Molekulare Untersuchung des Ratten-Cytomegalovirus CD200-Homologs:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch und Buch Verl.
2012
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| Beschreibung: | Nebentitel: Molecular analysis of the rat cytomegalovirus (RCMV) CD200-homologue |
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I. INHALTSVERZEICHNIS
I. I N H A L T S V E R Z E I C H N I S 4
II. E I N L E I T U N G ^
1 L I T E R A T U R UE B E R S I C H T 8
1.1 EINTEILUNG DER HERPESVIREN 8
1 . 2 UEBERSICHT DER HERPESVIRUSINFEKTIONEN BEI MENSCH UND TLER 9
1 . 3 CYTOMEGALOVIREN 1 1
1.3.1 DAS RATTEN-CYTOMEGALOVIRUS (RCMV) 12
1.3.2 CD200 UND DIE INTERAKTION MIT DEM CD200-REZEPTOR (CD200R) 13
1.3.3 DAS RCMV-CD200 HOMOLOG 14
1.3.4 VIRALE CD200-HOMOIOGE 15
1.4 HYPOTHESE 1 7
1 . 5 ZIELSETZUNG 1 8
2 M A T E R I A L U N D M E T H O D E N 1 9
2.1 MATERIAL 1 9
2.1.1 SOFTWARE 19
2.1.2 CHEMIKALIEN 19
2.1.3 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 20
2.1.4 ENZYME 21
2.1.5 PUFFER UND LOESUNGEN 21
2.1.6 ANTIKOERPER 2 3
2.1.7 ZELLLINIEN UND MEDIEN 2 3
2.1.8 BAKTERIENSTAEMME UND BAKTERIENMEDIEN 24
2.1.9 PLASMIDE 2 4
2.1.10 KITS 2 4
2.1.11 OLIGONUKLEOTIDE UND TAQMAN-SONDEN 25
2 . 2 METHODEN 2 6
2.2.1 ZELLKULTUR 2 6
2 . 2 . 2 ZELLZAHLBESTIMMUNG MITHIIFE DER NEUBAUERKAMMER 26
2.2.3 PRAEPARATION EINES VIRUSSTOCKS 2 7
2 . 2 . 4 PRAEPARATION VIRALER DNA 2 7
2 . 2 . 5 CO-TRANSFEKTION EUKARYOTISCHERZELLEN MIT CAHPOT 28
2.2.6 ISOLIERUNG DER VCD200-VIRUSREVERTANTE 29
2.2.7 BESTIMMUNG DES VIRUSTITERS 3 0
2.2.8 WACHSTUMSKURVEN 31
2.2.9 DNA-ISOLIERUNG AUS LEBER UND MILZ 32
2.2.10 RNA-ISOLIERUNG AUS ORGANEN 32
2.2.11 HERSTELLUNG VON CDNA 3 2
2 . 2 . 1 2 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 3 3
2.2.13 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 3 4
2 . 2 . 1 4 DNA-ELUIERUNG AUS AGAROSEGELEN 3 5
2.2.15 HERSTELLUNG ELEKTROKOMPETENTER ZELLEN 3 5
2 . 2 . 1 6 TOPO-KLONIERUNG 3 6
2.2.17 REINIGUNG UND ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA 36
2.2.18 TAQMAN-PCR (REAL TIME PCR) 3 7
2 . 2 . 1 9 DNA-RESTRIKTIONSVERDAU 3 8
2.2.20 SOUTHERN BLOT 39
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IMAGE 2
2.2.21 SEQUENZIERUNG VON DNA 41
2.2.22 AUSWERTUNG DER SEQUENZIERUNG 42
2.2.23 BCA-ASSAY ZUR PROTEINBESTIMMUNG 42
2.2.24 SDS-GELELEKTROPHORESE 43
2.2.25 WESTERN BLOT 45
2.2.26 KOPPLUNG VON ANTIKOERPERN MIT BIOTIN 46
2.2.27 CYTOSPINS 46
2.2.28 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSEN 47
2.2.29 UNTERSUCHUNG VON TIERPROBEN 49
3 ERGEBNISSE 51
3.1 HERSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG EINER R C M V C D 2 0 0 - R E V E
R T A N T E 5 1
3.1.1 WACHSTUMSVERHALTEN VON RCMV-WT, RCMV-ACD200 UND RCMV-REVCD200 5 4
3 . 2 PROTEIN-EXPRESSION VON V C D 2 0 0 UND C D 2 0 0 R IN VITRO 5 6
3.2.1 EXPRESSION VON VCD200 AUF REF UND MAKROPHAGEN NACH RCMV-INFEKTION
5 6
3.2.2 NACHWEIS DER EXPRESSION VON CD200R AUF MAKROPHAGEN 57
3.2.2.1 TITRATION DES CD200-REZEPTOR-ANTIKOERPERS FUER DIE
DURCHFLUSSZYTOMETRIE 57 3 . 3 NACHWEIS DER INOS-EXPRESSION IN
MAKROPHAGEN IN VITRO 5 8
3.3.1.1 STIMULIERUNG DER INOS-EXPRESSION MIT LPS IN DER
MAKROPHAGENZELLLINIE 59
3.3.1.2 EINFLUSS DER MAKROPHAGEN-STIMULATION AUF DIE EXPRESSION VON
CD200R 61 3.3.1.3 VERGLEICH DER INOS-EXPRESSION BEI REF/MAKROPHAGEN
CO-KULTUR 62
3 . 4 UNTERSUCHUNG DES PROBENMATERIALS AUS TIEREN 6 3
