Gemcitabine-induzierte Apoptose in der Bronchialkarzinomzelllinie KNS62 und Resistenz gegen Chemotherapeutika vermittelt durch BCL-XL-Überexpression:
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| adam_text | Titel: Gemcitabine-induzierte Apoptose in der Bronchialkarzinomzelllinie KNS62 und Resistenz gegen Chemothe
Autor: Zöfelt, Bastian
Jahr: 2009
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1. Das Bronchialkarzinom 1
1.2. Gemcitabine als Chemotherapeutikum bei Non-Small-Lungcancer (NSCLC) 3
1.3. Apoptose 4
1.4. Chemoresistenz und Bcl-xL 9
1.5. Fragestellung 10
2. Material und Metboden 11
2.1. Zelllinie 11
2.2. Zellkultur 11
2.3. Transduktion der Zelllinie 12
2.4. Jam-Test 12
2.5. Nichtradioaktive Zytotoxizitäts-Analyse 13
2.6. D API-Fluoreszenz-Färbung, morphologischer Apoptosenachweis 14
2.7. CD-95 Durchflusszytometrie, FACS 14
2.8. Proteinextraktion, Westernblot und Immundetektion 15
2.9. DLC Durchflusszytometrie (FACS), Mitochondrienfarbung, Apo-Alert 18
2.10. Orthotopes Tumormodell 18
2.10.1. Rahmenbedingungen des Tierversuchs 18
2.10.2. Aufarbeitung der Tumorzellen 18
2.10.3 Tiere und Tierhaltung 19
2.10.4. Inokulation der Tumorzellen 19
2.11. Statistik 20
3. Ergebnisse 21
3.1. Transduktion von Bcl-xLGenen 21
3.2. Gemcitabinebehandrung der KNS62 Pools 22
3.2.1 Jam-Test 22
3.2.2. Nichtradioaktive Zytotoxizitäts-Analyse 23
3.2.3. DAPI- Färbung 24
3.3. Vergleich der Gemcitabine induzierten Apoptose mit der Todesrezeptor
(Fas-R CD-95) induzierten Apoptose 25
3.4. Untersuchung der CD-95 Expression nach Gemcitabinebehandlung in der FACS-
Analyse 26
3.5. Einfluss der Caspaseninhibition auf die Gemcitabine induzierte Apoptose 27
3.6. Gemcitabine induzierte Caspasen-Aktivierung 28
3.7. CD95 induzierte Caspasen-Aktivierung 29
3.8. Einfluß von Bcl-xl auf das mitochondriale Transmembranpotential unter
Gemcitabinetherapie 30
3.9. Gemcitabine induzierte Freisetzung von Cytochrom c im Zytoplasma 31
3.10. Tumorlast von KNS62 Pools unter Gemcitabinetherapie im orthotopen
Mausmodell 32
4.Diskussion 34
4.1. Die in vitro Versuche 34
4.]. 1. Der Wirkmechanismus vom Chemotherapeutikum Gemcitabine 34
4.1.2. Auswirkungen vom antiapoptotischen Protein Bcl-xL 36
4.2. Der in vivo Versuch 38
5. Zusammenfassung 40
6. Literaturverzeichnis 42
7. Anhang 48
7.1. Danksagung 48
7.2. Lebenslauf 49
7.3. Publikation 50
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