APC A U F AKTIVIERTE FAKTOR VHI-PRAEPARATE 37
3.5. UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES EINES APC-APTAMERS A U F AKTIVIERTES
PROTEIN C 39
3.5.1. AKTIVIERUNG DES VERWENDETEN FAKTOR VIII-KONZENTRATES RECOMBINATE
39
3.5.1.1. UNTERSUCHUNG DES EINFLUSS DER THROMBINKONZENTRATION A U F DIE
FAKTOR VIII-AKTIVIERUNG 40
3.5.1.2. KINETISCHE UNTERSUCHUNG DER FAKTOR VIII-AKTIVIERUNG 40
3.5.2. INAKTIVIERUNG DES AKTIVIERTEN FAKTOR VIII-KONZENTRATES DURCH APC
40
3.5.3. BESTIMMUNG DER INAKTIVIERUNG VON FAKTOR VIII DURCH
APTAMER-GEBUNDENES APC 42 3.5.3.1. EINFLUSS DER KONZENTRATION DER
HS02-APTAMER-VARIANTEN A U F DIE FAKTOR VIII AKTIVITAET 4 3 3.5.3.2.
KINETISCHE UNTERSUCHUNG DER FAKTOR VIII-AKTIVITAET BEI APTAMER-GEBUNDENEM
APC 4 4 3.6. STATISTISCHE AUSWERTUNG 45
4. ERGEBNISSE 47
4.1. BESTIMMUNG DER AKTIVITAET IN FAKTOR VHI-PRAEPARATEN 4 7
4.2. AKTIVIERUNG VON FAKTOR VHI-PRAEPARATEN IN ABHAENGIGKEIT VON DER
THROMBIN-KONZENTRATION 4 8
4.2.1. UEBERPRUEFUNG DES EINFLUSSES VON HIRUDIN A U F DIE AKTIVITAET VON
FAKTOR VIII 4 8
4.2.2. UEBERPRUEFUNG DES EINFLUSSES VON HIRUDIN A U F DIE AKTIVITAET VON
THROMBIN 49
4.2.3. BESTIMMUNG DER FAKTOR VIII-AKTIVIERUNG MITTELS KOAGULOMETRISCHER
MESSUNG 50 4.2.4. BESTIMMUNG DER FVIII-AKTIVIERUNG MITTELS EINES
FLUOROGENEN ASSAYS 52
4.3. UEBERPRUEFUNG DES EINFLUSSES VON VERSCHIEDENEN FAKTOR
VIII-KONZENTRATIONEN A U F DEREN THROMBIN-VERMITTELTE AKTIVIERUNG 53
4.4. ETABLIERUNG EINES ASSAYS Z U M NACHWEIS EINES THROMBIN-INHIBITORS
(THROMBIN-NEUTRALISATIONSTEST) 54
4.5. THROMBIN-NEUTRALISATIONSTEST 55
4.6. WIRKUNG VON APC AUF AKTIVIERTE FAKTOR VHI-PRAEPARATE 56
4.7. EINFLUSS DES APC-APTAMERES HS02 UND DESSEN VERKUERZTEVARIANTEN AUF
DIE APC-VERMITTELTE INAKTIVIERUNG VON FAKTOR V I L L A 58
4.7.1. THROMBIN-VERMITTELTE AKTIVIERUNG DES FAKTOR VIII-KONZENTRATES
RECOMBINATE 58 4.7.2. APC-INDUZIERTE INAKTIVIERUNG VON FAKTOR VILLA
(RECOMBINATE) 60
4.7.3. INTRA-ASSAY-VARIANZ 60
4.7.4. EINFLUSS DER HS02-APTAMER-VARIANTEN A U F DIE APC-INDUZIERTE
INAKTIVIERUNG VON FAKTOR V I L L A 61
4.7.5. UBERPRUEFUNG DES EINFLUSSES DER HS02-VARIANTEN A U F DIE AKTIVITAET
DES TENASE-KOMPLEXES 63
4.7.6. VERGLEICHENDE KINETISCHE UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES VON HS02-88
UND HS02-44G A U F DIE FAKTOR VHIA-INAKTIVIERUNG 64
5. DISKUSSION 65
5.1. BESTIMMUNG DER FAKTOR VIII-AKTIVITAET DER FAKTOR VHI-PRAEPARATE 65
5.2. VERGLEICHENDE AKTIVIERUNG DER FAKTOR VHI-PRAEPARATE DURCH THROMBIN
70
5.3. VERGLEICHENDE INAKTIVIERUNG DER FAKTOR VHI-PRAEPARATE DURCH A P C 74
5.4. BEEINFLUSSUNG DER PROTEOLYTISCHEN AKTIVITAET VON APC BEI DER
