Entwicklung von dual anvisierenden Antikörper-Derivaten zur Therapie von Neoplasien der B-Zellreihe:
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| Sprache: | German English |
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2010
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1.
ZUSAMMENFASSUNG
1
1.1
ENGLISCHE
ZUSAMMENFASSUNG
(ABSTRACT)
1
1.2
DEUTSCHE
ZUSAMMENFASSUNG
2
2.
EINLEITUNG
5
2.1
HAEUFIGKEIT
UND
KLASSIFIZIERUNG
MALIGNER
ERKRANKUNGEN
DES
HAEMATOPOIETISCHEN
SYSTEMS
6
2.1.1
LYMPHOME
UND
LEUKAEMIEN
DER
B-ZELLREIHE
7
2.1.1.1
HODGKIN-LYMPHOME
8
2.1.1.2
NON-HODGKIN-LYMPHOME
9
2.1.1.3
CHRONISCHE
LYMPHOZYTISCHE
LEUKAEMIE
DER
B-ZELLREIHE
(B-CLL)
11
2.1.1.4
AKUTE
LYMPHOBLASTISCHE
LEUKAEMIE
DER
B-ZELLREIHE
(B-ALL)
14
2.2
IMMUNTHERAPIE
ZUR
BEHANDLUNG
MALIGNER
ERKRANKUNGEN
16
2.2.1
STRATEGIEN
DER
ANTIKOERPER-BASIERTEN
KREBSTHERAPIE
17
2.2.2
WIRKMECHANISMEN
THERAPEUTISCHER
ANTIKOERPER
17
2.2.3
ANTIKOERPER-KONJUGATE
20
2.2.4
ANTIKOERPER
IN
DER
THERAPIE
21
2.3
BISPEZIFLSCHE
ANTIKOERPER
25
2.3.1
FORMATE
BISPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
26
2.3.2
REKOMBINANTE
BISPEZIFISCHE
ANTIKOERPER-DERIVATE
27
2.3.3
LIMITIERUNGEN
REKOMBINANTER
SCFV
ANTIKOERPER-DERIVATE
30
2.4
ZIELSTRUKTUREN
AUF
EFFEKTORZELLEN
31
2.4.1
DER
FCY-REZEPTOR
III
(CD16)
32
2.5
ZIELSTRUKTUREN
AUF
TUMORZELLEN
33
2.5.1
ZIELSTRUKTUREN
AUF
NEOPLASIEN
DER
B-ZELLREIHE
33
2.5.2
.
HLA-DR
ALS
ZIELANTIGEN
35
2.5.3
CD19
ALS
ZIELSTRUKTUR
ZUR
IMMUNTHERAPIE
36
2.5.4
CD33
ALS
ZIELANTIGEN
38
3.
AUFGABENSTELLUNG
41
3.1
VALIDIERUNG
DES
YYDUALEN-TARGETINGS
41
3.2
ENTWICKLUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
EINES
SCTBS
FUER
DIE
BE
HANDLUNG
VON
BIPHAENOTYPISCHEN
LEUKAEMIEN
41
4.
ERGEBNISSE
42
4.1
HERSTELLUNG
UND
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
REKOMBI
NANTER
SCFV
FUSIONSPROTEINE
GEGEN
HLA-DR
UND
CD19
42
4.1.1
KONSTRUKTION
DER
EXPRESSIONS-PLASMIDE
FUER
DIE
SCTBS
HLA-DR
DSL6-HUL9,
HLA-DR-DSL6-HLA-DR
UND
DIE
BSSCFVS
HLA-DR
DSL6UNDHUL9-DSL6
42
4.1.2
EUKARYOTISCHE
EXPRESSION
UND
AUFREINIGUNG
DER
REKOMBINANTEN
ANTIKOERPER-DERIVATE
43
4.1.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
BINDEEIGENSCHAFTEN
DES
SCTB
HLA-DR
DSL6-HUL9
44
4.1.4
BESTIMMUNG
DER
GLEICHGEWICHTS-BINDEKONSTANTEN
(KO)
DER
RE
KOMBINANTEN
ANTIKOERPER-DERIVATE
45
4.1.5
THERMISCHE
STABILITAET
DES
SCTB
HLA-DR-DSL6HUL9
IN
HUMANEM
SERUM
IN
VITRO
46
4.1.6
BESTIMMUNG
DER
OBERFLAECHENRETENTION
DES
SCTB
HLA-DR-DSL6
HUL9
UND
DER
BSSCFVS
AUF
CD19
UND
HLA-DR-POSITIVEN
ZELLEN
47
4.1.7
VERMITTLUNG
ANTIKOERPER-ABHAENGIGER
ZELLULAERER
ZYTOTOXIZITAET
DURCH
DIE
BSSCFVS
HLA-DR-DSL6
UND
HU19-DS16,
SOWIE
DEN
SCTB
HLA-DR-DSL6-HUL9
48
4.1.7.1
NACHWEIS
DER
INDUKTION
VON
ZELLULAERER
ZYTOTOXIZITAET
DURCH
DEN
SCTB
HLA-DR-DSL6-HUL9
49
4.1.7.2
ANTIGEN-SPEZIFISCHE
VERMITTLUNG
DER
ADCC
DURCH
DEN
SCTB
HLA
DR-DSL6-HUL9
51
4.1.7.3
SPEZIFISCHE
LYSE
DER
HLA-DR
UND
CD19-POSITIVEN
RAJI
TUMOR
ZELLLINIE
IN
ABHAENGIGKEIT
DER
KONZENTRATION
