Identifizierung und Charakterisierung von Moco-bindenden Proteinen aus Arabidopsis thaliana:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2009
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| adam_text | IDENTIFIZIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON MOCO-BINDENDEN PROTEINEN AUS
ARABIDOPSIS THALIANA VON DER FAKULTAT FUR LEBENSWISSENSCHAFTEN DER
TECHNISCHEN UNIVERSITAT CAROLO-WILHELMINA ZU BRAUNSCHWEIG ZUR ERLANGUNG
DES GRADES EINES DOKTORS DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR. RER. NAT.)
GENEHMIGTE DISSERTATION VON TOBIAS KRUSE AUS FIIRTH INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1.1 MOLYBDAN IN BIOLOGISCHEN SYSTEMEN 1
1.2 DER MOLYBDANCOFAKTOR 1 1.3 DIE STRUKTUR DES MOLYBDANCOFAKTORS 2 1.4
DIE BIOSYNTHESE DES MOLYBDANCOFAKTORS 3 1.5 MODIFIZIERUNGEN DES
MOLYBDANCOFAKTORS 6 1.6 MOCO-BINDENDE PROTEINE 6 1.7 ZIELE DER ARBEIT 9
2 ERGEBNISSE 2.1 IDENTIFIZIERUNG VON TERTIARSTRUKTURHOMOLOGEN ZU
CHLAMYDOMONAS MCP IN ARABIDOPSIS THALIANA 10 2.2 HOMOLOGE ZU
CHLAMYDOMONAS MCP IN ARABIDOPSIS THALIANA 17 2.3 HOMOLOGE ZU
CHLAMYDOMONAS MCP IN ANDEREN ORGANISMEN 19 2.4 MDGLICHE CHLAMYDOMONAS
MCP-HOMOLOGE IN EUKARYOTEN 21 2.5 KLONIERUNG, REKOMBINANTE
UBEREXPRESSION UND AUFREINIGUNG VON PUTATIVEN ARABIDOPSIS MBP 23 2.6
BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON PUTATIVEN ARABIDOPSIS MBP 24 2.6.1
BESTIMMUNG DER APPARENTEN MOLEKULAREN MASSE PUTATIVER ARABIDOPSIS MBP 24
2.6.2 IDENTIFIZIERUNG VON DIMERISIERUNGSBETEILIGTEN AMINOSAUREN 25 2.6.3
NACHWEIS VON PROTEINGEBUNDENEM MOCO/MPT NACH NI-NTA- CHROMATOGRAPHIE 28
2.6.4 IN WFRO-MOCO-BINDUNG AN PUTATIVE MBP AUS ARABIDOPSIS 29 2.6.5
LOKALISIERUNG DES MOCO-BINDUNGSMOTIVES 35 2.6.6 DIE STRUKTUR DER MBP
C-TERMINI 41 2.6.7 DIE GENSTRUKTUR VON ARABIDOPSIS MBP 43 2 6.8
REDOXEIGENSCHAFTEN DER MBP 44 2 6 9 DIE REDOXABHANGIGE MOCO/MPT-BINDUNG
DURCH MBP3 UND MBP5 49 2.6.10 MODELL DER MOCO-BINDUNG 52 2 7
MOCO/MPT-BINDUNG DURCH CNX1E 55 2 8 DIE PHYSIOLOGIE VON ARABIDOPSIS MBP
61 2 81 ARABIDOPSIS MBP-KNOCK-OUT-P1 ANZEN 61 INHALTSVERZEICHNIS 2.8.2
ERZEUGUNG VON ARABIDOPSIS MBP-ANF/SENSE-PFLANZEN 62 2.8.3
CHARAKTERISIERUNG VON MBP-KNOCK-OUT- UND ANF/SENSE-PFLANZEN 63 2.8.4 DER
EINFLUG DER MBP AUF N/Y-)-REKONSTITUTIONSAKTIVITAT 66 2.8.5 DIE
EXPRESSIONSMUSTER VON ARABIDOPSIS MBP 68 3 DISKUSSION 74 3.1
IDENTIFIZIERUNG VON MBP IN ARABIDOPSIS 74 3.2 HOMOLOGE VON CHLAMYDOMONAS
MCP UND ARABIDOPSIS MBP IN ANDEREN ORGANISMEN 74 3.3 SIND ARABIDOPSIS
MBP FUNKTIONSHOMOLOG ZU CHLAMYDOMONAS MCP? 77 3.4 DIE DIMERE
KONSTITUTION DER ARABIDOPSIS MBP 77 3.5 MOCO/MPT-BINDUNG DURCH
