Studien zur Pharmakokinetik fluorooptischer Sonden mit unterschiedlichem Molekulargewicht:
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2012
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
IV
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSSVERZEICHNIS I
INHALTSVERZEICHNIS IV
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 3
2.1 MOLEKULARE BILDGEBUNG MIT FLUOROOPTISCHEN SONDEN 3
2.1.1 MOLEKULARE BILDGEBUNG VS. KLASSISCHE BILDGEBUNG 3
2.1.2 WISSENSCHAFTLICHE GRUNDLAGEN DER
NAHINFRAROT-FLUORESZENZ-BILDGEBUNG . . . . 3
2.1.3 DIE ROLLE DER NAHINFRAROT-FLUORESZENZ-BILDGEBUNG IN DER
MOLEKULAREN BILDGEBUNG 6
2.1.4 FLUOROOPTISCHE SONDEN ZUR DARSTELLUNG MOLEKULARER PROZESSE 7
2.1.4.1 CYANINFARBSTOFFE ALS SIGNALGEBENDES MODUL FLUOROOPTISCHER SONDEN
. 8
2.1.4.2 ANTIKOERPER ALS BINDUNGSMODULE FLUOROOPTISCHER SONDEN 10
2.2 BEDEUTUNG PHARMAKOKINETISCHER BETRACHTUNGEN FUER DIE MOLEKULARE
BILDGEBUNG . . . . 11
2.3 FLUOROOPTISCHE ANTIKOERPER- UND ANTIKOERPERFRAGMENTSONDEN MIT
UNTERSCHIEDLICHEM MO
LEKULARGEWICHT 12
2.3.1 MODULATIONEN DES MOLEKULARGEWICHTS VON ANTIKOERPERN 12
2.3.2 AUSWIRKUNGEN UND PHARMAKOKINETISCHE EFFEKTE DER MODULATION DES
MOLEKULAR
GEWICHTS VON ANTIKOERPERN 12
3 ZIELE DER ARBEIT 14
4 MATERIAL UND METHODEN 15
4.1 GERAETE UND MATERIALIEN 15
4.1.1 GERAETE 15
4.1.2 MATERIALIEN 15
4.1.3 CHEMIKALIEN 17
4.1.4 IMMUNGLOBULINE 18
4.1.5 ZELLLINIEN 18
4.1.6 ZELLKULTURMEDIEN 19
4.2 DER NAHINFRAROTFARBSTOFF DY-676 19
4.2.1 ERMITTLUNG DER FLUORESZENZINTENSITAET IN ABHAENGIGKEIT VON DER
KONZENTRATION DES
DY-676-FARBSTOFFS 20
4.3 SYNTHETISIERUNG UND BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG FLOUROOPTISCHER
ANTIKOERPER- UND
ANTIKOERPERFRAGMENT-SONDEN 21
4.3.1 HERSTELLUNG UND AUFREINIGUNG VON F(AB ) 21
4.3.2 HERSTELLUNG UND AUFREINIGUNG VON F(AB ) 2 22
4.3.3 PUFFERAUSTAUSCH MIT ICON* CONCENTRATORS 23
4.3.4 PHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON PROTEINLOESUNGEN 24
4.3.5 KONZENTRIERUNG VON PROTEINPROBEN 25
4.3.6 SODIUM-DODECYLSULFATE-POLYACRYLAMIDE-GEL-ELEKTROPHORESIS
(SDS-PAGE) . . . 25
4.3.7 FLUOROCHROME KOPPLUNG VON ANTIKOERPERN UND ANTIKOERPERFRAGMENTEN 27
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
V
4.3.8 BESTIMMUNG DER FARBSTOFF-PROTEIN-VERHAELTNISSE FLUOROOPTISCHER
SONDEN . . . . 28
4.3.9 UNTERSUCHUNGEN ZUR QUANTENAUSBEUTE VON F(AB )-DY 29
4.4 DAS BILDGEBUNGSINSTRUMENT BONSAI 29
4.5 IN VITRO-YE RSUCHE 31
4.5.1 KULTIVIERUNG VON ZELLLINIEN 31
4.5.1.1 LS-174T-ZELLEN 31
