Entwicklung und Prüfung eines Impfstoffes gegen die Ödemkrankheit der Schweine:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler
2010
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Edition scientifique
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| Beschreibung: | VII, 164 S. Ill., graph. Darst. 21 cm, 350 g |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGEN IV
1 EINLEITUNG 1
2 SCHRIFTTUM 3
2.1 DIE OEDEMKRANKHEIT DER SCHWEINE 3
2.2 EDEMA DISEASE E. COLI (EDEC) 5
2.3 DER VIRULENZFAKTOR *SHIGATOXIN 2E" 7
2.4 OEDEMKRANKHEITSMODELLE 13
2.5 AKTIVE IMMUNISIERUNG GEGEN DIE OEDEMKRANKHEIT 19
2.5.1 IMPFSTOFFE AUF BASIS VON CHEMISCH-INAKTIVIERTEM SHIGATOXIN 2E 20
2.5.2 IMPFSTOFFE AUF BASIS VON GENTECHNISCH-INAKTIVIERTEN SHIGATOXINEN
23
3 MATERIAL UND METHODEN 34
3.1 BAKTERIENSTAEMME 34
3.2 GENTECHNISCH VERAENDERTE MIKROORGANISMEN (GVOS) 34
3.3 PLASMIDE 35
3.4 ANTIKOERPER 37
3.5 SERUMPROBEN 37
3.6 TIERE 37
3.7 BAKTERIOLOGISCHE METHODEN 39
3.7.1 ANZUCHT VON BAKTERIEN 39
3.7.2 KEIMZAHLBESTIMMUNG 39
3.7.3 STERILITAETSKONTROLLE 39
3.7.4 DEKONTAMINATION 40
3.8 MOLEKULARGENETISCHE METHODEN 40
3.8.1 PRAEPARATION VON DNS 40
3.8.2 BESTIMMUNG VON DNS-KONZENTRATIONEN 40
3.8.3 POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 41
3.8.4 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 44
3.8.5 DNS-RESTRIKTION 44
3.8.6 DNS-KLONIERUNG IN PET-24B(+) 45
3.8.7 ORTSPEZIFISCHE MUTAGENESE 45
3.8.8 DNS-SEQUENZIERUNG 45
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/1009828827
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.9 PROTEINPRAEPARATIVE UND -ANALYTISCHE METHODEN 46
3.9.1 UEBERSICHT UEBER DIE HERGESTELLTEN STX2E- UND RSTX2E-PRAEPARATE 46
3.9.2 PRAEPARATION VON SHIGATOXIN 2E AUS BAKTERIENZELLLYSAT 46
3.9.3 PRAEPARATION VON SHIGATOXIN 2E AUS DEM PERIPLASMA
(POLYMYXIN-B-METHODE) .47 3.9.4 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 48
3.9.5 TRICINE-NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(TRICINE-SDS-PAGE) 48
3.9.6 RSTX2E-HALTIGES UND RSTX2E-FREIES-CHALLENGEMATERIAL 48
3.9.7 IMPFANTIGENE 49
3.10 SEROLOGISCHE METHODEN 49
3.10.1 IMMUNOBLOT 49
3.10.2 ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY FUER ANTIKOERPER GEGEN STX2E
(ELISARFAEME) 50
3.10.3 RIDASCREENFVEROTOXINELISA 51
3.10.4 SIFIN-STX2E-ELISA 53
3.11 ZELLKULTURMETHODEN 54
3.11.1 KULTIVIERUNG VON VEROZELLEN 54
3.11.2 VEROZELL-ZYTOTOXIZITAETSTEST 54
3.11.3 STX2E-NEUTRALISATIONSTEST(STX2E-NT-TEST) 56
3.12 TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 57
3.12.1 PRINZIP DES ETABLIERTEN OEDEMKRANKHEITSMODELLS 57
3.12.2 TIERHALTUNG 58
3.12.3 IMPFUNGEN 58
3.12.4 INTRAVENOESE INOKULATION VON RSTX2E 58
3.12.5 PARAMETER BEI DER VERSUCHSAUSWERTUNG 58
3.12.6 UEBERSICHT UEBER DIE DURCHGEFUEHRTEN TIERVERSUCHE 58
3.13 STATISTISCHE AUSWERTUNG 61
3.14 BILDDOKUMENTATION 61
4 ERGEBNISSE 62
4.1 REKOMBINANTE HERSTELLUNG VON SHIGATOXIN 2E 62
4.1.1 KLONIERUNG DES STX2E-GENS IN DEN EXPRESSIONSVEKTOR PET-24B(+) 62
4.1.2 GENETISCHE IDENTITAETSPRUEFUNG DER TRANSFORMANTEN 62
4.2 HERSTELLUNG VON GENTECHNISCH MUTIERTEM RSTX2E 62
4.2.1 EINFUEHRUNG VON ORTSPEZIFISCHEN MUTATIONEN IN DAS SFX2E-GEN 62
4.2.2 GENETISCHE IDENTITAETSPRUEFUNG DER TRANSFORMANTEN 64
4.3 CHARAKTERISIERUNG VON RSTX2E UND GENTECHNISCH MUTIERTEM RSTX2E 71
4.3.1 QUALITATIVER NACHWEIS DER BILDUNG VON RSTX2E UND RSTX2E MUR DURCH
TRANSFORMIERTE . CO//-STAEMME 71
4.3.2 SUBZELLULAERE LOKALISATION UND ZYTOTOXISCHE AKTIVITAET VON RSTX2E
UND MUTIERTEM RSTX2E 74
4.3.3 EINFLUSS DER KULTURBEDINGUNGEN AUF DIE RSTX2E-EXPRESSION 76
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS IH_
4.4 HERSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON RSTX2E- UND' RSTX2E
MUT-LMPFANTIGEN-CHARGEN 79
4.4.1 IMPFANTIGEN AUS CHEMISCH INAKTIVIERTEM RSTX2E 79
4.4.2 IMPFANTIGEN AUS GENTECHNISCH INAKTIVIERTEM RSTX2E (RSTX2E MUT) 80
4.5 ETABLIERUNG UND VALIDIERUNG DES OEDEMKRANKHEITSMODELLS 80
4.5.1 MORTALITAET IN ABHAENGIGKEIT VON DER RSTX2E-DOSIS 83
4.5.2 HUMORALE IMMUNANTWORT AUF DIE INTRAVENOESE RSTX2E-APPLIKATION 83
4.6 IMMUNISIERUNGSVERSUCHE AN FERKELN 85
4.6.1 WIRKUNG VON RSTX2E-LMPFSTOFFEN AUF DIE MORTALITAET IM
OEDEMKRANKHEITSMODELL. 86
4.6.2 HUMORALE IMMUNANTWORT AUF DIE IMPFUNG MIT RSTX2E-LMPFSTOFFEN 90
4.6.2.1 INDUKTION VON ANTIKOERPERN GEGEN E. CO//-ANTIGENE 90
4.6.2.2 INDUKTION VON STX2E-NEUTRALISIERENDEN ANTIKOERPERN 92
4.6.2.3 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN DEM TITER AN STX2E-NEUTRALISIERENDEN
ANTIKOERPERN UND DER MORTALITAET 96
4.6.2.4 KORRELATION ZWISCHEN DEN MESSDATEN AUS DEM ELISA RSTX2E UND DEM
STX2E- NEUTRALISATIONSTEST 97
5 BESPRECHUNG DER ERGEBNISSE 98
6 ZUSAMMENFASSUNG 117
SUMMARY 119
7 LITERATUR 121
ANHANG 132
DANKSAGUNG 165 |
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