Intramyokardiale Transplantation von humanen, mesenchymalen Progenitorzellen zur Therapie des akuten Myokardinfarktes der Nacktratte:
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I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 4
1.1 EPIDEMIOLOGIE UND PATHOGENESE DER KORONAREN HERZERKRANKUNG 4
1.2 PATHOGENESE DER ISCHAEMISCHEN KARDIOMYOZYTENSCHAEDIGUNG. 5
1.2.1 ULTRASTRUKTURELLE VERAENDERUNGEN 5
1.2.2 HISTOPATHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN 6
1.3. INFLAMMATIONSPHASE 8
1.3.1 INITIATION DER ENTZUENDUNGSREAKTION 8
1.3.2 MEDIATORZELLEN DER INFLAMMATION 9
1.3.3 CHEMOKIN- UND ZYTOKINKASKADE UND DEREN BEDEUTUNG IM VERLAUF DER
INFLAMMATION 13
1.4 UEBERGANG VON DER ENTZUENDUNGS- ZUR PROLIFERATIONSPHASE 20
1.4.1 ABRAEUMEN VON NEKROTISCHEN ZELLEN UND FRAGMENTEN DER ZERSTOERTEN ECM
21 1.4.2 IL-10 UND TGF-SS ALS MEDIATOREN DER SUPPRESSION DER INFLAMMATION
22
1.5 PROLIFERATIONSPHASE 24
1.5.1 ANGIOGENESE IM GRANULATIONSGEWEBE 24
1.5.2 UMBAU (TURN-OVER) DER EXTRAZELLULAER-MATRIX: AKTIVIERUNG DER
FIBROBLASTEN ZU MYOFIBROBLASTEN UND KOLLAGENDEPOSITION IM
GRANULATIONSGEWEBE 27
1.6 AUSREIFUNG DER NARBE 29
1.6.1 VERAENDERUNG DER LV-MORPHOLOGIE IM ZEITVERLAUF: MAKROSKOPIE UND
MIKROSKOPIE 29
1.6.2 AN DER NARBENREIFUNG BETEILIGTE ZYTOKINE UND WACHSTUMSFAKTOREN 30
1.6.3 OBERGANG ZUR CHRONISCHEN MYOKARDIALEN INSUFFIZIENZ - STRUKTURELLE
UND FUNKTIONELLE AUSWIRKUNG DES SPAETEN REMODELINGS 32
1 .7 GEWEBEREGENERATION DURCH AUS DEM KNOCHENMARK MOBILISIERTE ENDOGENE
STAMMZELLEN 34
1.8 APOPTOSE : 38
1.8.1 AKTIVIERUNG UND REGULATION DER APOPTOSE 38
1.8.2 APOPTOSE IM VERLAUF DES MYOKARDINFARKTES 41
1.9. IGF-11 NACH AMI 43
1.10 STAMMZELLTHERAPIE - MYOKARDREGENERATION ALS KAUSALE THERAPIE DER
MYOKARDSCHAEDIGUNG 46
1.10.1 GRUNDLAGEN UND HYPOTHESEN ZUM WIRKMECHANISMUS DER STAMMZELLEN IM
MYOKARD 46
1.10.2 ADULTE STAMMZELLEN IN DER THERAPIE DES MYOKARDINFARKTES 53
1.11 CHARAKTERISIERUNG DER VERWENDETEN UV-MSC 58
1.11.1 MORPHOLOGIE UND DIFFERENZIERUNGSPOTENTIAL DER VERWENDETEN UV-MSC
IN VIVO UND IN VITRO 59
1.11.2 GENEXPRESSION IM VERGLEICH ZU MSC DES KNOCHENMARKS 60
1
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IMAGE 2
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
2. MATERIAL UND METHODEN 61
2.1 ZELLEN 61
2.2. TIERMODEL 61
2.3. HISTOLOGISCHE AUFARBEITUNG DER PROBEN 6 3
2.3.1 HISTOLOGISCHE STANDARD FAERBUNG: MASSON-TRICHROM-FAERBUNG 63
2.3.2 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG DER MYOKARDSCHNITTE: CD68 UND
A-SMC-AKTIN 64 2.3.3 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG DER MYOKARDSCHNITTE: KI67
70
2.4 GENEXPRESSIONSANALYSE 72
2.4.1 RNA-EXTRAKTION 72
2.4.2 REVERSE TRANSKRIPTION 74
2.4.3 TAQMAN-REAL-TIME-PCR 75
2.5 MRT 79
2.6 STATISTISCHE BERECHNUNGEN UND DOKUMENTATION 84
3. ERGEBNISSE 85
3.1. MORPHOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN: HISTOLOGIE, IMMUNHISTOLOGIE UND
IMMUNFLUORESZENZ 85
3.1.1 ERGEBNISSE 3 TAGE NACH DEM INFARKT 85
3.1.2 ERGEBNISSE ZWEI WOCHEN NACH INFARKT 88
3.3. ZYTOKINEXPRESSION IM MYOKARD NACH MYOKARDINFARKT 91
3.5 EVALUATION DER MYOKARDIALEN PUMPFUNKTION IN VIVO 9 7
4. DISKUSSION 99
4.1 GRUNDLEGENDE GLIEDERUNG DER ARBEIT 9 9
4.2 AUSWIRKUNG DER TRANSPLANTATION A U F DIE INFLAMMATIONSPHASE DER
INFARKTHEILUNG.,101
4.2.1 HISTOMORPHOLOGISCHE ERGEBNISSE: EVALUATION VON
ENTZUENDUNGS-INFILTRAT UND PROLIFERATIONSRATE 101
4.2.2 GENEXPRESSIONSANALYSE 103
4.3 AUSWIRKUNG DER TRANSPLANTATION A U F DIE PROLIFERATIONSPHASE DER
INFARKTHEILUNG....L07 4.3.1 HISTOMORPHOLOGISCHE UND FUNKTIONELLE
ERGEBNISSE: EVALUATION VON GEFAESSDICHTE, INFARKTGROESSE UND KONTRAKTILER
FUNKTION 107
4.3.2 GENEXPRESSIONSANALYSE 111
4.4 DIE ERGEBNISSE IM KONTEXT DER PHYSIOLOGISCHEN INFARKTHEILUNG 113
4.5 DISKUSSION DER VERWENDETEN MSC AUS DEM SUBENDOTHEL DER UMBILIKALVENE
115
4.6 ABSCHLIESSENDE GESAMTBEWERTUNG DES VERSUCHSERGEBNISSES 117
IMAGE 3
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
4.7 UEBERBLICK UEBER DIE FUNKTION DER GEMESSENEN ZYTOKINE OHNE
SIGNIFIKANTES
ERGEBNIS 120
5. ZUSAMMENFASSUNG 126
6. LITERATURVERZEICHNIS 130
7. TABELLENVERZEICHNIS 142
8. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 143
9. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 146
10. DANKSAGUNG 149
3
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