Charakterisierung potentieller neuer Interaktionspartner für die II-III-Schleife der Cav2.3-Untereinheit spannungsgesteuerter Kalziumkanäle:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
2011
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
7
1.
1.1
EINLEITUNG
EINLEITUNG
_________________________________________________
_____________
9
1.2
STRUKTUR
SPANNUNGSGESTEUERTER
KALZIUMKANAELE
____________________
____________
10
1.2.1
DIE
AL-UNTEREINHEITEN
________________________________
____________
11
1.2.1.1
SPLEISSVARIANTEN
DER
CAV2.
3
-UNTEREINHEIT
_________________________
____________
12
1.2.2
DIE
SS-UNTEREINHEIT
___________________________________
____________
13
1.2.3
DIE
A28-UNTEREINHEIT
_________________________________
____________
14
1.2.4
DIE
Y-UNTEREINHEIT
___________________________________
____________
15
1.3
BIOPHYSIKALISCHE
UND
PHARMAKOLOGISCHE
EINTEILUNG
SPANNUNGSGESTEUERTER
KALZIUMKANAELE
16
1.4
1.4.1
PHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
DES
R-TYP
KALZIUMKANALS
FUNKTION
IM
HERZ
_____________________________
____________
17
1.4.2
FUNKTION
IM
NEUROENDOKRINEN
SYSTEM
____________________
____________
17
1.4.3
FUNKTION
IM
NERVENSYSTEM
____________________________
____________
19
1.4.4
FUNKTION
IN
DER
RETINA
________________________________
____________
20
1.4.5
FUNKTION
IM
FORTPFLANZUNGSSYSTEM
______________________
____________
20
1.5
1.5.1
INTERAKTIONSPARTNER
DES
R-TYP
KALZIUMKANALS
INTERAKTION
MIT
SYNTAXIN
BZW.
SYNAPTOTAGMIN
______________
____________
21
1.5.2
INTERAKTION
DES
C-TERMINUS
MIT
CALMODULIN
_______________
____________
22
1.5.3
INTERAKTION
DES
I-II
LOOPS
MIT
DER
SS-UNTEREINHEIT
____________
____________
23
1.6
FRAGESTELLUNG
______________________________________________
____________
25
2.
2.1
MATERIAL
UND
METHODEN
CHEMIKALIEN
_________________________________________________________
___
26
2.2
GERAETE
_________________________________________________________
__
___
28
2.3
ZENTRIFUGEN
___
29
2.4
STAMMLOESUNGEN,
PUFFER,
SONSTIGES
_______________________________________
___
29
2.5
MEDIEN
33
2.6
ZELLLINIEN,
BAKTERIEN
UND
HEFESTAEMME
___________________________________
___
34
2.7
VERWENDETE
KITS
___
36
2.8
VEKTOREN
_
_________________________________________________________
___
38
2.9
PRIMER
___
41
2.10
METHODEN
2.10.1
SEQUENZIERUNG
VON
DNS
___
45
2.10.2
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
PCR
________________________________________
___
45
2.10.3
PLASMIDISOLATION
AUS
HEFEZELLEN
MIT
DEM
YEASTMAKER
YEAST
PLASMID
ISOLATION
KIT
_
___
47
2.10.4
AUFFEINIGUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
MITTELS
QIAQUICK
PCR-PURIFICATION
KIT
_______
___
48
2.10.5
EXTRAKTION
VON
DNS-BANDEN
AUS
AGAROSEGELEN
MITTELS
QIAQUICK
GEL
EXTRAKTION
KIT
___
49
2.10.6
MINI-PLASMID
PRAEPARATION
AUS
BAKTERIENZELLEN
_____________________________
___
49
2.10.7
MAXI-PLASMID
PRAEPARATION
AUS
BAKTERIENZELLEN
MITTELS
QUIAGEN
PLASMID
MAXI
KIT
_
___
50
2.10.8
PHOTOMETRISCHE
QUANTIFIZIERUNG
VON
NUCLEINSAEUREN
_________________________
___
51
2.10.9
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
DNS
______________________
___
51
2.10.10
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNS
____________________________________________
___
52
2.10.11
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
PROTEINEN
IN
ACRYLAMIDGELEN
_______________________
___
52
2.10.12
DISKONTINUIERLICHE
SDS-GELELEKTROPHORESE
________________________________
___
52
2.10.13
DISKONTINUIERLICHE
SDS-GRADIENTENGELELEKTROPHORESE
_______________________
___
53
2.10.14
SUBKLONIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
_______________________________________
___
55
2.10.15
MODIFIZIERTES
COLONY-LIFT
FILTER
ASSAY
_____________________________________
___
55
2.10.16
IMMUNOPRAEZIPITATION
MIT
FLAG-TAGGED
IMMUNOPRECIPITATION
KIT
_____________
___
56
2.10.17
MODIFIZIERTES,
KOSTENGUENSTIGES
VERFAHREN
ZUR
PLASMIDISOLATION
AUS
HEFEZELLEN
____
___
57
2.10.18
REVERSE
TRANSCRIPTION
__________
______________________________________
___
58
2.10.19
NACHWEIS
VON
MYC
BZW.
