Untersuchungen zur In-vitro-Kultivierung hämatopoetischer Stammzellen zur Schaffung eines artifiziellen Knochenmarks:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Tönning ; Lübeck ; Marburg
<<Der>> Andere Verl.
2008
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1 EINLEITUNG 1 2 GRUNDLAGEN 3 2.1 UEBERSICHT HAEMATOPOETISCHE STAMMZELLEN
(HSC) 3 2.1.1 HAEMATOPOESE 3 2.1.2 CHARAKTERISIERUNG 4 2.1.3
STAMMZELLNISCHE - KNOCHENMARK 5 2.1.4 GEWINNUNG HAEMATOPOETISCHER
STAMMZELLEN 7 2.1.4.1 KNOCHENMARK (BONE MARROW - BM) 8 2.1.4.2
PERIPHERES BLUT (PERIPHERAL BLOOD - PB) 8 2.1.4.3 NABELSCHNURBLUT (CORD
BLOOD - CB) 8 2.2 COLLAGEN 9 2.3 3-D-SCAFFBLD ZUR NACHBILDUNG DER
STAMMZELLNISCHE 10 2.3.1 STRATEGIEN , MOEGLICHKEITEN ZUR SCHAFFUNG VON
3-D-STRUKTUREN 12 2.3.2 BISHERIGE ANSAETZE UND ARBEITEN 13 2.4 BIOREAKTOR
ZUR KULTIVIERUNG VON HSC 15 2.4.1 ZUM BEGRIFF BIOREAKTOR 15 2.4.2
KULTURPARAMETER UND ABHAENGIGKEITEN 16 2.4.2.1 PH-WERT 17 2.4.2.2
SAUERSTOFFPARTIALDRUCK 18 2.4.2.3 TEMPERATUR 19 2.4.2.4 MEDIUM SOWIE
ZUSAETZE 19 2.4.2.5 OSMOLALITAET 20 2.4.2.6 FUETTERUNGSSTRATEGIE 20 2.4.2.7
MATERIALIEN 21 2.4.3 KULTURSYSTEME FUER HAEMATOPOETISCHE ZELLEN 22 2.4.3.1
GERUEHRTE SUSPENSIONS - BIOREAKTOREN (STIRRED REACTORS) 24 2.4.3.2
FESTBETT- UND FLIESSBETTREAKTOREN 24 2.4.3.3 AIRLIFT - REAKTOREN 25
2.4.3.4 HOHLFASERMODULE 25 2.4.3.5 PERFUSIONSKAMMER 26 BIBLIOGRAFISCHE
INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/991846850 DIGITALISIERT DURCH IN GASPHASE
42 VIII 2.4.4 KONDITIONIERUNG DES MEDIUMS UEBER SCHLAUCHMEMBRANEN 27 3
MATERIAL UND METHODEN 28 3.1 VERWENDETE ZELLEN UND DEREN GEWINNUNG 28
3.1.1 HL60 28 3.1.2 M-07E 28 3.1.3 GEWINNUNG UND AUFREINIGUNG VON CD34+
ZELLEN 28 3.2 MEDIUM 29 3.3 ZYTOKINE 30 3.4 REKONSTITUTION VON
FIBRILLAEREM COLLAGEN 1 30 3.5 ANALYTISCHE METHODEN 30 3.5.1 BESTIMMUNG
DER ZELLZAHL 30 3.5.2 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE MESSUNG 31 3.5.3 EL1SA 31
3.5.4 RASTERELEKTRONEMIKROSKOPIE (REM) 31 3.5.5 LICHTMIKROSKPOPIE 32
3.5.6 (KONFOKALE) LASER SCANNING MIKROSKOPIE (CLSM ) 33 3.6
DREIDIMENSIONALES PET-GEWEBE 33 3.6.1 HERSTELLUNG DER PET - GEWEBE 34
3.6.2 VORBEREITUNG DER PROBEN 35 3.6.3 BELADUNG DER PET-GEWEBE MIT
COLLAGEN I FIBRILLEN 35 3.6.4 INKUBATION DER GEWEBE MIT ZELLEN 36 3.6.5
ZELLERNTE UND PROBENNAHME 36 3.6.6 ZYTOKINE IM KONTAKT MIT PET - GEWEBE
37 3.6.6.1 VERSUCHE OHNE ZELLEN 37 3.6.6.2 VERSUCHE MIT M-07E ZELLEN 38