INAKTIVIERUNG VON FAKTOR V I L L A DURCH DAS APC-DNA-APTAMER HS02 75
6. AUSBLICK 81
7. ZUSAMMENFASSUNG 83
8. SUMMARY 85
9. LITERATURVERZEICHNIS 87
10. ANHANG 105
10.1. LABORGERAETE 105
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
10.2. CHEMIKALIEN, BIOCHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 105
11. PUBLIKATIONEN 106
12. DANKSAGUNG 107
13. SELBSTAENDIGKEITSERKLAERUNG 108
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| spelling | Dücker, Christina Verfasser (DE-588)1024379280 aut Proteolytische Aktivität von APC bei der Inaktivierung verschiedener Faktor VIII-Präparate und bei der Faktor VIIIa-Inaktivierung in Gegenwart eines APC-DNA-Aptamers vorgelegt von Christina Dücker Proteolytic activity of APC on inactivation of different Factor VIII-preparations and on factor VIIIa-inactivation in presence of an APC-DNA-Aptamer Berlin Mensch-und-Buch-Verl. 2012 109 S. graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Nebentitel: Proteolytic activity of APC on inactivation of different Factor VIII-preparations and on factor VIIIa-inactivation in presence of an APC-DNA-Aptamer Berlin, Freie Univ., Diss., 2012 factor VIII cabt nucleotide sequences cabt haemostasis cabt Aptamer (DE-588)4441960-0 gnd rswk-swf Hämophilie A (DE-588)4243053-7 gnd rswk-swf Protein C (DE-588)4123994-5 gnd rswk-swf Substitutionstherapie (DE-588)4206768-6 gnd rswk-swf Gerinnungsfaktor VIII (DE-588)4156835-7 gnd rswk-swf Inhibitor (DE-588)4027007-5 gnd rswk-swf Inaktivierung (DE-588)4284643-2 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Hämophilie A (DE-588)4243053-7 s Gerinnungsfaktor VIII (DE-588)4156835-7 s Substitutionstherapie (DE-588)4206768-6 s Inaktivierung (DE-588)4284643-2 s Protein C (DE-588)4123994-5 s Inhibitor (DE-588)4027007-5 s Aptamer (DE-588)4441960-0 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000038197-1 http://www.diss.fu-berlin.de/diss/receive/FUDISS_thesis_000000038197 kostenfrei Volltext DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=025175798&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
| spellingShingle | Dücker, Christina Proteolytische Aktivität von APC bei der Inaktivierung verschiedener Faktor VIII-Präparate und bei der Faktor VIIIa-Inaktivierung in Gegenwart eines APC-DNA-Aptamers factor VIII cabt nucleotide sequences cabt haemostasis cabt Aptamer (DE-588)4441960-0 gnd Hämophilie A (DE-588)4243053-7 gnd Protein C (DE-588)4123994-5 gnd Substitutionstherapie (DE-588)4206768-6 gnd Gerinnungsfaktor VIII (DE-588)4156835-7 gnd Inhibitor (DE-588)4027007-5 gnd Inaktivierung (DE-588)4284643-2 gnd |
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