Beeinflussung der MMP-9 - TIMP-1-Interaktion sowie Inhibition ausgewählter MMPs durch Antikörper, Aptamere, MMP-Peptide und Pflanzeninhaltsstoffe:
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| adam_text | Titel: Beeinflussung der MMP-9 - TIMP-1-Interaktion sowie Inhibition ausgewählter MMPs durch Antikörper,
Autor: Weiße, Christina
Jahr: 2008
Inhaltsverzeichnis V
Inhaltsverzeichnis
Bibliografische Beschreibung I
Danksagung II
Abkürzungsverzeichnis III
Inhaltsverzeichnis V
1 Einleitung 1
1.1 Matrix Metalloproteinasen (MMPs) 1
1.1.1 Aufbau von Matrix Metalloproteinasen 1
1.1.2 Gruppen von Matrix Metalloproteinasen 4
1.1.3 Gelatinasen: MMP-2 und MMP-9 5
1.1.4 Aktivierung von Matrix Metalloproteinasen 7
1.1.5 Substrate, Substraterkennung und Funktion von MMPs 9
1.2 Tissue Inhibitor of Matrix Metalloproteinase (TIMP) 10
1.3 Regulation der MMPs und Bedeutung der Wechselwirkung von
MMPs mit TIMPs 12
1.3.1 Regulation der MMPs 12
1.3.2 Interaktion der MMPs mit TIMPs 13
1.3.3 Bedeutung von MMPs und TIMPs sowie deren Interaktion für den
Organismus 15
1.4 Zielstellung dieser Arbeit 17
2 Material und Methoden 19
2.1 Materialien 19
2.1.1 Enzyme/ Inhibitoren/ Substrat 19
2.1.2 Antikörper 20
2.1.3 Peptide 21
2.1.4 Pflanzeninhaltsstoffe 22
2.1.5 Aptamere 22
Inhaltsverzeichnis VI
2.1.6 Chemikalien und Puffer für die MMP-9 Aktivierung und
Aktivitätsmessung 23
2.1.7 Chemikalien, Lösungen und Puffer für die Zymographie 23
2.1.8 Chemikalien und Puffer für Dot-Blot und ELISA 24
2.1.9 Chemikalien und Puffer für Alphascreen 25
2.1.10 Chemikalien und Puffer für Crosslinking 25
2.1.11 Grundchemikalien 25
2.1.12 Technische Geräte 26
2.1.13 Weitere Materialien 27
2.2 Durchführung 28
2.2.1 Bestimmung und Beeinflussung der MMP Aktivität 28
2.2.1.1 Prinzip der Aktivitätsbestimmung bei MMPs 28
2.2.1.2 Allgemeine Aktivitätsbestimmung von Matrix Metalloproteinasen 28
2.2.1.3 Aktivierung von MMP-9 29
2.2.1.4 Inhibition der MMP-9 durch TIMP-1 30
2.2.1.5 Untersuchung des Einflusses von Antikörpern, Peptiden und Aptameren auf die
Interaktion von MMP-9 mit TIMP-1 und die MMP Aktivität 30
2.2.1.6 Einfluss von Pflanzeninhaltsstoffen auf die Aktivität der MMP katalytischen Domänen.. 31
2.2.1.7 Hemmstudien mit ausgewählten MMPs und Flavonoidderivaten 31
2.2.2 Zymographie und Coomassie-Färbung 32
2.2.3 Bindungsstudien per Dot Blot und ELISA 33
2.2.4 Peptid-Mapping und Peptidsynthese 35
2.2.5 Alphascreen 36
2.2.6 Crosslinking von MMP-9 mit MMP-2 Peptid 242 37
3 Ergebnisse und Diskussion 38
3.1 Vorversuche und Festlegung verschiedener Messparameter 38
3.2 Beeinflussung der MMP-9 - TIMP-1 Wechselwirkung 40
3.2.1 Wirkung von Antikörpern auf die MMP-9 - TIMP-1 Interaktion und die
MMP-9 Aktivität 40
3.2.1.1 Einfluss von Sekundärantikörpern oder IgG-Agarose auf die Störung der
MMP-9 - TIMP-1 Wechselwirkung durch den anti-TIMP-1 Antikörper von R D 40
3.2.1.2 Einfluss von anti-MMP-9 Antikörpern auf die MMP-9 Aktivität 43
3.2.1.3 Diskussion 44
Inhaltsverzeichnis VII
3.2.2 Wirkung von Aptameren auf die MMP-9 - TIMP-1 Interaktion 46
3.2.2.1 Einfluss von drei TIMP-1 bindenden Aptameren 46
3.2.2.2 Diskussion 48
3.2.3 Kurze Peptide (MMP-2 MMP-9 Fragmente) und ihre Wirkung auf die
MMP-9-TIMP-1 Interaktion 50
3.2.3.1 Selektion der Peptide 50
3.2.3.2 Einfluss der Peptide im Aktivitätsassay: Neutralisation von TIMP-1? 52
3.2.3.3 Bindungsuntersuchungen der Peptide mit TIMP-1 55
3.2.3.4 Diskussion 60
3.3 Inhibition von ausgewählten Matrix Metalloproteinasen durch
MMP-Peptide und Pflanzeninhaltsstoffe 64
3.3.1 Inhibition von MMPs durch MMP-Peptide 64
3.3.1.1 Aktivitätsassays mit aktiver MMP-9 (Vollenzym) 64
3.3.1.2 Aktivitätsassays mit MMP katalytischen Domänen 67
3.3.1.3 Bindungsstudien für die Peptide mit MMP-9 70
3.3.1.4 Crosslinking 71
3.3.1.5 Diskussion 75
3.3.2 Inhibition von MMPs durch Pflanzeninhaltsstoffe 79
3.3.2.1 Flavonoide und Iso-Flavonoide 79
3.3.2.2 Flavonolignane und Ellagsäure 83
3.3.2.3 Hemmstudien 85
3.3.2.4 Diskussion und Vergleich der experimentellen Ergebnisse mit Dockingstudien 87
4 Zusammenfassung 93
5 Ausblick 96
Literaturverzeichnis 97
Anhang VIII
Erklärung über die eigenständige Abfassung der Arbeit XII
Lebenslauf. XIII
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