Systematische Analyse der Domänenfunktionen des bakteriellen Oberflächenproteins Bartonella Adhäsin A von Bartonella henselae:
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2010 [erschienen] 2011
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1
EINLEITUNG
1
1.1
DIE
GATTUNG
BARTONELLA
1
1.1.1
DURCH
BARTONELLA
SPP.
VERURSACHTE
ERKRANKUNGEN
1
1.1.1.1
B.
BACILLIFORMIS-INFEKTIONEN
2
1.1.1.2
B.
QUINTANA-INFEKTIONEN
2
1.1.1.3
B.
HENSELAE-INFEKTIONEN
3
1.1.1.3.1
KATZENKRATZKRANKHEIT
3
1.1.1.3.2
VASKULOPROLIFERATIVE
KRANKHEITSBILDER
4
1.1.2
DIE
PATHOGENESE
VON
BARTONELLA-INFEKTIONEN
5
1.1.2.1
PATHOGENITAETSFAKTOREN
DER
BARTONELLA
SPP.
6
1.1.2.2
TYP
4
SEKRETIONS
SYSTEME
(T4SS)
8
1.1.2.3
TRIMERE
AUTOTRANSPORTER-ADHAESINE
(TAAS)
9
1.1.2.4
BARTONELLA
ADHAESIN
A
(BADA)
12
1.1.2.5
BADA-HOMOLOGE
TAAS
14
1.2
ANGIOGENESE
15
1.2.1
MECHANISMEN
UND
REGULATION
DER
ANGIOGENESE
16
1.2.1.1
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
HYPOXIA
INDUCIBLE
FACTOR
(HIF)-L
17
1.2.1.2
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
NUKLEAERER
FAKTOR-KB
(NF-KB)
18
1.3
BAKTERIELL
INDUZIERTE
ANGIOGENESE
19
1.4
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
21
2
MATERIAL
UND
METHODEN
23
2.1
MATERIAL
23
2.1.1
GERAETE
23
2.1.2
PLASTIK/VERBRAUCHS-MATERIALIEN
24
2.1.3
CHEMIKALIEN
25
2.1.4
KITS
27
2.1.5
ANTIBIOTIKA
27
2.1.6
GROESSENSTANDARDS
27
2.1.7
ENZYME
27
2.1.8
ANTIKOERPER
28
2.1.9
OLIGONUKLEOTIDE
29
2.1.10
PLASMIDE
30
2.1.11
BAKTERIENSTAEMME
UND
MEDIEN
32
2.1.12
ZELLEN
UND
ZELLKULTURMEDIEN
34
2.1.13
PUFFER
UND
LOESUNGEN
35
2.2
METHODEN
38
2.2.1
BAKTERIEN
38
2.2.1.1
BAKTERIENANZUCHT
UND
KULTIVIERUNG
FUER
IN
VITRO-EXPERIMENTE
38
2.2.1.2
HERSTELLUNG
VON
BAKTERIENSTOCKS
38
2.2.1.3
BESTIMMUNG
DER
BAKTERIENZAHL
MITTELS
OPTISCHER
DICHTE
39
2.2.2
ZELLKULTUR
39
2.2.2.1
KULTIVIERUNG
39
2.2.2.2
BESTIMMUNG
DER
LEBENDZELLZAHL
40
2.2.2.3
INFEKTIONSEXPERIMENTE
40
2.2.2.4
ADHAERENZ
VON
B.
HENSELAE
40
2.2.3
MOLEKULARGENETISCHE
METHODEN
41
2.2.3.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
41
2.2.3.2
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
41
2.2.3.3
FUSIONS-PCR
/
OVERLAP
EXTENSION
PCR
43
2.2.3.4
GELELEKTROPHORESE
VON
DNA-FRAGMENTEN
46
2.2.3.5
AUFREINIGUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
46
2.2.3.6
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
46
2.2.3.7
DEPHOSPHORYLIERUNG
47
2.2.3.8
LIGATION
47
2.2.3.9
SEQUENZIERUNG
47
2.2.3.10
DNA
SYNTHESE
48
2.2.4
KLONIERUNG
48
2.2.4.1
ELEKTROPORATION
VON
BAKTERIEN
48
2.2.4.1.1
ELEKTROPORATION
VON
E.
