Vergleichende Untersuchung der TNF-a-induzierten [TNF-alpha-induzierten] Eotaxin-CCL11-Expression durch primäre Fibroblasten:
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ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 Die atopische Dermatitis 1
1.2 Bedeutung des cosinophilcn Granulozyten 5
1.3 Chemotaxine 6
1.4 Fragestellung der Arbeit 9
2. METHODEN 10
2.1 Chemikalien und Materialien 10
2.2 Zellkultur 11
2.2.1 Gewebeproben 11
2.2.2 Zellkultivierungstechniken 11
2.3 Stimulation primärer Zellkulturen 12
2.3.1 Dosis-Wirkungs- Verhalten 12
2.3.2 Zeitkinetik 12
2.3.3 Stimulus-Einwirkdauer-Wirkungs-Verhalten 13
2.3.4 Untersuchung des Einflusses zellulärer Faktoren auf die TNF-a- 13
induzierte Eotaxin/CCLI I-Induktion
2.4 Nachweis der mRNA-Expression 14
2.4.1 RNA-Isolierung 14
2.4.2 Semiquantitative Reverse Transkription-Polymerase Kettenreaktion 16
2.4.3 Gelelektrophorese 19
2.4.4 Densitometrie 19
2.5 Statistische Auswertung 20
3. ERGEBNISSE 21
3.1 Eotaxin/CCi/i-mRNA-Expression durch primäre Fibroblasten 21
nach TNF-ct-Stimulation
3.1.1 Dosis-Wirkungs-Beziehung 22
3.1.2 Zeitkinetik der Eotaxin/CCL/./-Expression TNF-a-stimulierter 23
primärer Fibroblasten
3.1.2.1 Vergleichende Untersuchungen an primären dermalen Fibroblasten 23
aus Vorhautresektaten in unterschiedlichen Zellkulturstadien
3.1.2.2 Vergleichende Untersuchungen an primären Fibroblasten aus 27
unterschiedlichen Körperlokalisationen (Nase, Mundhöhle, Kolon)
3.2 Die Expression von Eotaxin/CCZii-mRNA als Funktion der 29
Einwirkdauer von TNF-a
3.3 Untersuchung der Eotaxin/CZ-Zii-mRNA-Expression nach 30
Stimulation mit TNF-a-haltigen Zellkulturüberständen sowie mit
TNF-a-freien Zellkulturüberständen zuvor stimulierter Zellkulturen
3.3.1 Vergleichende Untersuchungen der Eotaxin/CCX//-Expression nach 31
TNF-a-Stimulation, TNF-a-Stimulation mit nachfolgendem Stimulus¬
entzug sowie Stimulation mit TNF-a-haltigen Zellkulturüberständen
3.3.2 Vergleichende Untersuchungen der Eotaxin/CCI 11 -Expression nach 33
TNF-a-Stimulation, Stimulation mit TNF-a-haltigen Zellkultur¬
überständen sowie mit TNF-a-freien Zellkulturüberständen zuvor
TNF-a-stimulierter Fibroblasten
4. DISKUSSION 35
4.1 Kritik der Methodik 35
4.2 Pathogenetische Bedeutung von Eotaxin/CCZ/i und die Rolle des 37
Zytokins TNF-a für die atopische Dermatitis
43 TNF-o-induzierte Spätexpression von Eotaxin/CCLi/ durch 41
präkonfluente dermale Fibroblasten
4.4 Bedeutung von Zellkulturstadium und -alter sowie Organ- 45
Systemzugehörigkeit der primären Fibroblasten für
Zellkulturexperimente
4.5 Therapieansätze und Ausblick 49
5. ZUSAMMENFASSUNG 53
6. LITERATURVERZEICHNIS 55
ANHANG 73
DANKSAGUNG 77
CURRICULUM VITAE 78
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