3 . 4 . 1 BIOTINYLIERUNG UND ANTIKOERPER-TITRATION FUER DIE
DURCHFLUSSZYTOMETRIE 6 4
3.4.1.1 TITRATION DES MAKROPHAGENANTIKOERPERS FUER DIE
DURCHFLUSSZYTOMETRIE 65
3.4.1.2 TITRATION DES INOS-ANTIKOERPERS FUER DIE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 65
3 . 5 INOS-EXPRESSION DER PERITONEALEN MAKROPHAGEN EX VIVO 6 7
3 . 6 QUANTITATIVER NACHWEIS VON V C D 2 0 0 , C D 2 0 0 , C D 2 0 0 R
UND I N O S 6 9
3.6.1 ETABLIERUNG DER STANDARDREIHEN 69
3.6.2 OPTIMIERUNG DER CDNA-SYNTHESE FUER DIE REALTIME-PCR 70
3 . 7 BESTIMMUNG DER VIRUSLASTIN DER MILZ 7 2
3 . 7 . 1 UNTERSUCHUNG DER GENTRANSKRIPTION VON VCD200, CD200, CD200R
UND INOS IN DER MILZ
UND PERITONEALEN MAKROPHAGEN 7 4
3 . 8 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG DER MILZSCHNITTE 7 8
3.8.1 EXPRESSION DES ENZYMS INOS IN DER MILZ 78
3.8.2 UNTERSCHIEDLICHE EXPRESSIONSSTAERKE DER MHC-KLASSE-IL-MOLEKUELE IN
DER MILZ 79
4 DISKUSSION 80
4.1 HERSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG EINER R C M V C D 2 0 0 - R E V E
R T A N T E 8 0
4 . 2 EXPRESSION VON V C D 2 0 0 , C D 2 0 0 R UND I N O S IN
RATTENEMBRYOFIBROBLASTEN UND
MAKROPHAGEN 8 1
4 . 3 AKTIVIERUNGSZUSTAND PERITONEALER MAKROPHAGEN NACH R C M V - I N F
E K T I O N 8 2
4 . 4 EINFLUSS DER INFEKTION AUF DIE INOS-EXPRESSION IN DEN PERITONEALEN
MAKROPHAGEN UND
DER MILZ 8 4
4 . 5 BEDEUTUNG D E R M H C - K L A S S E - I I - E X P R E S S I O N IN
DER M I L Z 8 6
4 . 6 UEBERPRUEFUNG DER EINGANGS GESTELLTEN HYPOTHESE UND AUSBLICK 8 8
5 ZUSAMMENFASSUNG..- 90
6 SUMMARY 92
III. ANHANG 94
7 VEKTORKARTEN 94
IMAGE 3
8 S T A N D A R D G E R A D E N U N D R O H D A T E N 9 8
8 . 1 STANDARDGERADE UND ROHDATEN C D 2 0 0 9 8
8 . 2 STANDARDGERADE UND ROHDATEN V C D 2 0 0 9 9
8 . 3 STANDARDGERADE UND ROHDATEN C D 2 0 0 R 1 0 0
8 . 4 ROHDATEN I N O S 1 0 1
8 . 5 ROHDATEN T A Q M A N - P C R MAKROPHAGEN 1 0 1
8 . 5 . 1 ROHDATENTAQMAN-PCR INOS 101
8 . 5 . 2 ROHDATEN TAQMAN-PCR CD200 104
8.5.3 ROHDATEN TAGMAN-PCR VCD200 107
8.5.4 ROHDATEN TAQMAN-PCR CD200R 110
8.5.5 ROHDATEN TAQMAN-PCR C-MYC 112
8 . 6 ROHDATEN T A Q M A N - P C R MILZ 1 1 5
8.6.1 ROHDATEN TAQMAN-PCR INOS 115
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| spelling | Westerholt, Tina Verfasser aut Molekulare Untersuchung des Ratten-Cytomegalovirus CD200-Homologs vorgelegt von Tina Westerholt Molecular analysis of the rat cytomegalovirus (RCMV) CD200-homologue Berlin Mensch und Buch Verl. 2012 144 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Nebentitel: Molecular analysis of the rat cytomegalovirus (RCMV) CD200-homologue Berlin, Freie Univ., Diss., 2012 rats cabt cytomegalovirus cabt homologous recombination cabt growth curves cabt real time PCR cabt macrophages cabt Virulenzfaktor (DE-588)4354782-5 gnd rswk-swf Makrophage (DE-588)4193041-1 gnd rswk-swf Tiermodell (DE-588)4140660-6 gnd rswk-swf Cytomegalie-Virus (DE-588)4238363-8 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Cytomegalie-Virus (DE-588)4238363-8 s Virulenzfaktor (DE-588)4354782-5 s Makrophage (DE-588)4193041-1 s Tiermodell (DE-588)4140660-6 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000036584-2 http://www.diss.fu-berlin.de/diss/receive/FUDISS_thesis_000000036584 kostenfrei Volltext DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=024844458&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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