Expression von Connexin 37, Connexin 40 und Connexin 43 unter laminarem und turbulentem Shear-Stress:
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2009
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| adam_text | Titel: Expression von Connexin 37, Connexin 40 und Connexin 43 unter laminarem und turbulentem Shear Stress
Autor: Hellmuth, Mathias
Jahr: 2009
Inhaltsverzeichnis:
1. Einleitung 1
2. Material und Methoden 16
2.1. Material 17
2.1.1 Endothelzellpräparation 17
2.1.2. RNA-Analyse 18
2.1.2.1. mRNA Präparation 18
2.1.2.2. Agarosegelelektrophorese 18
2.1.2.3. Reverse Transkription 18
2.1.2.4. PCR für Standardansätze 19
2.1.2.5. Aufreinigen von Nukleinsäuren 19
2.1.2.6. Sequenzierung 19
2.1.2.7. Real-Time PCR 20
2.1.3. Proteinanalyse 20
2.1.3.1. Protein-Präparation 20
2.1.3.2. Lowry Proteinbestimmung 20
2.1.3.3. SDS-PA-Gelelektrophorese 20
2.1.3.4. Western Blot-Analyse 22
2.2. Präparation und Bearbeitung von Endothelzellen 23
2.2.1. Präparation von Endothelzellen aus Nabelschnüren 23
2.2.2. Applikation laminarer und turbulenter Schubspannung 24
2.3. mRNA Analyse 27
2.3.1. RNA Präparation aus Endothelzellen 27
2.3.2. Reverse Transkription 29
2.3.3. Polymerasekettenreaktion 30
2.3.4. Aufreinigung der PCR Produkte 32
2.3.5. Agarosegelelektrophorese 33
2.3.6. Sequenzierung 33
2.3.7. Real-Time quantitative PCR 35
2.4. Proteinanalyse 38
2.4.1. Isolation von Proteinen aus HUVEC 38
2.4.2. Proteinbestimmung nach Lowry 39
2.4.3. SDS-PA-Gelelektrophorese 39
2.4.4. Western Blot 41
2.4.5. Antikörperfärbung 42
2.5. Statistische Datenanalyse 44
3. Ergebnisse 45
3.1. Morphologie kultivierter Endothelzellen vor und nach applizierter
Schubspannung 45
3.2. Ergebnisse Cx 37 47
3.2.1. Cx 37 Proteinexpression 47
3.2.2. Cx 37 mRNA Expression 52
3.3. Ergebnisse Cx 40 56
3.3.1. Cx 40 Proteinexpression 56
3.3.2. Cx 40 mRNA Expression 61
3.4. Ergebnisse Cx 43 65
3.4.1. Cx 43 Proteinexpression 65
3.4.2. Cx 43 mRNA Expression 78
4. Diskussion 82
4.1. Morphologische Veränderungen von HUVEC 82
4.2. Regulation und Expression von Cx 37, Cx 40 und Cx 43
unter laminaren und turbulenten Strömungsverhältnissen 84
4.3. Schlussfolgerungen 90
5. Literaturverzeichnis 93
6. Danksagung 106
7. Selbständigkeitserklärung 107
8. Lebenslauf. 108
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