Molekularbiologische Methoden: 41 Tabellen
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Stuttgart (Hohenheim)
Ulmer
2010
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INHALTSVERZEICHNIS
VORWORT 7
1 DAS LEBEN UND SEINE BESTAND- TEILE 11
1.1 DER AUFBAU VON DNA UND RNA 13 1.2 DER GENETISCHE CODE 16 1.3 DIE
GENE 17 1.4 DIE PROTEINE 22 1.5 DIE ZELLE 27
2 GRUNDLAGEN DER ARBEIT IM LABOR 29
2.1 WASSER 30 2.2 MESSUNG DES PH-WERTES 31 2.3 PUFFER 32
2.4 WAAGEN 33 2.5 MIKROPIPETTEN 34 2.6 GEFAESSE IM LABOR 36 2.7
ZENTRIFUGEN 36 2.8 MISCHEN UND KONZENTRIEREN 40 2.9 KONZENTRIEREN 41
2.10 PUFFERWECHSEL 42 2.11 PROBEN-LAGERUNG 42 2.12 STERILES ARBEITEN 43
2.13 DIE KLEINEN FREUNDE - PFLEGE UND
AUFZUCHT VON ESCHERICHIA COLI 45 2.14 DER AUFSCHLUSS VON GEWEBEN 50
3 AUFREINIGUNG VON NUKLEINSAEUREN 53
3.1 GEGENSPIELER ERFOLGREICHER DNA- UND RNA-ISOLATIONEN 55 3.2
EXTRAKTION VON NUKLEINSAEUREN 58 3.3 DIE WEITERE AUFREINIGUNG DER DNA 59
3.4 EINIGE AUSGEWAEHLTE
DNA-AUFREINIGUNGSMETHODEN 66 3.5 DIE ISOLATION VON RNA 71 3.6 UEBERSICHT
UEBER DEN EINSATZ VON KITS 74 3.7 TIPPS ZUM ERZIELEN HOHER AUSBEUTEN
BEI DER ISOLATION VON NUKLEINSAEUREN 74 3.8 QUANTIFIZIERUNG VON
NUKLEINSAEUREN 75
4.1
4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7
5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6
5.7
5.8
5.9
6.1 6.2 6.3 6.4 6.5
6.6 6.7 6.8 6.9
6.10
POLYMERASE KETTENREAKTION 79
PRINZIP DER POLYMERASE-KETTEN- REAKTION 81 DIE KOMPONENTEN DER PCR 81
GERAETE FUER DIE PCR 90 DIE STANDARD-PCR 91 AUSGEWAEHLTE PCR-METHODEN 91
ANWENDUNGEN DER PCR 100
OPTIMIERUNG DER PCR-REAKTION 101
KLONIEREN FUER EINSTEIGER 103
RESTRIKTIONSENZYME 105 LIGATION 113 DEPHOSPHORYLIERUNG 115 DIE
TRANSFORMATION VON E. COLI 117 DER WEG ZUM KLONIERTEN GEN 119 DER
UNGERICHTETE EINBAU EINER AMPLIFIZIERTEN DNA IN EINEN VEKTOR 119 DER
GERICHTETE EINBAU VON DNA IN EINEN VEKTOR 122 LIGASE-UNABHAENGIGE
KLONIERUNGSSYSTEME 124 WENN ES MAL NICHT KLAPPT. 125
VEKTOREN 127
PLASMIDE 129 KLONIERUNGSPLASMIDE 132 REKOMBINASE-BASIERTE KLONIERUNG
EXPRESSIONSPLASMIDE 139
REPORTERGENE 143 PHAGEN 146 PHAGEMIDE 147 SHUTTLE-VEKTOREN 147
KUENSTLICHE CHROMOSOMEN: BACS, PACS UND YACS 148
HEFEN ALS KLONIERUNGS- UND EXPRESSIONSSYSTEM 149
136
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/1002861837
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
6.11 DIE TRANSFORMATION VON PFLANZEN 151 6.12 DIE TRANSFORMATION VON
SAEUGETIEREN UND TIERISCHEN ZELLKULTUREN 153
7 ELEKTROPHORESE VON NUKLEINSAEUREN 157
7.1 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE VON DNA 159 7.2 DIE DETEKTION DER DNA IM
GEL 164 7.3 PRAEPARATIVE AGAROSEGELE 165 7.4 AUFTRENNEN VON RNA IM
AGAROSEGEL 167 7.5 FEHLERSUCHE BEI DER AGAROSE- GELELEKTROPHORESE 168
8 PROTEINAUFREINIGUNG 171
8.1 HOMOGENISATION 175 8.2 EXTRAKTION VON PROTEINEN 177 8.3 DIALYSE UND
KONZENTRIERUNG 181 8.4 WEITERE AUFREINIGUNGSSCHRITTE 183
8.5 QUANTIFIZIERUNG VON PROTEINEN 186 8.6 AUFREINIGUNGSVERFAHREN FUER
GETAGGTE PROTEINE AUS E. COLI 189
9 GELELEKTROPHORESE VON PROTEINEN 195
9.1 DIE POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (PAGE) 197 9.2 DIE
DENATURIERENDE SDS-PAGE 197 9.3 DAS FAERBEN DER GELE 206 9.4 WEITERE
ELEKTROPHORESEVERFAHREN
FUER PROTEINE 208 9.5 WESTERN BLOTTING 211 9.6 WENN ES MAL NICHT
KLAPPT. 214
10
10.1 10.2
10.3
10.4 10.5 10.6 10.7 10.8
10.9
IMMUNBIOCHEMISCHE METHODEN 217
ANTIKOERPER 219 PRINZIPIEN IMMUNBIOCHEMISCHER VERFAHREN 223 SPEZIFISCHE
UND UNSPEZIFISCHE
BINDUNGEN 229 IMMUNBIOCHEMISCHE VERFAHREN 230 ELISA 230 IMMUNFAERBUNG
NACH WESTERN BLOT 235 IMMUNOAFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 237 WEITERE
ANTIKOERPER-BASIERTE METHODEN 239 WENN ES MAL NICHT KLAPPT. 240
11 MOLEKULARBIOLOGIE FUER FORTGESCHRITTENE 243
11.1 DNA-SEQUENZIERUNG 245 11.2 BIOINFORMATISCHE SEQUENZANALYSE 248 11.3
DER EINSATZ DER BIOINFORMATIK FUER DIE KLONIERUNG VON DNA 250 11.4
VOLLSTAENDIGE SEQUENZEN DURCH
3'RACE-PCR UND 5'RACE-PCR 251 11.5 STAMMSAMMLUNGEN 253 11.6
IDENTIFIZIERUNG VON NUKLEINSAEUREN
DURCH HYBRIDISIERUNG 253 11.7 DNA-CHIPS ODER MICROARRAYS 255 11.8
VERAENDERUNG VON NUKLEINSAEUREN 256 11.9 SYNTHETISCHE GENE 260
ANHANG
AI SICHERHEIT IM LABOR 262 A2 DIE 10 GOLDENEN LABORREGELN 263 A3 DAS
LABORBUCH UND DIE FINALE ARBEIT 264
VERZEICHNIS DER MAPS, PROTOKOLLE, E-DOCS, TABELLEN UND ABBILDUNGEN 266
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 268 QUELLENVERZEICHNIS 268
REGISTER 269 |
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