3.6.6.3 VERSUCHE MIT HSC 39 3.7 HSC AUF PET-GEWEBE 40 3.7.1 MASCHENWEITE
UND GEWEBEDICKE 40 3.7.2 LANGZEITVERSUCH 40 3.7.3 WEITERKULTIVIERUNG VON
IM GEWEBE VORINKUBIERTEN ZELLEN 41 3.8 BIOREAKTOR 41 3.8.1 STEUERUNG DER
GASPHASE DES OXYGENATORS 41 3.8.2 CHARAKTERISIERUNG DES MEDIUMS 42
3.8.2.1 PH - PUFFERSYSTEM - CO 2 3.8.2.2 SAUERSTOFFPARTIALDRUCK -O 2 IN
GASPHASE 43 3.8.3 EINFLUSS VON KOMPONENTEN DES SYSTEMS AUF DIE
ZELLPROLIFERATION 43 3.8.3.1 ZYTOTOXIZITAET DER MATERIALIEN 43 3.8.3.2
ELEKTROLYT DES SAUERSTOFFSENSORS 45 3.8.3.3 EINFLUSS DER PERFUSION -
BELASTUNG DER PUMPSCHLAEUCHE 45 3.8.4 INKUBATION VON ZELLEN IM BIOREAKTOR
46 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 48 4.1 PET-GEWEBE 48 4.2 OPTIMIERUNG DER
COLLAGENBELADUNG 48 4.3 ZYTOKINE IM KONTAKT MIT PET-GEWEBE 52 4.3.1 SCF
52 4.3.1.1 UNTERSUCHUNGEN OHNE ZELLEN 52 4.3.1.2 UNTERSUCHUNGEN MIT
M-07E ZELLEN: VERBLEIB SCF 57 4.3.1.3 EXPANSION VON M-07E ZELLEN AUF
VORINKUBIERTEN GEWEBEN 59 4.3.1.4 UNTERSUCHUNGEN MIT HSC 65 4.3.2 FLT-3
70 4.3.3 IL-3 71 4.3.4 ZUSAMMENFASSENDE BETRACHTUNGEN ZUR VERARMUNG VON
ZYTOKINEN 72 4.4 HSC AUF PET-GEWEBE 72 4.4.1 MASCHENWEITE UND
GEWEBEDICKE 72 4.4.2 LANGZEITVERSUCH 74 4.4.3 WEITERKULTIVIERUNG VON IN
GEWEBE VORINKUBIERTEN ZELLEN 76 4.4.4 DISKUSSION UND VERGLEICH MIT
ANDEREN ARBEITEN 78 4.5 BIOREAKTOR 79 4.5.1 BESCHREIBUNG DES KREISLAUFES
- KONSTRUKTION BR UND TECHNISCHE UMSETZUNG. 80 4.5.1.1 KAMMER 81
4.5.1.2 OXYGENATORMODUL 84 4.5.1.3 SENSORBLOECKE 86 4.5.1.4 STEUERUNG UND
MONITORING DER MESSGROESSEN DURCH EINE SOFTWAREOBERFLAECHE. 88 4.5.1.5
KREISLAUF 90 4.5.1.6 MIKROSKOPIEREINHEIT FUER DEN BR 91 4.5.1.7
VERWENDETE MATERIALIEN UND KOMPONENTEN 91 4.5. 4.5.2.2 KOHLENDIOXID 95
4.5.2.3 STICKSTOFF 95 4.5.3 CHARAKTERISIERUNG DES MEDIUMS 97 4.5.3.1
PH-WERT 97 4.5.3.2 SAUERSTOFFPARTIALDRUCK 98 4.5.4 EINFLUSS DES SYSTEMS
AUF DIE PROLIFERATION DER ZELLEN 99 4.5.4.1 ZYTOTOXIZITAET DER
MATERIALIEN 99 4.5.4.2 EINFLUSS DES ELEKTROLYTES DES SAUERSTOFFSENSORS
102 4.5.4.3 EINFLUSS DER PERFUSION - MECHANISCHE BELASTUNG DER
PUMPSCHLAEUCHE 103 4.5.5 INKUBATION VON ZELLEN IM BIOREAKTOR 108 4.5.6
GRENZEN SOWIE KRITISCHE BEWERTUNG DES VORGESTELLTEN BIOREAKTORS 110 5
ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 115 5.1 GEWEBE 115 5.2 BIOREAKTOR 116
LITERATURVERZEICHNIS 119 ABKUERZUNGEN UND SYMBOLE 132 ANHANG 135 |
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