Wirksamkeitsprüfung des topisch wirkenden ICE-Inhibitors RU 36384 im Modell der murinen DSS-Kolitis:
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2009
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| adam_text | Titel: Wirksamkeitsprüfung des topisch wirkenden ICE-Inhibitors RU 36384 im Modell der murinen DSS-Kolitis
Autor: Dietrich, Dennis
Jahr: 2009
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG................................................................................................6
1.1. Chronisch entzündliche Darmerkrankungen.........................................6
1.2. Immunologische Komponente der CED.................................................7
1.3. Die Rolle der Zytokine IL-1ß und IL-18.................................................11
1.4. Das Modell der akuten DSS-induzierten Kolitis...................................12
1.5. Das lntorteukin-1p-converting-enzyme................................................14
1.6. Die ICE-Inhibitoren Pralnacasan und RU 36384..................................15
1.7. Zielsetzung..............................................................................................18
2. MATERIAL UND METHODEN...................................................................19
2.1. Substanzen.............................................................................................19
2.1.1 Pralnacasan...........................................................................................................19
2.1.2 RU 36384...............................................................................................................19
2.1.3 Dextran-Sulfat-Sodium..........................................................................................20
2.2. Versuchstiere..........................................................................................20
2.2.1 Tierversuchsantrag................................................................................................20
2.2.2 Tierbeschaffung.....................................................................................................20
2.2.3 Tierhaltung.............................................................................................................21
2.2.4 Anästhesie der Mäuse und Beendigung der Versuche.........................................21
2.2.5 Darmpräparation und Gewinnung von Gewebematenal.......................................21
2.3. KoIrrJsakrJvIät..........................................................................................22
2.3.1 Klinischer Score.....................................................................................................22
2.3.2 Histologischer Score..............................................................................................24
2.4. Praktische Durchführung der Kolitismodelle......................................25
2.4.1 Prophylaktisches Modell der DSS-induzierten Kolitis............................................25
2.4.2 Durchführung der Medikamentenapplikation.........................................................25
2.5. Messung der rektalen Temperatur........................................................25
2.6. Bestimmung des Milzgewichts.............................................................26
2.7. Blutentnahme.........................................................................................26
2.8. Durchflusszytometri«.............................................................................26
2.9. RNA-Extraktion und Reverse Transkription.........................................27
2.10.KonventiOfMlle PCR...............................................................................28
2.11.Rea/-ffme-PCR........................................................................................29
2.12.Zytokinbestirrtmung...............................................................................31
2.12.1 Enzyme-Iinked immunosorbent assay...................................................................31
2.12.2 Bradford-Assay......................................................................................................32
2.13.Statistische Analysen............................................................................32
3. ERGEBNISSE............................................................................................34
3.1. Untersuchung des zeitlichen Verlaufs verschiedener Parameter in der
murinen DSS-induzierten Kolitis...........................................................34
3.1.1 Versuchsanordnung...............................................................................................34
3.1.2 Klinischer Verlauf der DSS-induzierten Kolitis.......................................................35
3.1.3 Kolonlänge.............................................................................................................36
3.1.4 Kolongewicht..........................................................................................................37
3.1.5 Rektale Temperatur...............................................................................................38
3.1.6 Milzgewicht............................................................................................................40
3.1.7 Zytokine im Kolonhomogenat................................................................................41
3.1.8 Zytokine im Serum.................................................................................................42
3.1.9 FACS-Analyse der mesenterialen und paraaortalen Lymphknoten......................43
3.1.10 Histologische Analyse der Gewebeproben............................................................45
3.2. Wirksamkeitsprüfung des topisch wirkenden ICE- Inhibitors RU 36384
in der murinen DSS-induzierten Kolitis................................................46
3.2.1 Versuchsanordnung...............................................................................................46
3.2.2 Klinischer Score.....................................................................................................47
3.2.3 Kolonlänge.............................................................................................................49
3.2.4 Kolongewicht..........................................................................................................51
3.2.5 Konzentration von IL-1ß im Kolonhomogenat.......................................................52
3.2.6 Anzahl der IP-10m-RNA Kopien...........................................................................53
3.3. Vergleich der Wirksamkeit der beiden ICE-Inhibitoren RU 36384 und
Pralnacasan............................................................................................55
3.3.1 Versuchsanordnung...............................................................................................55
3.3.5 Milzgewicht............................................................................................................59
3.3.6 Konzentration von IL-1S im Kolonhomogenat.......................................................60
3.3.7 Konzentration von TNF-a im Kolonhomogenat.....................................................62
3.3.8 Konzentration von IFN-v im Kolonhomogenat.......................................................63
3.3.9 Konzentration von IL-10 im Kolonhomogenat.......................................................64
3.3.10 FACS-Analyse der mesenterialen und paraaoralen Lymphknoten.......................65
3.3.11 Histologische Analyse der Gewebeproben............................................................67
4. DISKUSSION..............................................................................................68
4.1. Zusammenfassung der Ergebnisse......................................................68
4.2. Diskussion der Ergebnisse vor dem Hintergrund aktueller Literatur 70
4.2.1 Untersuchung des zeitlichen Verlaufs verschiedener Parameter in der murinen
DSS-induzierten Kolitis..........................................................................................70
4.2.2 Wirksamkeitsprüfung des topisch wirkenden ICE-Inhibitors RU 36384 in der
murinen DSS-induzierten Kolitis............................................................................73
4.2.3 Vergleich der Wirksamkeit der beiden ICE-Inhibitoren RU 36384 und Pralnacasan
...............................................................................................................................74
5. KLINISCHE RELEVANZ.............................................................................76
6. ZUSAMMENFASSUNG..............................................................................77
7. LITERATURVERZEICHNIS........................................................................79
8. VERZEICHNIS DER ABKÜRZUNGEN UND AKRONYME........................86
DANKSAGUNG...............................................................................................88
CURRICULUM VITAE.....................................................................................89
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