Phosphorylierungsstatus und Verteilungsmuster von Beta-Catenin in bovinen Embryonen um den Zeitpunkt der Aktivierung des embryonalen Genoms:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch und Buch Verl.
2011 [erschienen] 2012
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| Beschreibung: | Nebentitel: Phosphorylation status and distribution pattern of beta-catenin in bovine embryos around the time of embryonic genome activation |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VII
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATUR 3
2.1 PRAEIMPLANTATORISCHE EMBRYONALENTWICKLUNG 3
2.1.1 UEBERBLICK/ABLAUF. 3
2.1.2 ERSTE DIFFERENZIERUNGSEREIGNISSE 4
2.1.3 ZELLKONTAKTE UND ZELLKOMMUNIKATION 5
2.1.4 GENEXPRESSION WAEHREND DER PRAEIMPLANTATORISCHEN
EMBRYONALENTWICKLUNG 6
2.2 AKTIVIERUNG DES EMBRYONALEN GENOMS 7
2.2.1 DEFINITION UND BEDEUTUNG 7
2.2.2 ZEITPUNKT DER AKTIVIERUNG DES EMBRYONALEN GENOMS 8
2.2.3 CHARAKTERISTIKA DER EMBRYONALEN GENOMAKTIVIERUNG 8
2.2.4 REGULATION DER AKTIVIERUNG DES EMBRYONALEN GENOMS 11
2.3 SS-CATENIN 14
2.3.1 DIE FAMILIE DER CATENINE 14
2.3.2 STRUKTUR VON SS-CATENIN 14
2.3.3 FUNKTIONEN UND VERTEILUNG VON SS-CATENIN 15
2.3.3.1 UEBERBLICK 15
2.3.3.2 ZELLADHAESION 16
2.3.3.3 SIGNALTRANSDUKTION 19
2.3.3.4 GENEXPRESSION 2 1
2.3.3.5 SUBZELLULAERE VERTEILUNG VON SS-CATENIN 23
2.3.3.6 WECHSELWIRKUNGEN ZWISCHEN SIGNALTRANSDUKTION/GENEXPRESSION UND
ZELLADHAESION 2 4
2.3.4 SS-CATENIN WAEHREND DER EMBRYONALENTWICKLUNG 26
3 MATERIAL UND METHODEN 2 8
3.1 VERSUCHSAUFBAU UND UNTERSUCHUNGSMATERIAL 28
3.2 IN-VITRO-PRODUKTIONBOVINER EMBRYONEN 3 1
3.2.1 SPENDERTIERE 31
3.2.2 ENTNAHME DER OVARIEN 31
3.2.3 GEWINNUNG UND AUFSUCHEN DER CUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE 31
3.2.4 KLASSIFIZIERUNG DER CUMULUS-OOZYTEN-KOMPLEXE 32
3.2.5 IN-VITRO-MATURATION 32
3.2.6 IN-VITRO-FERTILISATION 33
I
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.6.1 AUFBEREITUNG DER SPERMIEN/SWIM-UP-VERFAHREN 33
3.2.6.2 BEFRUCHTUNG 33
3.2.7 IN-VITRO-KULTIVIERUNG 34
3.3 VERSUCHSABSCHNITT 1 BIS 4: BEHANDLUNG UND ENTNAHME DER EMBRYONEN
SOWIE
WEITERE AUSWERTUNGEN 35
3.3.1 ZUGABE DES GSK3-INHIBITORS 35
3.3.2 ENTNAHMEZEITPUNKT DER EINZELNEN ENTWICKLUNGSSTADIEN 35
3.3.3 ELEKTROPHORESE UND WESTERNBLOT 37
3.3.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG UND AUSWERTUNG MITTELS KONFOKALER
LASERSCANNINGMIKROSKOPIE 38
3.4 VERSUCHSABSCHNITT 5: LIVE CELL IMAGING UND FRAP-ANALYSEN VON