ARABIDOPSIS MBP 78 3.6 DIE ARABIDOPSIS MBP C-TERMINI SIND BETEILIGT AN
MOCO/MPT- BINDUNG 81 3.7 DIE MOCO/MPT-BINDUNG DURCH MBP3 UND MBP5 IST
REDOXSENSITIV 82 3.8 DAS BINDUNGSMODELL VON MOCO AN ARABIDOPSIS MBP 84
3.9 MOCO/MPT-BINDUNG DURCH CNX1 E 84 3.10 PHYSIOLOGISCHE AUFGABEN VON
ARABIDOPSIS MBP 85 3.11 AUSBLICK 87 4 MATERIAL UND METHODEN 89 4.1
MATERIAL 89 4.1.1 VERWENDETE MEDIEN, PUFFER UND LOSUNGEN 89 4.1.2
CHEMIKALIEN UND ENZYME 89 4.1.3 VERWENDETE ORGANISMEN 89 4.1.4
VERWENDETE PLASMIDE 90 4.1.5 VERWENDETE PRIMER 90 4.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN 93 4.2.1 KLONIERUNGSTECHNIKEN 93 4.2.2
POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 93 4.2.2.1 FUSIONS-PCR 93 4.2.2.2
KLONIERUNGS-PCR 94 4.2.3 DNA-SEQUENZIERUNG 94 4.2.4 RNA-LSOLATION 94
4.2.5 REVERSE TRANSKRIPTASE (RT)-REAKTION 95 INHALTSVERZEICHNIS 4.3
ARBEITEN MIT ARABIDOPSIS THALIANA 95 4.3.1 PFLANZENANZUCHT 95 4.3.2 EMTE
VON ARABIDOPSIS-SAMEN 96 4.3.3 STERILISATION VON ARABIDOPSIS-SAMEN 96
4.3.4 SELEKTION TRANSGENER PFLANZEN 97 4.3.5 HERSTELLUNG HOMOZYGOTER
/CNOC/C-OUF-PFLANZEN 97 4.3.6 NACHWEIS VON ENZYMAKTIVITATEN IN
ARABIDOPSIS 98 4.3.6.1 BESTIMMUNG DER NITRATREDUKTASE-AKTIVITAT 98
4.3.6.2 BESTIMMUNG DER SULFITOXIDASE-AKTIVITAT 98 4.3.6.3 NACHWEIS DER
AKTIVITATEN VON ALDEHYDOXIDASEN UND XANTHINDEHYDROGENASE 99 4.4
PROTEINBIOCHEMISCHE ARBEITEN 100 4.4.1 REKOMBINANTE FREMDGENEXPRESSION
IN E. COLI 100 4.4.2 AFFINITATSCHROMATOGRAPHISCHEAUFREINIGUNG
HIS-GETAGGTER PROTEINE 100 4.4.3 BESTIMMUNG VON PROTEINKONZENTRATIONEN
101 4.4.3.1 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION VON GEREINIGTEN
PROTEINEN 101 4.4.3.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION VON
ZELLEXTRAKTEN 101 4.4.4 UMPUFFERN VON PROTEINLOSUNGEN 102 4.4.5
KONZENTRIERUNG VON PROTEINLOSUNGEN 102 4.4.6
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE(SDS-PAGE) 102 4.4.7 NATIVE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (NATIVE PAGE) 102 4.4.8 GELFILTRATION
103 4.4.9 ANIONENAUSTAUSCHER-CHROMATOGRAPHIE 103 4.4.10 MOCO/MPT-BINDUNG
AN ARABIDOPSIS MBP 103 4.4.11 MOCO/MPT-NACHWEIS UBER FORMA-DEPHOSPHO 104
4.4.12 DISULFID-DITHIOL-REDOXTITRATION 105 4.4.13 REDUKTION VON CNX1E
DURCH MATRIX-GEKOPPELTES TCEP 107 4.4.14 NACHWEIS FREIER
SULFHYDRYLGRUPPEN DURCH DTNB 107 4.4.15 /V/M-REKONSTITUTIONSASSAY ZUM
NACHWEIS VON MOCO/MPT 107 4.4.16 MALDI-MS BASIERTE IDENTIFIZIERUNG VON
REDOXSENSITIVEN CNX1E CYSTEINRESTEN 108 5 ZUSAMMENFASSUNG 109 6
LITERATURVERZEICHNIS 110
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