Identifizierung und funktionelle Charakterisierung von Liprin-alpha4 als neues Zielgen des "hypoxia-inducible factors" HIF:
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2010
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1.
ZUSAMMENFASSUNG
.......................................................................................................................
1
2.
SUMMARY
.......................................................................................................................................
2
3.
EINLEITUNG
.......................................................................................................................................
3
3.1.
DAS
NIERENZELLKARZINOM
........................................................................................................
3
3.2.
DAS
VHL
PROTEIN
....................................................................................................................
4
3.3.
HIF
UNABHAENGIGE
FUNKTIONEN
VON
VHL
................................................................................
5
3.4.
FUNKTIONEN
VON
VHL
IN
DER
HIF-REGULATION
........................................................................
7
3.5.
DER
HIF-SIGNALWEG
................................................................................................................
7
3.6.
HIF
IN
DER
TUMORGENESE
.....................................................................................................
11
3.7.
FAMILIE
DER
LIPRINPROTEINE
...................................................................................................
13
4.
ERGEBNISSE
..................................................................................................................................
22
4.1.
REGULATION
VON
LIPRIN-A4
DURCH
DEN
VHL/HIF-SIGNALWEG
...............................................
22
4.1.1.
ANALYSE
DER
LIPRIN-A4
EXPRESSION
AUF
RNA-EBENE
..................................................
22
4.1.2.
WESTERN-BLOT-ANALYSE
DER
LIPRIN-A4
EXPRESSION
.......................................................
26
4.2.
ZEITLICHE
REGULATION
DES
LIPRIN-A4
PROTEINS
......................................................................
30
4.3.
REGULATION
VON
LIPRIN-A4
DURCH
DEN
VHL/HIF-SIGNALWEG
IN
DER
MAUS
..........................
31
4.4.
UNTERSUCHUNG
DES
LIPRIN-A4
PROMOTORS
............................................................................
32
4.5.
ZELLULAERE
EFFEKTE
DES
LIPRIN-A4
KNOCKDOWNS
....................................................................35
4.6.
INTERAKTION
VON
LIPRIN-A4
MIT
E-CADHERIN,
SS-CATENIN
UND
LAR
......................................
37
4.7.
SPLEISSVARIANTEN
VON
LIPRIN-A4
............................................................................................
38
5.
DISKUSSION
...................................................................................................................................
41
5.1.
REGULATION
VON
LIPRIN-A4
DURCH
DEN
VHL/HIF-SIGNALWEG
...............................................
41
5.2.
ANTIKOERPER
GEGEN
LIPRIN-A4
.................................................................................................
43
5.3.
SPLEISSVARIANTEN
DES
LIPRIN-A4
PROTEINS
.............................................................................
45
5.4.
EFFEKTE
DES
LIPRIN-A4
KNOCKDOWNS
....................................................................................
46
6.
MATERIAL
UND
METHODEN
..............................................................................................................
48
6.1.
MATERIAL
.................................................................................................................................
48
6.1.1.
ORGANISMEN
...................................................................................................................
48
6.1.2.
VEKTOREN
........................................................................................................................
49
6.1.3.
OLIGONUKLEOTIDE
............................................................................................................
50
6.1.4.
SIRNA
............................................................................................................................
52
6.1.5.
MEDIEN
..........................................................................................................................52
6.1.6.
LOESUNGEN
......................................................................................................................
53
6.1.7.
REAGENZIEN
UND
ENZYME
............................................................................................
56
6.1.8.
VERBRAUCHSMATERIAL
......................................................................................................
57
6.1.9.
PRIMAERE
UND
SEKUNDAERE
ANTIKOERPER
............................................................................
58
6.1.10.
BESONDERE
GERAETE
......................................................................................................
58
6.2.
METHODEN
.............................................................................................................................
59
6.2.1.
ANZUCHT
VON
VERWENDETEN
ORGANISMEN
.....................................................................
59
6.2.2.
NUKLEINSAEURE
METHODEN
..............................................................................................
61
6.2.3.
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.......................................................................................
64
6.2.4.
ANTIKOERPER
GENERIERUNG
...............................................................................................
67
6.2.5.
PLASMIDKLONIERUNGEN
....................................................................................................
68
7.
LITERATUR
.......................................................................................................................................
70
8.
ANHANG
........................................................................................................................................
83
8.1.
VERWENDETE
SEQUENZ
VON
LIPRIN-A4
FULL-LENGHT
...............................................................
83
8.2.
VERWENDETE
SEQUENZ
DES
LIPRIN-A4
PROMOTOR
-2380/+26
.............................................
87
8.3.
VEKTORKARTEN
AUSGESUCHTER
PLASMIDE
...............................................................................
90
8.4.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.......................................................................................................
91
8.5.
TABELLENVERZEICHNIS
............................................................................................................
93
8.6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
........................................................................................................
94
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