DER
BSSCFVS
HU19
DSL6
UND
HLA-DR-DSL6,
SOWIE
DES
SCTB
HLA-DR-DSL6-HUL9
52
4.1.7.4
VERMITTLUNG
SELEKTIVER
LYSE
VON
HLA-DR
UND
CD19-POSITIVEN
ZELLEN
DURCH
DEN
SCTB
HLA-DR-DSL6-HUL9
54
4.2
HERSTELLUNG
UND
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DES
DUAL
BINDENDEN
SCTB
33-DS16-DS19
58
4.2.1
KONSTRUKTION
DES
EXPRESSIONS-PLASMIDS
FUER
DEN
SCTB
33-DSL6
DSL9
58
4.2.2
EUKARYOTISCHE
EXPRESSION
UND
AUFREINIGUNG
DES
SCTB
33XDSL6XDSL9
59
4.2.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
BINDUNGSEIGENSCHAFTEN
DES
SCTB
33-DSL6
DSL9
60
4.2.4
BESTIMMUNG
DER
GLEICHGEWICHTS-BINDUNGSKONSTANTEN
(KP)
DES
SCTB
33-DS16-DS19
63
4.2.5
THERMISCHE
STABILITAET
DES
SCTB
33-DSL6-DSL9
IN
HUMANEM
SERUM
INVITRO
65
4.2.6
BESTIMMUNG
DER
OBERFLAECHENRETENTION
DES
SCTB
33-DSL6-DSL9
AUF
CD19
UND
CD33-POSITIVEN
ZELLEN
67
4.2.7
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
VERMITTLUNG
DER
ANTIKOERPER
ABHAENGIGENZELLULAEREN
ZYTOTOXIZITAET
(ADCC)
DURCH
DEN
SCTB
33
DSL6-DSL9
69
5.
DISKUSSION
74
5.1
DER
SCTB
HLA-DR-DS16-HU19
75
5.2 DER
SCTB
33-DS16-DS19
78
6.
MATERIAL
UND
METHODEN
81
6.1
MATERIALIEN
81
6.1.1
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
81
6.1.2
ALLGEMEINE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
81
6.1.3
VEKTOREN
81
6.1.4
OLIGONUKLEOTIDE
81
6.1.5
BAKTERIENSTAEMME
82
6.1.6
ZELLKULTURMEDIEN
83
6.1.7
ZELLLINIEN
83
6.1.9
ANTIKOERPER
84
6.2
METHODEN
84
6.2.1
ALLGEMEINE
METHODEN
84
6.2.2
KLONIERUNGEN
85
6.2.2.1
HERSTELLUNG
DER
EXPRESSIONS-PLASMIDE
FUER
DIE
ANTIKOERPER
DERIVATE
UND
ANTIGEN-EXPRESSION
85
6.2.3
EXPRESSION
DER
REKOMBINANTEN
ANTIKOERPER-DERIVATE
UND
DER
GFP
UND
RFP
FUSIONSPROTEINE
IN
HEK
293T
ZELLEN
86
6.2.4
HERSTELLUNG
STABIL
TRANSFIZIERTER
HEK
293
ZELLLINIEN
86
6.2.5
AUFREINIGUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
AUS
HYBRIDOMEN
87
6.2.6
SODIUM
DODECYLSULFATE
POLYACRYLAMIDE
GEL
ELECTROPHORESIS
(SDS
PAGE)
UND
WESTERN-TRANSFER
EXPERIMENTE
87
6.2.7
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
METHODEN
87
6.2.7.1
NACHWEISE
DER
SPEZIFISCHEN
UND
SIMULTANEN
BINDUNG
DER
ANTI
KOERPER-DERIVATE
88
6.2.7.2
BESTIMMUNG
DER
GLEICHGEWICHTSKONSTANTE
(KP)
DER
REKOMBINANTEN
ANTIKOERPER-DERIVATE
88
6.2.7.3
BESTIMMUNG
DER
SERUMSTABILITAET
IN
VITRO
89
6.2.7.4
BESTIMMUNG
DER
ZELLOBERFLAECHENRETENTION
89
6.2.7.5
BESTIMMUNG
DER
ANTIGENDICHTE
AUF
ZELLOBERFLAECHEN 90
6.2.8
ISOLIERUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
(MNCS)
UND
POLYMORPHNUKLEAERER
ZELLEN
(PMNS)
90
6.2.9
ZYTOTOXIZITAETSEXPERIMENTE
90
6.2.10
GRAPHISCHE
AUSWERTUNG
UND
STATISTISCHE
ANALYSE
91
7.
LITERATURVERZEICHNIS
92
8.
WEITERE
INFORMATIONSQUELLEN
113
9.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
114
10.
EIGENE
VEROEFFENTLICHUNGEN
119
|
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| title_short | Entwicklung von dual anvisierenden Antikörper-Derivaten zur Therapie von Neoplasien der B-Zellreihe |
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