YFP-CATENIN 39
3.4.1 TRANSFORMATION UND PRAEPARATION DER PLASMID-DNA 4 0
3.4.2 MIKROINJEKTION 4 1
3.4.3 KONFOKALE BILDAUFNAHME UND FRAP-ANALYSEN 4 1
3.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG 42
4 ERGEBNISSE 4 3
4.1 IN-VITRO-PRODUKTION DER EMBRYONEN 4 3
4.2 ENTNAHME DER EMBRYONEN UND EINTEILUNG DER ENTWICKLUNGSSTADIEN 43
4.3 PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS VON SS-CATENIN IN ABHAENGIGKEIT VOM
ENTWICKLUNGSSTADIUM. .44
4.3.1 PROTEINLEVELS IM WESTERNBLOT 4 4
4.3.2 MITTLERE FLUORESZENZINTENSITAET IM LSM 4 6
4.4 VERTEILUNGSMUSTER VON SS-CATENIN IN ABHAENGIGKEIT VOM
ENTWICKLUNGSSTADIUM 4 7
4.5 EINFLUSS DES GSK3-INHIBITORS A U F DIE ENTWICKLUNGSKOMPETENZ DER
EMBRYONEN 53
4.6 PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS VON SS-CATENIN IN ABHAENGIGKEIT VON
ENTWICKLUNGSSTADIUM
UND INHIBITORKONZENTRATION 54
4.6.1 PROTEINLEVELS IM WESTERNBLOT 54
4.6.2 MITTLERE FLUORESZENZINTENSITAET IM LSM 58
4.7 VERTEILUNGSMUSTER VON SS-CATENIN IN ABHAENGIGKEIT VON
ENTWICKLUNGSSTADIUM UND
INHIBITORKONZENTRATION 60
4.8 TRANSLOKATIONSPROZESSE VON SS-CATENIN 71
5 DISKUSSION 74
5.1 EMBRYONENERZEUGUNG 74
5.2 PROTEINLEVEL UND PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS VON SS-CATENIN IM BOVINEN
PRAEIMPLANTATIONSEMBRYO 75
5.3 BINDUNGSEPITOPE DER EINGESETZTEN ANTIKOERPER UND VARIANTEN VON
SS-CATENIN 77
5.4 LOKALISATION UND FUNKTIONEN VON SS-CATENIN IM BOVINEN
PRAEIMPLANTATIONSEMBRYO 79
II
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
5.4.1 SS-CATENIN IN ZELLMEMBRAN UND ZYTOPLASMA 79
5.4.2 SS-CATENIN IM ZELLKERN 82
5.5 PERINUKLEAERE VERDICHTUNG UND TRANSLOKATIONSPROZESSE VON SS-CATENIN 86
5.6 EFFEKTE EINES GSK3-INHIBITORS 88
5.6.1 ZYTOTOXIZITAET DES GSK3-INHIBITORS 89
5.6.2 EINFLUSS DES GSK3-LNHIBITORS AUF PROTEINLEVEL UND
VERTEILUNGSMUSTER VON
SS-CATENIN 89
6 ZUSAMMENFASSUNG 93
7 SUMMARY 95
8 ANHANG 97
8.1 MEDIEN FUER DIE IN-VITRO-PRODUKTION 97
8.2 MEDIEN ZUM WASCHEN ENTNOMMENER EMBRYONEN 102
8.3 MEDIEN FUER GELELEKTROPHORESE UND WESTERNBLOT 103
8.4 MEDIEN FUER DIE IMMUNHISTOCHEMIE 106
9 LITERATURVERZEICHNIS 108
10 DANKSAGUNG 134
11 SELBSTAENDIGKEITSERKLAERUNG 136
III
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| topic_facet | embryonic development preimplantation period Bovidae transactivation gene expression in vitro production Catenine Rind Embryonalentwicklung Präimplantationsphase Hochschulschrift |
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