4.5.1.2 A-375-ZELLEN 31
4.5.1.3 ZELLKULTIVIERUNG 31
4.5.1.4 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL 32
4.5.1.5 KRYOKONSERVIERUNG 33
4.5.1.6 AUFTAUEN VON ZELLEN 33
4.5.2 FLUOROOPTISCHE MESSUNGEN 33
4.5.3 KONFOKALE LASER-RASTER-MIKROSKOPIE 34
4.6 IN VIVO-VE RSUCHE 35
4.6.1 VERSUCHSTIERE UND HALTUNGSBEDINGUNGEN 35
4.6.1.1 NMRI- MAEUSE 36
4.6.1.2 BALB/C/SCID- MAEUSE 36
4.6.2 IMPLANTATION VON TUMOREN 36
4.6.3 UNTERSUCHUNG DER BIODISTRIBUTION FLUOROCHROM-MARKIERTER
F(AB )-FRAGMENTE AN
XENOTRANSPLANTIERTEN MAEUSEN 37
4.6.4 UNTERSUCHUNG DER BIODISTRIBUTION VON ANTIKOERPER- UND
ANTIKOERPERFRAGMENT-SON
DEN AN GESUNDEN MAEUSEN 37
4.6.4.1 BLUTKINETISCHE UNTERSUCHUNGEN 37
4.6.4.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR ORGANDISTRIBUTION 38
4.7 EX WVO-VERSUCHE 39
4.7.1 AUFBEREITUNG VON BLUTPROBEN 39
4.7.2 ORGAN- UND GEWEBEPRAEPARATION 39
4.7.3 FLUOROOPTISCHE MESSUNGEN 39
4.8 DARSTELLUNG DES DATENMATERIALS, MATHEMATISCHE BERECHNUNGEN UND
STATISTISCHE ANALYSE 40
5 ERGEBNISSE 42
5.1 ABHAENGIGKEIT DER FLUORESZENZINTENSITAET VON DER DY-676-KONZENTRATION
42
5.2 FLUOROOPTISCHE ANTIKOERPER- UND ANTIKOERPERFRAGMENT-SONDEN 43
5.2.1 ANTIKOERPERSPALTUNG UND CHARAKTERISTIKA DER ANTIKOERPERFRAGMENTE 43
5.2.2 FLUOROCHROMGEKOPPELTE ANTIKOERPER UND ANTIKOERPERFRAGMENTE 45
5.2.3 QUANTENAUSBEUTE DES F(AB )-DY 47
5.3 WECHSELWIRKUNGEN DER F(AB )-DY-SONDE MIT AUSGEWAEHLTEN TUMORZELLEN 47
5.3.1 FLUOROOPTISCHE ANALYSE 47
5.3.2 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE ANALYSE 49
5.4 KINETIK FLUOROCHROM-MARKIERTER, UNSPEZIFISCHER F(AB )-FRAGMENTE IN
AUSGEWAEHLTEN TU
MOREN 50
5.5 BIODISTRIBUTION FLUOROCHROMMARKIERTER, UNSPEZIFISCHER
F(AB )-FRAGMENTE IN XENOTRANS
PLANTIERTEN BALB/C/SCID-MAEUSEN 53
5.6 PHARMAKOKINETIK FLUOROOPTISCHER ANTIKOERPER- UND
ANTIKOERPERFRAGMENT-SONDEN 54
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS VI
5.6.1 BLUTKINETIK 54
5.6.2 ORGANDISTRIBUTION 59
5.6.2.1 AUTOFLUORESZENZEN DER ORGANE 60
5.6.2.2 IGG-DY 61
5.6.2.3 F(AB ) 2 -DY 64
5.6.2.4 F(AB )-DY 68
5.6.2.5 VERGLEICH DER FLUOROOPTISCHEN SONDEN UNTEREINANDER 72
6 DISKUSSION 84
6.1 DIE NEUEN KLEINMOLEKULAREN FLUOROOPTISCHEN SONDEN 84
6.2 IN VITRO-, IN VIVO- UND EX WVO-VERSUCHE ZUM CARCINOEMBRYONALEN
ANTIGEN 87
6.3 PHARMAKOKINETISCHE EX WVO-UNTERSUCHUNGEN 90
6.3.1 BLUTUNTERSUCHUNGEN 90
6.3.2 ORGANUNTERSUCHUNGEN 92
7 SCHLUSSFOLGERUNG UND AUSBLICK 96
LITERATURVERZEICHNIS VII
ANHANG XV
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