Untersuchungen zum Einfluss von statischer Kompression und Antioxidantien auf die Biosyntheseleistung und die Induktion von Apoptose in Gelenkknorpelgewebe:
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| adam_text | 1. Einleitung 1
1.1 Gelenkknorpel -Aufbau und Funktion 1
1.2 Osteoarthrose 3
1.2.1 Definition und Bedeutung 3
1.2.2 Ätiologie und Verlauf 4
1.3 Zelltod in degenerativem Knorpelgewebe 5
1.3.1 Apoptose und Nekrose 6
1.3.2 Apoptose als physiologischer und pathologischer Mechanismus 7
1.4 Statische Kompression und reaktive Sauerstoffspezies 8
1.4.1 ROS (reaktive Sauerstoffspezies) 8
1.4.2 Statische Kompression 12
1.4.3 Bedingungen in vivo 12
1.4.4 Genregulation unter statischer Kompression 14
1.5 Fragestellung 17
2. Material und Methoden 18
2.1 Chemikalien 18
2.2 Explantatgewinnung 18
2.2.1 Präparation 19
2.2.2 Gewinnung der Gelenkknorpelexplantate 19
2.3 Versuchsaufbau 21
2.3.1 Statische Kompression 21
2.3.2 Versuchsgruppen für Sulfateinbau, Apoptose, mRNA-Messung 22
2.3.3 Versuchsablauf 23
2.4 Quantifizierung der Syntheseleistung durch Sulfateinbau 25
2.4.1 Inkubation mit 35S 25
2.4.2 Messung der Radioaktivität 25
2.4.3 Messung des DNA- Gehaltes 26
2.5 Histologische Untersuchung 27
2.5.1 Fixierung und Einbettung 27
2.5.2 Färbung 29
2.6 Quantifizierung der Apoptoserate 29
2.6.1 Blickfelder und Kriterien der Apoptose am Lichtmikroskop 29
2.6.2 Auszählmethode und Berechnung des prozentualen Anteils
apoptotischer Zellen 31
2.7 Elektronenmikroskopische Darstellung der Ultrastruktur 31
2.8 real time RT-PCR 33
2.8.1 RNA-Isolierung aus Gelenkknorpelgewebe 33
2.8.2 Bestimmung der RNA-Menge 34
2.83 Durchführung der SYBR® Green real time RT-PCR 34
2.8.4 Auswertung und Darstellung der Daten der real time RT-PCR 37
2.9 Statistische Signifikanz 37
3. Ergebnisse 38
3.1 Sulfateinbau 38
3.1.1 Dosisabhängigkeit der SOD bzw. NAC- Wirkung 38
3.1.2 Einfluss von statischer Kompression und Antioxidantien auf die
Biosyntheseleistung 41
3.2 Apoptose 43
3.2.1 Induktion von Apoptose durch statische Kompression 43
3.2.2 Einfluss von statischer Kompression und Antioxidantien auf die
Apoptoserate 45
3.3 Genexpression in Knorpelgewebe nach statischer Kompression 51
4. Diskussion 55
4.1 Gelenkknorpelexplantate 35
4.2 Statische Kompression 56
4.2.1 Einfluss von statischer Kompression und Antioxidantien auf die 56
Biosyntheseleistung von Knorpelexplantaten
4.2.2 Apoptose als Folge statischer Kompression und Einfluss von 59
Antioxidantien
4.2.3 Einfluss statischer Kompression auf die Genexpression und Folgen für
den Gelenkknorpel 64
4.3 Antioxidativer Schutz 66
5. Zusammenfassung 68
6. Literaturangaben 70
7. Danksagung 85
8. Lebenslauf 86
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