COLI
48
2.2.4.1.2
ELEKTROPORATION
VON
B.
HENSELAE
49
2.2.4.2
TOPO-KLONIERUNG
VON
BLUNT-END
PCR-PRODUKTEN
49
2.2.4.3
BLAU
-
WEISS
SELEKTION
49
2.2.5
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
50
2.2.5.1
PRAEPARATION
VON
PROTEINEXTRAKTEN
FUER
WESTERN
BLOT
MIT
LAEMMLI
50
PUFFER
2.2.5.2
PRAEPARATION
VON
PROTEINEXTRAKTEN
ZUR
BESTIMMUNG
VON
HIF-LA
50
2.2.53
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
51
2.2.5.4
WESTERN
BLOT
52
2.2.6
MIKROSKOPIE
53
2.2.6.1
IMMUNFLUORESZENZ-TEST
(IFT)
53
2.2.6.2
IFT
ZUM
NACHWEIS
DER
BADA-EXPRESSION
53
2.2.63
IFT
ZUM
NACHWEIS
DER
ZELLADHAERENZ
VON
B.
HENSELAE
54
2.2.6.4
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
54
2.2.6.5
IMMUNOGOLD-LABELLING
54
2.2.7
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
B.
HENSELAE-MUTANTEN
55
2.2.7.1
AUTOAGGLUTINATION
VON
B.HENSELAE
55
2.2.7.2
BINDUNG
VON
B.
HENSELAE
AN
KOLLAGEN
G
55
2.2.73
BINDUNG
VON
B.
HENSELAE
AN
KOLLAGEN
G
UNTER
DYNAMISCHEN
56
BEDINGUNGEN
2.2.7.4
VEGF-ELISA
56
2.2.7.5
IL-8-ELISA
57
2.2.8
STATISTIK
57
3
ERGEBNISSE
58
3.1
HERSTELLUNG
UND
FUNKTIONELLE
ANALYSE
VON
BARTONELLA
HENSELAE
BAD//PHN23
58
3.1.1
HERSTELLUNG
DES
HN23-FUSIONS-FRAGMENTS
58
3.1.2
KLONIERUNG
DES
HN23-FUSIONS-FRAGMENTS
IN
B.
HENSELAE
BADA
59
3.1.3
NACHWEIS
DER
PROTEIN-EXPRESSION
VON
HN23
IN
B.
HENSELAE
BADA/PHN23
62
3.1.4
NACHWEIS
DER
OBERFLAECHENEXPRESSION
VON
HN23
IN
B.
HENSELAE
63
BAD//PHN23
3.1.5
NACHWEIS
DER
HN23-ABHAENGIGEN
AUTOAGGLUTINATION
VON
B.
HENSELAE
BAD//PHN23
65
3.1.6
UNTERSUCHUNG
DER
BADA
UND
HN23-ABHAENGIGEN
BINDUNG
AN
PROTEINE
DER
ECM
65
3.1.7
NACHWEIS
DER
BADA
UND
HN23-ABHAENGIGEN
ADHAERENZ
AN
ENDOTHELZELLEN
67
3.1.8
NACHWEIS
DER
BADA
UND
HN23-BEDINGTEN
AKTIVIERUNG
VON
HIF-LA
IN
EPITHELZELLEN
68
3.1.9
NACHWEIS
DER
BADA
UND
HN23-BEDINGTEN
SEKRETION
PROANGIOGENETISCHER
ZYTOKINE
69
3.2
HERSTELLUNG
UND
FUNKTIONELLE
ANALYSE
VERSCHIEDENER
BARTONELLA
HENSELAE
71
BADA-STIELMUTANTEN
3.2.1
HERSTELLUNG
DER
BADA-STIELMUTANTEN-FUSIONS-FRAGMENTE
73
3.2.2
KLONIERUNG
DER
BADA-STIELMUTANTEN-FUSIONS-FRAGMENTE
IN
B.
