Eignung unterschiedlicher Primer und DNA-Extraktionsmethoden zum PCR-Nachweis von Vertretern des Mycobacterium-avium-intracellulare-Komplexes (MAIC):
Gespeichert in:
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Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch und Buch Verl.
2010 [erschienen] 2011
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Beschreibung: | Nebentitel: Testing different primers and DNA extraction methods to detect members of Mycobacterium avium-intracellulare complex (MAIC) by using PCR |
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- I-
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG - 1 -
2 LITERATUR - 2 -
2.1 DIE FAMILIE DER MYCOBACTERIACEAE - 2 -
2.1.1 TAXONOMIE UND NOMENKLATUR - 2 -
2.1.2 DIE GATTUNG MYCOBATERIUM - 2 -
2.1.3 DER MYCOBACTERIUM AVIUM-INTRACELLULARE-KOMP EX (MAIC) - 7 - 2.1.4
VORKOMMEN, EPIDEMIOLOGIE UND BEDEUTUNG DER MYKOBAKTERIEN BEI TIER UND
MENSCH - 8 -
2.1.4.1 VORKOMMEN UND EPIDEMIOLOGIE (INSBESONDERE BEIM SCHWEIN) - 8 -
2.1.4.2 MYKOBAKTERIEN BEIM SCHWEIN -12 -
2.1.4.3 MYKOBAKTERIEN BEIM RIND -15 -
2.1.4.4 MYKOBAKTERIEN BEIM GEFLUEGEL -16 -
2.1.4.5 MYKOBAKTERIEN BEI ANDEREN TIERARTEN -17 -
2.1.4.6 MYKOBAKTERIEN BEIM MENSCHEN - 1 8-
2.1.5 PATHOLOGIE UND KLINIK (SCHWEIN) - 22 -
2.1.5.1 PATHOGENESE - 2 2-
2.1.5.2 PATHOMORPHOLOGIE - 23 -
2.1.5.3 HISTOPATHOLOGIE - 24 -
2.1.5.4 KLINISCHE SYMPTOMATIK - 25 -
2.1.6 FLEISCHHYGIENERECHTLICHE BESTIMMUNGEN - 27 -
2.1.6.1 RECHTSGRUNDLAGE - 27 -
2.1.6.2 FLEISCHUNTERSUCHUNGSSTATISTIK - 29 -
2.2 DIE POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) - 31 -
2.2.1 GRUNDLAGEN DER PCR - 31 -
2.2.2 NACHWEIS DES AMPLIFIZIERTEN PRODUKTES - 3 2-
2.2.3 FAKTOREN, DIE DIE PCR BEEINFLUSSEN - 32 -
2.2.3.1 TEMPERATUR UND ZEIT - 3 2-
2.2.3.2 REAKTIONSKOMPONENTEN - 3 3-
2.2.3.3 PRIMER - 3 4-
2.2.3.4 TARGET-DNA - 34 -
2.2.3.5 KONTAMINATIONEN - 35 -
2.2.3.6 INHIBITOREN - 36 -
2.3 DIAGNOSTIK VON MYKOBAKTERIEN - 39 -
2.3.1 KONVENTIONELLE DIAGNOSTIK VON MYKOBAKTERIEN - 40 *
2.3.1.1 PROBENENTNAHME -40 -
2.3.1.2 MIKROSKOPIE - 4 0-
2.3.1.3 KULTURELLE ANZUECHTUNG -41 -
2.3.1.4 DIFFERENZIERUNG VON MYKOBAKTERIEN -44 -
2.3.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE DIAGNOSTIK VON MYKOBAKTERIEN - 46 * 2.3.2.1
GENETISCHE GRUNDLAGEN DES MAIC -46 -
2.3.2.2 MOLEKULARBIOLOGISCH BEDEUTSAME ZIELSEQUENZEN - 47 * 2.3.2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE NACHWEISMETHODEN - 57 *
2.4 FRAGESTELLUNGEN DIESER ARBEIT - 65 *
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/1014352665
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
- I I-
3 MATERIAL UND METHODEN - 66 *
3.1 ARBEITSMATERIALIEN - 66 *
3.1.1 VERWENDETE MIKROORGANISMEN - 66 *
3.1.2 NAEHRMEDIEN ZUR STAMMHALTUNG UND KULTIVIERUNG - 66 *
3.1.3 REAGENZIEN ZUR ISOLIERUNG DER DNA UND FUER DIE PCR - 6 7-
3.1.4 ARBEITSGERAETE UND LABORMATERIAL - 69 *
3.2 UNTERSUCHUNGSABLAUF - 70 -
3.2.1 UNTERSUCHUNGSSCHEMA - 70 *
3.2.1.1 VORVERSUCH: UEBERPRUEFUNG DER IN DER LITERATUR BESCHRIEBENEN
PCR-PROTOKOLLE - 70 *
3.2.1.2 HAUPTVERSUCH (TEIL A): VORGEHEN ZUR ERMITTLUNG DER
NACHWEISGRENZEN BEI VERWENDUNG VON REINKULTUREN - 71 * 3.2.1.3
HAUPTVERSUCH (TEIL B): VORGEHEN ZUR ERMITTLUNG DER NACHWEISGRENZEN BEI
VORHANDENSEIN VON LYMPHKNOTENMATRIX.. - 72 - 3.2.2 METHODEN DER
DNA-FREISETZUNG - 75 *
3.2.2.1 KOCHEN - 75 -
3.2.2.2 CHLOROFORM/ PHENOL-EXTRAKTION - 76 -
3.2.2.3 ULTRASCHALLBEHANDLUNG MIT ANSCHLIESSENDEM KOCHEN - 78 - 3.2.2.4
HIGH PURE PCR TEMPLATE KIT - 78 -
3.2.3 DIE POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) - 80 -
3.2.3.1 DURCHFUEHRUNG DER PCR (ALLGEMEIN) - 80 -
3.2.3.2 PRIMERABHAENGIGE PCR-BEDINGUNGEN - 81 -
3.2.3.3 GELELEKTROPHORESE - 8 4-
4 ERGEBNISSE - 86 -
4.1 KEIMZAHLBESTIMMUNG DER VERWENDETEN MYKOBAKTERIEN- BOUILLONKULTUREN -
86 *
4.2 VORVERSUCH: MOEGLICHE PRIMER-/ STAMMKOMBINATIONEN - 89 - 4.3
HAUPTVERSUCH (TEIL A): ERGEBNISSE BEI DER VERWENDUNG VON REINKULTUREN -
90 -
4.4. HAUPTVERSUCH (TEIL B): ERGEBNISSE BEI VORHANDENSEIN
VON LYMPHKNOTENMATRIX - 98 -
4.5 BERECHNUNG DER NACHWEISGRENZEN -105 -
5 DISKUSSION - 1 1 4-
5.1 FRAGESTELLUNG/ VERSUCHSZIEL -114 -
5.2 VERSUCHSAUFBAU - 1 1 5-
5.3 EINGESETZTE STAEMME -116 -
5.4 EINGESETZTE ZEILAUFSCHLUSSVERFAHREN -118 -
5.5 BEWERTUNG DER PRIMER -121 -
5.6 BEWERTUNG DER ERZIELTEN NACHWEISRATEN -124 -
5.7 FOLGERUNGEN/ KONSEQUENZEN -125 -
6 ZUSAMMENFASSUNG - 126 -
7 SUMMARY - 128 -
8 LITERATURVERZEICHNIS - 130 -
9 ANHANG - 160 -
10 DANKSAGUNG - 163 -
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