Phänotyp und Phagozytosekapazität humaner Mesothelzellen: Bedeutung im Rahmen der Peritontitis
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
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2008
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adam_text | Titel: Phänotyp und Phagozytosekapazität humaner Mesothelzellen
Autor: Czerny, Christoph
Jahr: 2008
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 5
1.1 Peritoneum und humane peritoneale Mesothelzellen..................... 5
1.1.1 Aufbau des Peritoneums und Ursprung der Mesothelzellen......... 5
1.1.2 Funktion und Morphologie der humanen peritonealen
Mesothelzellen................................................................... 6
1.2 Humane peritoneale Mesothelzellen und Peritonitis....................... 6
1.2.1 Entstehung und Grundlagen einer Peritonitis............................ 6
1.2.2 Einteilung der Peritonitiden................................................... 6
1.2.2.1 Primäre Peritonitis.......................................................... 7
1.2.2.2 Sekundäre Peritonitis...................................................... 7
1.2.3 Immunologische Prozesse im Rahmen einer Peritonitis.............. 7
1.2.4 Die Rolle von Tumor-Nekrose-Faktor alpha und lnterleukin-1
beta................................................................................. 8
1.2.5 Mesothelzellen und die Rekrutierung von immunkompetenten
Zellen.............................................................................. 9
1.3 Humane peritonelae Mesothelzellen und Phagozytose.................... 10
1.3.1 Mechanismus der Phagozytose............................................. 10
1.3.2 Phagozytose durch humane peritoneale Mesothelzellen............. 11
1.4 Ziel der Arbeit........................................................................ 11
2 MATERIAL UND METHODEN 12
2.1 Material und Chemikalien......................................................... 12
2.1.1 Geräte.............................................................................. 12
2.1.2 Verbrauchsmaterialien......................................................... 12
2.1.3 Chemikalien...................................................................... 13
2.1.4 Pufferund Lösungen........................................................... 14
2.1.5 Bakterien......................................................................................... 14
2.2 Kultivierung von humanen peritonealen Mesothelzellen................... 15
2.2.1 Verwendete Medien............................................................ 15
2.2.2 Präparation der für die Stimulation der Mesothelzellen
verwendeten Chemikalien.................................................... 15
2.2.2.1 N-Formyl-Methionyl-Leucyl-Phenylalanin............................ 15
2.2.2.2 Lipopolysaccharid von Escherichia coli............................... 16
2.2.2.3 Tumor-Nekrose-Faktor-alpha............................................ 16
2.2.2.4 lnterleukin-1-beta........................................................... 17
2.2.3 Isolierung von humanen peritonealen Mesothelzellen................ 17
2.2.4 Vitalitätstest und Zellzählung................................................ 18
2.2.5 Kultivierung der Mesothelzellen und Vorbereitung für Versuche in
6-Lochplatten..................................................................... 18
2.2.6 Immunfärbung für die durchflusszytometrische Analyse.............. 19
2.2.7 Phagozytosetest................................................................. 19
2.2.8 Messung der Phagozytoseleistung der Mesothelzellen nach
CD 64-Blockade................................................................. 20
2.2.9 Grundlagen der Durchflusszytometrie...................................... 22
2.2.10 Auswertung................................................................................... 23
2.3 Semiquantitative rt-PCR........................................................... 25
2.3.1 Geräte.............................................................................. 25
2.3.2 Verbrauchsmaterialien......................................................... 25
2.3.3 Chemikalien...................................................................... 25
2.3.4 Puffer und Lösungen...................................................................... 26
2.3.5 Kommerzielle Kits............................................................... 27
2.3.6 RNA-Isolierung............................................................................... 27
2.3.7 cDNA-Synthese................................................................ 28
2.3.8 Semiquantitative rt-PCR...................................................... 29
2.3.9 Gelelektrophorese.............................................................. 30
2.3.10 Auswertung..................................................................... 31
2.4 Statistische Analyse............................................................... 31
3 ERGEBNISSE 32
3.1 Steigerung der CD 54 Expression nach Inkubation mit TNFa/IL-1ß... 32
3.2 Zeitabhängige Steigerung der CD 54 Expression durch
Aktivierung mit TN Fa/IL-1ß........................................................ 33
3.3 Einfluss von FMLP, LPS, Peritonealsekret sowie TNFa/IL-1ß
auf die CD 54 Oberflächenexpression......................................... 34
3.4 Expression von CD 14 auf der Oberfläche von humanen
peritonealen Mesothelzellen..................................................... 36
3.5 Anteil der phagozytierenden Mesothelzellen in Abhängigkeit der
Bakterienkonzentration................................................................ 37
3.6 Abhängigkeit der Phagozytoseleistung von der Stimulation mit
TNFa/IL-1ß, FMLP, LPS oder Peritonealsekret.............................. 38
3.7 Korrelation der Expression von CD 54 und dem Anteil der
phagozytierenden humanen peritonealen Mesothelzellen.................. 39
3.8 Messung der Oberflächenexpression von Fc-y und Komplement-
rezeptoren auf humanen peritonealen Mesothelzellen...................... 40
3.9 Dynamik der CD 64 Oberflächenexpression nach Stimulation
mit Lipopolysaccharid im zeitlichen Verlauf in FCShaltigem und
serumfreien Medium............................................................... 41
3.10 Reduktion des Anteils der phagozytierenden humanen
peritonealen Mesothelzellen nach Blockade von CD 64 durch
einen spezifischen Antikörper.................................................. 42
3.11 Nachweis von CD 64 mRNA durch reverse Transkriptase PCR...... 43
4 DISKUSSION 45
4.1 Steigerung der CD 54 Expression nach Inkubation mit TNFa/IL-1ß... 45
4.2 Zeitabhängige Steigerung der CD 54 Expression durch
Aktivierung mit TNFa/IL-1ß........................................................ 46
4.3 Einfluss von FMLP, LPS, Peritonealsekret sowie TNFa/IL-1ß
auf die CD 54 Oberflächenexpression......................................... 47
4.4 Expression von CD 14 auf der Oberfläche von humanen
peritonealen Mesothelzellen...................................................... 49
4.5 Anteil der phagozytierenden Mesothelzellen in Abhängigkeit
der Bakterienkonzentration....................................................... 49
4.6 Die Phagozytosekapazität nach Stimulation mit TNFa/IL-1ß,
FMLP, LPS und Peritonealsekret............................................... 50
4.7 Korrelation der Expression von CD 54 und dem Anteil
der phagozytierenden humanen peritonealen Mesothelzellen.......... 52
4.8 Oberflächenexpression von Fc-y und Komplementrezeptoren
auf humanen peritonealen Mesothelzellen................................... 52
4.9 Expression von CD 64 auf der Oberfläche von Mesothelzellen
im zeitlichen Verlauf................................................................ 53
4.10 Abhängigkeit der Phagozytose durch humane peritoneale
Mesothelzellen von CD 64...................................................... 54
4.11 Nachweis von CD 64 mRNA durch reverse Transkriptase PCR...... 55
5 ZUSAMMENFASSUNG 57
6 SUMMARY 59
7 LITERATURVERZEICHNIS 60
8 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS 68
9 TABELLEN UND ABBILDUNGEN 70
10 DANKSAGUNG 71
11 SCHRIFTLICHE ERKLÄRUNG UND PUBLIKATIONS- 72
VERZEICHNIS
12 TABELLARISCHER LEBENSLAUF 73
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