FLAG-TAG-PROTEINEN
MITTELS
WESTERN-BLOT
____________
___
58
2.10.20
PROBENVORBEREITUNG
FUER
PEPTID
MASS
FINGERPRINTING
_________________________
___
59
2.10.21
PRINZIP
DES
YEAST-TWO-HYBRID
SYSTEMS
___________________________________
___
60
2.10.22
LITHIUM
ACETAT
HEFETRANSFORMATION
______________________________________
___
61
7
2.10.23
2.10.24
2.10.25
DURCHMUSTERN
EINER
CDNS-BIBLIOTHEK
MITTELS
YEAST
MATING
61
BERECHNEN
DER
MATING
EFFICIENCY
62
TESTEN
DES
PHAENOTYPS
DES
UNTRANSFIZIERTEN
BZW.
TRANSFIZIERTEN
AH
109
STAMMES
63
3.
3.1
ERGEBNISSE
KLONIERUNG
DES
II-III
LOOPS
VON
CA
V
2.3
IN
DEN
PAS2.1
VEKTOR
__________________
__
64
3.2
TESTUNG
DER
REPORTERGENAKTIVIERUNG
DES
II-III
LOOP
KONSTRUKTS
________________
__
72
3.3
DURCHMUSTERUNG
EINER
MENSCHLICHEN
NEURONALEN
BIBLIOTHEK
MIT
DEM
II-III-LOOP-KONSTRUKT
___________________________________________
__
73
3.4
SEQUENZIERUNG
DER
POSITIVEN
YEAST-TWO-HYBRID
KLONE
________________________
__
74
3.5
KLONIERUNG
DER
II-III
LOOP
VARIANTEN
IN
PIRES-HR-GFP-LA
_____________________
__
77
3.6
IMMUNOPRAEZIPITATION
DER
II-III
LOOP
KONSTRUKTE
_____________________________
__
78
3.7
MALDI/TOF
ANALYSE
DER
KOPRAEZIPITIERTEN
PROTEINE
___________________________
__
79
3.8
KLONIERUNG
POTENTIELLER
INTERAKTIONSPARTNER
IN
DEN
PCDNA3.1/MYC-HIS
VEKTOR
80
3.9
IMMUNOPRAEZIPITATION
DER
POTENTIELLEN
INTERAKTIONSPARTNER
MIT
DEM
II-III
LOOP
VON
CAV2.3
_________________________________________________
__
81
3.10
EINFLUSS
VON
DEOXY
SPERGUALIN
AUF
CAV2.3
STROEME
____________________________
__
83
3.11
EFFEKT
VON
DESOXYSPERGUALIN
AUF
DAS
ELEKTRORETINOGRAMM
_____________________
__
85
3.12
EFFEKT
AUF
DIE
AUTOPHOSPHORYLIERUNG
VON
PKCA
____________________________
__
87
4.
4.1
4.2
DISKUSSION
BEWERTUNG
DER
YEAST-TWO-HYBRID
ERGEBNISSE
__________________________________
89
BEWERTUNG
VON
HSP70
ALS
INTERAKTIONSPARTNER
DES
II-III
LOOPS
_____________________
98
5.
ZUSAMMENFASSUNG
102
6.
LITERATURVERZEICHNIS
103
7.
LEBENSLAUF
117
8
|
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