Studien zur systemischen Absorption und zum Metabolismus von Anthocyanen im Tiermodell Schwein:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 KENNTNISSTAND 3
2.1 ALLGEMEINES ZUR STOFFGRUPPE DER ANTHOCYANE 3
2.2 CHEMISCHE UND PHYSIKALISCHE EIGENSCHAFTEN VON ANTHOCYANEN 3
2.2.1 PRIMAERE STRUKTUR VON ANTHOCYANEN 3
2.2.2 SEKUNDAERE STRUKTUREN UND FARBGEBUNG VON ANTHOCYANEN IN
ABHAENGIGKEIT VOM
PH-WERT 4
2.2.3 COPIGMENTIERUNG 6
2.2.4 METALLOANTHOCYANE 7
2.2.5 STABILITAET VON ANTHOCYANIDINEN UND ANTHOCYANEN 8
2.2.6 VORKOMMEN IN DER NATUR 9
2.2.7 AUFNAHMEMENGEN VON ANTHOCYANEN MIT DER NAHRUNG 11
2.3 ERKENNTNISSE ZUR BIOVERFUEGBARKEIT, ZUR ABSORPTION UND ZUM
METABOLISMUS VON
ANTHOCYANEN 12
2.3.1 BIOVERFUEGBARKEIT VON ANTHOCYANEN 12
2.3.2 ABSORPTIONS- UND TRANSPORTMECHANISMEN 14
2.3.3 METABOLISMUS UND EXKRETION VON ANTHOCYANEN 17
2.3.4 AKKUMULATION VON ANTHOCYANEN IN GEWEBEN UND ORGANEN 18
2.4 PHYSIOLOGISCHE EFFEKTE VON ANTHOCYANEN 19
2.4.1 ANTIOXIDATIVE AKTIVITAET 19
2.4.2 ANTIKANZEROGENE WIRKUNG 21
2.4.3 ANTIINFLAMMATORISCHES POTENTIAL 22
2.4.4 ANTIADIPOESE UND ANTIDIABETISCHE EFFEKTE 23
2.4.5 AUSWIRKUNGEN VON ANTHOCYANEN AUF DAS SEHVERMOEGEN 24
2.4.6 SONSTIGE EFFEKTE 26
2.5 ANALYTIK VON ANTHOCYANEN 28
2.5.1 EXTRAKTION AUS DEM UNTERSUCHUNGSMATERIAL 28
2.5.2 METHODEN ZUR AUFREINIGUNG DER EXTRAKTE 28
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IMAGE 2
II
2.5.3 AUFTRENNUNG UND IDENTIFIZIERUNG DER VERSCHIEDENEN VERBINDUNGEN 29
2.5.4 DETEKTION VON ANTHOCYANEN 30
2.6 TESTSYSTEME ZUR BESTIMMUNG DER ANTIOXIDATIVEN AKTIVITAET 31
2.7 DIE HEIDELBEERE 33
2.7.1 DIE WILDHEIDELBEERE ( VACCINIUM MYRTILLUS) 33
2.7.2 DIE KULTURHEIDELBEERE ( VACCINIUM CORYMBOSUM) 33
2.7.3 EINSATZ VON HEIDELBEEREN IN DER TRADITIONELLEN MEDIZIN 34
2.7.4 ANTHOCYANPROFIL DER HEIDELBEERE 34
2.8 DAS SCHWEIN ALS MODELLSYSTEM FUER HUMANE METABOLISMUSSTUDIEN 35
3 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 37
3.1 PROBLEMSTELLUNG UND ZIELSETZUNG 37
3.2 ISOLIERUNG VON REFERENZSUBSTANZEN 39
3.3 ETABLIERUNG VON ANALYSENMETHODEN ZUR BESTIMMUNG VON ANTHOCYANEN UND
PHENOLCARBONSAEUREN IN VERSCHIEDENEN PHYSIOLOGISCHEN MATRICES 42
3.3.1 BESTIMMUNG VON ANTHOCYANEN IN PLASMAPROBEN 42
3.3.2 ETABLIERUNG EINER HPLC-DAD-METHODE ZUR ANALYTIK VON ANTHOCYANEN 44
