Biochemische Charakterisierung mineralisierungsrelevanter Annexine:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2011
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|---|---|
| adam_text | Titel: Biochemische Charakterisierung mineralisierungsrelevanter Annexine
Autor: Rosenbaum, Sabrina
Jahr: 2011
Inhaltsverzeichnis
Kurzzusammenfassung.........................................................................................................3
Abstract.................................................................................................................................5
Verwendete Abkürzungen.....................................................................................................7
1 Einleitung......................................................................................................................10
1.1 Die Entwicklung des Skelettsystems......................................................................10
1.1.1 Matrixvesikel und ihre Funktion während der Biomineralisierung.....................12
1.1.2 Model der Biomineralisierung..........................................................................14
1.2 Kollagene und ihre Funktion während der Biomineralisierung................................15
1.3 Annexine und ihre Funktion während der Biomineralisierung.................................17
1.3.1 Annexine.........................................................................................................17
1.3.2 Annexine als atypische Kalziumkanäle und Interaktionspartner der Kollagene20
1.3.3 Annexine als Regulatoren von Kalziumkanälen...............................................23
1.3.4 Annexine in der Wachstumsfuge.....................................................................23
1.3.5 Annexine und humane Krankheiten.................................................................24
1.4 Pathologische Biomineralisierung...........................................................................25
1.5 Zielsetzung.............................................................................................................27
2 Material und Methoden..................................................................................................28
2.1 Material..................................................................................................................28
2.1.1 Oligonukleotide...............................................................................................28
2.1.2 Vektoren..........................................................................................................28
2.1.3 Antikörper........................................................................................................29
2.1.4 Biologische Materialien...................................................................................30
2.2 Methoden...............................................................................................................30
2.2.1 Molekularbiologische Methoden......................................................................31
2.2.2 Proteinbiochemische Methoden......................................................................36
2.2.3 Spektroskopie.................................................................................................44
2.2.4 Histologie........................................................................................................45
2.2.5 Zellkultur.........................................................................................................46
2.2.6 Untersuchung der Kalziumkanalfunktion von Annexinen.................................48
3 Ergebnisse....................................................................................................................50
3.1 Expression der Annexine in der murinen Wachstumsfuge......................................50
3.1.1 Expression der Annexine auf RNA Ebene.......................................................50
3.1.2 Expression der Annexine auf Protein Ebene...................................................53
3.2 Klonierung, Expression und Aufreinigung von Proteinen........................................57
3.2.1 Klonierung, Expression und Aufreinigung von Annexinen...............................57
3.2.2 Expression und Aufreinigung von Kollagen X..................................................62
3.3 Strukturanalyse der Annexine mittels Spektroskopie..............................................64
3.3.1 Zirkularer Dichroismus....................................................................................64
3.3.2 Fluoreszenzspektroskopie...............................................................................67
3.4 Interaktionen der Annexine mit Kollagenen............................................................72
3.5 Interaktionen der Annexine mit Liposomen.............................................................77
3.5.1 Interaktion der Annexine mit Phosphatidylserin...............................................77
3.5.2 Interaktion der Annexine mit Matrixvesikel-ähnlichen Liposomen....................82
3.6 Untersuchungen zur Kalziumkanalfunktion der Annexine.......................................84
3.6.1 Kalziumeinstrom in Liposomen........................................................................84
3.6.2 Kalziumeinstrom in Zellen...............................................................................85
3.7 Wechselwirkung von Annexinen mit Phosphatidylserin sterbender Zellen..............87
3.8 Einfluss von AnxA3 und AnxA5 auf die Phagozytose sterbender Zellen.................90
4 Diskussion.....................................................................................................................93
4.1 Expression der Annexine in der murinen Wachstumsfuge......................................93
4.2 Interaktionen der Annexine mit Kollagenen............................................................97
4.2.1 Expression und Aufreinigung von Annexinen..................................................97
4.3 Interaktionen der Annexine mit Liposomen...........................................................100
4.4 Wechselwirkungen von Annexinen mit dem auf der Oberfäche sterbender Zellen
exponiertem Phosphatidylserin.......................................................................................106
4.4.1 Einfluss von AnxA3 und AnxA5 auf die Phagozytose sterbender Zellen........107
4.5 Untersuchungen zur Kalziumkanalfunktion der Annexine.....................................109
4.6 Ausblick................................................................................................................112
5 Literaturverzeichnis.....................................................................................................114
6 Anhang........................................................................................................................125
6.1 Oligonukleotide....................................................................................................125
Danksagung.......................................................................................................................129
Teilpublikationen................................................................................................................130
Erklärung............................................................................................................................131
Lebenslauf..........................................................................................................................132
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