HENSELAE
BADA
73
3.2.3
NACHWEIS
DER
PROTEIN-EXPRESSION
DER
BADA-STIELMUTANTEN
IN
B.
HENSELAE
BADA
74
3.2.4
NACHWEIS
DER
OBERFLAECHENEXPRESSION
DER
BADA-STIELMUTANTEN
IN
B.
HENSELAE
BADA
77
3.2.5
UNTERSUCHUNG
DER
ADHAERENZ
DER
BADA-STIELMUTANTEN
AN
PROTEINE
DER
ECM
77
3.2.6
UNTERSUCHUNG
DER
ADHAERENZ
DER
BADA-STIELMUTANTEN
AN
ENDOTHELZELLEN
78
3.2.7
UNTERSUCHUNG
DER
BADA-STIELMUTANTEN
BEDINGTE
SEKRETION
PROANGIOGENETISCH
WIRKSAMER
ZYTOKINE
80
3.2.8
UNTERSUCHUNG
DER
BADA-LAENGEN-ABHAENGIGEN
BINDUNG
AN
KOLLAGEN
UNTER
FLUSSBEDINGUNGEN
82
.3
]
HERSTELLUNG
UND
FUNKTIONELLE
ANALYSE
VERSCHIEDENER
BARTONELLA
HENSELAE
BADA-KOPFMUTANTEN
84
3.3.1
HERSTELLUNG
DER
BADA-KOPFMUTANTEN-FUSIONS-FRAGMENTE
84
3.3.2
KLONIERUNG
DER
BADA-KOPFINUTANTEN-FUSIONS-FRAGMENTE
IN
B.
HENSELAE
BADA
87
3.3.3
NACHWEIS
DER
PROTEIN-EXPRESSION
DER
BADA-KOPFMUTANTEN
IN
B.
HENSELAE
BADA
87
3.3.4
NACHWEIS
DER
OBERFLAECHENEXPRESSION
DER
BADA-KOPFMUTANTEN
IN
B.
HENSELAE
BADA
91
3.3.5
UNTERSUCHUNG
DER
ADHAERENZ
DER
BADA-KOPFMUTANTEN
AN
PROTEINE
DER
ECM
91
3.3.6
UNTERSUCHUNG
DER
ADHAERENZ
DER
BADA-KOPFMUTANTEN
ENDOTHELZELLEN
92
3.3.7
INDUKTION
DER
VEGF-SEKRETION
DURCH
DIE
BADA-KOPFMUTANTEN
94
4
DISKUSSION
4.1
DIE
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
BADA-DOMAENEN
96
4.1.1
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DES
TRUNKIERTEN
BADA
HN23
VON
B.
HENSELAE
96
4.1.2
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
BADA-STIELMUTANTEN
98
4.1.3
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
TRUNKIERTEN
BADA-KOPFMUTANTEN
101
4.2
FREMDE
ODER
FREUNDE:
BADA
UND
DAS
VIRB/VIRD4-T4SS
VON
B.
HENSELAE
107
4.3
BADA
UND
DAS
KOMPLEMENTSYSTEM
112
4.4
TAAS:
AUTOTRANSPORT
MIT
HILFE?
114
5
ZUSAMMENFASSUNG
116
6
LITERATURVERZEICHNIS
118
7
ABKUERZUNGEN
141
8
ANHANG
145
9
DANKSAGUNG
151
10
LEBENSLAUF
153
11
PUBLIKATIONSLISTE
154
|
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