3.3.3 BESTIMMUNG VON ANTHOCYANEN IN URINPROBEN 45
3.3.4 ETABLIERUNG EINER HPLC-MS/MS-METHODE 47
3.3.5 BESTIMMUNG VON ANTHOCYANEN IN FAECES- UND
GASTROINTESTINALTRAKTPROBEN ....48
3.3.6 BESTIMMUNG VON PHENOLCARBONSAEUREN IN PLASMA- UND URINPROBEN
MITTELS
GC-MS 66
3.3.7 BESTIMMUNG VON HIPPURSAEURE 69
3.3.8 BESTIMMUNG VON PHENOLCARBONSAEUREN IN VERSCHIEDENEN
GASTROINTESTINALTRAKTINHALTEN UND FAECESPROBEN 70
3.3.9 BESTIMMUNG DER ANTIOXIDATIVEN AKTIVITAET IN VERSCHIEDENEN
PHYSIOLOGISCHEN
MATRICES 72
3.4 KINETIK-STUDIE MIT ANTHOCYANEN IM TIERMODELL SCHWEIN 73
3.4.1 STUDIENDESIGN 73
3.4.2 ANTHOCYANGEHALTE IM PLASMA 74
3.4.3 ANTHOCYANGEHALTE IM URIN 76
IMAGE 3
III
3.4.4 ANTHOCYANGEHALTE IM FAECES 77
3.4.5 PHENOLCARBONSAEUREGEHALTE IM FUTTER 80
3.4.6 PHENOLCARBONSAEUREGEHALTE IM HEIDELBEEREXTRAKT 81
3.4.7 PHENOLCARBONSAEUREGEHALTE IM PLASMA 82
3.4.8 PHENOLCARBONSAEURENGEHALTE IM URIN 82
3.4.9 PHENOLCARBONSAEUREGEHALTE IN DEN FAECESPROBEN 89
3.4.10 ANTIOXIDATIVE AKTIVITAETEN 93
3.4.11 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE DER KINETIK-STUDIE 96
3.5 STEADY-STATE-STUDIE MIT ANTHOCYANEN IM TIERMODELL SCHWEIN 100
3.5.1 STUDIENDESIGN 100
3.5.2 LEISTUNGSPARAMETER 100
3.5.3 KLINISCH-CHEMISCHE BLUTPARAMETER 102
3.5.4 ORGANGEWICHTE UND HISTOLOGISCHE BEFUNDE 103
3.5.5 ANTHOCYANGEHALTE IM PLASMA UND IM URIN 103
3.5.6 ANTHOCYANGEHALTE IN DEN EINZELNEN ABSCHNITTEN DES
GASTROINTESTINALTRAKTES.104
3.5.7 PHENOLCARBONSAEUREN IM FUTTER 105
3.5.8 PHENOLCARBONSAEUREN IM APPLIZIERTEN HEIDELBEEREXTRAKT 106
3.5.9 PHENOLCARBONSAEUREN IM PLASMA 106
3.5.10 PHENOLCARBONSAEUREN IM URIN 107
3.5.11 PHENOLCARBONSAEUREN IN DEN INHALTEN DES GASTROINTESTINALTRAKTES
109
3.5.12 ANTIOXIDATIVE AKTIVITAETEN UND UNTERSUCHUNGEN ZUR
LYMPHOZYTENPROLIFERATION 118
3.5.13 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE DER STEADY-STATE-STUDIE 122
4 MATERIAL UND METHODEN 127
4.1 MATERIAL 127
4.1.1 CHEMIKALIEN 127
4.1.2 FESTPHASENEXTRAKTIONSMATERIALIEN 127
4.1.3 EXTRAKTIONSMATERIAL 129
4.2 GERAETE 129
4.2.1 HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE (HPLC) 129
IMAGE 4
IV
4.2.2 HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE-TANDEMMASSENSPEKTROMETRIE
(HPLC-MS/MS) 131
4.2.3 GASCHROMATOGRAPHIE-MASSENSPEKTROMETRIE (GC-MS) 134
4.2.4 MIKROTITERPLATTEN-LESEGERAET 136
4.2.5 SONSTIGE GERAETE 137
4.3 METHODEN ZUR ISOLIERUNG VON REFERENZSUBSTANZEN 138
4.3.1 BESTIMMUNG DES ANTHOCYANPROFILS IN VERSCHIEDENEN FRUECHTEN 138
4.3.2 EXTRAKTION VON ANTHOCYANEN AUS FRUECHTEN 138
4.3.3 AUFREINIGUNG UND KONZENTRIERUNG DER ROHEXTRAKTE 139
4.3.4 ISOLIERUNG VON ANTHOCYAN-REFERENZSUBSTANZEN MITTELS HPLC 139
4.3.5 AUFREINIGUNG DER ISOLIERTEN ANTHOCYAN-REFERENZSUBSTANZEN 139
4.3.6 UEBERPRUEFUNG DER REINHEIT UND IDENTIFIZIERUNG DER ISOLIERTEN
REFERENZ
SUBSTANZEN 139
4.4 ANALYTISCHE METHODEN 140
4.4.1 BESTIMMUNG VON ANTHOCYANEN IN PLASMAPROBEN 140
4.4.2 BESTIMMUNG VON ANTHOCYANEN IN URINPROBEN 140
4.4.3 KULTIVIERUNGSVERFAHREN ZUM NACHWEIS DER MIKROBIOTISCHEN AKTIVITAET
IN
GEFRIERGETROCKNETEN FAECESPROBEN 141
4.4.4 BESTIMMUNG DER ANTHOCYANGEHALTE IN VERSCHIEDENEN
GASTROINTESTINALTRAKTINHALTEN UND FAECESPROBEN 142
4.4.5 DURCHFUEHRUNG DES FAECES-INKUBATIONSVERSUCHES 143
4.4.6 VERSUCHE ZUR ENZYMATISCHEN SPALTUNG DER
FAECESBESTANDTEIL-ANTHOCYANBINDUNGEN 143
4.4.7 BESTIMMUNG DES ANTHOCYANGEHALTES IN FAECESPROBEN MITTELS
NAHINFRAROT
SPEKTROSKOPIE (NIRS) 145
4.4.8 BESTIMMUNG VON PHENOLCARBONSAEUREN IN PLASMAPROBEN 145
4.4.9 BESTIMMUNG VON PHENOLCARBONSAEUREN IN URINPROBEN 146
4.4.10 BESTIMMUNG DES HIPPURSAEUREGEHALTES IN URINPROBEN 147
4.4.11 KREATININ-BESTIMMUNG 147
IMAGE 5
V
4.4.12 BESTIMMUNG VON PHENOLCARBONSAEUREN IM SCHWEINEFUTTER UND IN
GASTROINTESTINALTRAKTINHALTEN 147
4.4.13 BESTIMMUNG DER KLINISCH-CHEMISCHEN BLUTPARAMETER 148
4.4.14 BESTIMMUNG DER ANTIOXIDATIVEN AKTIVITAET IN VERSCHIEDENEN
PHYSIOLOGISCHEN
PROBENMATRICES 149
4.4.15 LYMPHOZYTENPROLIFERATION MIT ANSCHLIESSENDEN MTT-TEST FUER PORCINE
PERIPHERE
MONONUKLEAERE ZELLEN (EX VIVO) 150
4.5 METHODEN ZUR DURCHFUEHRUNG DER KINETIK-STUDIE 152
4.5.1 STUDIENDESIGN 152
4.5.2 FUTTERZUSAMMENSETZUNG 153
4.5.3 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG UND PROBENNAHME 153
4.6 METHODEN ZUR DURCHFUEHRUNG DER STEADY-STATE-STUDIE 154
4.6.1 STUDIENDESIGN 154
4.6.2 FUTTERZUSAMMENSETZUNG 155
4.6.3 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG UND PROBENNAHME 155
4.7 STATISTISCHE AUSWERTUNG 157
5 ZUSAMMENFASSUNG 159
6 LITERATUR 165
7 ANHANG 183
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