Identifizierung und Charakterisierung der Proteintranslokase der mitochondrialen Außenmembran aus Bos taurus L.:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Verl. Dr. Hut
2009
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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| Beschreibung: | 209 S. Ill., graph. Darst. 210 mm x 148 mm, 321 gr. |
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS 1 1. ABKUERZUNGEN 9 2.
ZUSAMMENFASSUNG 13 ABSTRACT 15 3. EINLEITUNG 17 3.1. MITOCHONDNEN UND
IHR URSPRUNG 17 3.2. PROTEINTRANSLOKATION 19 3.3. DERTOM-KOMPLEX 25 3.4.
DER TOM-KOMPLEX HOEHERER EUKARYOTEN 30 3.5. ZIELE DER VORLIEGENDEN ARBEIT
31 4. MATERIAL UND METHODEN 33 4.1. AUSSTATTUNG 33 4.1.1. CHEMIKALIEN 33
4.1.2. GERAETE 33 4.1.3. BIOINFORMATISCHE TOOLS 34 4.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 35 4.2.1. STAEMME UND PLASMIDE 35 4.2.2.
PUFFER UND LOESUNGEN 38 4.2.3. SPEKTROSKOPISCHE BESTIMMUNG DER
DNA-KONZENTRATION... 42 4.2.4. ISOLATION VON GESAMT-RNA AUS GEWEBE 43
TRIZOL-METHODE 43 RNA-ISOLATION MITTELS CSCL-KISSEN 43 4.2.5.
AUFTRENNUNG VON RNA MITTELS AGAROSE- GELELEKTROPHORESE 45 RNA-GEL OHNE
FORMALDEHYD 45 RNA-GEL MIT FORMALDEHYD 45 4.2.6. REVERSE TRANSKRIPTION
46 4.2.7. POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 46 4.2.8. RESTRIKTIONSVERDAU
VON PLASMIDEN 48 ANALYTISCHER RESTRIKTIONSVERDAU 48 PRAEPARATIVER
RESTRIKTIONSVERDAU 48 4.2.9. UMPUFFERN VON DNA-PROBEN 49 4.2.10.
AUFTRENNUNG VON DNA-FRAGMENTEN MITTELS AGAROSE- GELELEKTROPHORESE 49
ANALYTISCHES GEL 49 PRAEPARATIVES GEL 50 4.2.11. REINIGUNG VON
DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN 50 4.2.12. REINIGUNG VON DNA MITTELS
PHENOL-CHLOROFORM- EXTRAKTION 51 4.2.13 BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/993731295 DIGITALISIERT DURCH INHALTSVERZEICHNIS
LIGATION VON GLATTEN ENDEN (BLUNT ENDS) 52 LIGATION VON UEBERHAENGENDEN
ENDEN (STICKY ENDS) 52 LIGATION BEI DER TA-KLONIERUNG 52 4.2.16.
HERSTELLUNG CHEMISCH KOMPETENTER ZELLEN 53 4.2.17. TRANSFORMATION
CHEMISCH KOMPETENTER ZELLEN 54 4.2.18. ISOLATION VON PLASMID-DNA 54
ALKALISCHE LYSE 54 PLASMIDISOLATION (MINI-PRAEP) MITTELS DES PEQLAB-KITS
55 PLASMIDISOLATION (MIDI-PRAEP) MITTELS DES QIAGEN-KITS 56 4.2.19.
DNA-SEQUENZIERUNG. 56 4.3. BIOCHEMISCHE METHODEN 57 4.3.1. MEDIEN,
PUFFER UND LOESUNGEN 57 4.3.2. ZELLKULTUR VON E. COLI 58 UEBEMACHTKULTUREN
58 BAKTERIENKULTUREN ZUM TEST AUF REKOMBINANTE EXPRESSION 58
BAKTERIENKULTUREN ZUR PRODUKTION VON REKOMBINANTEM PROTEIN 59
GLYCERIN-KULTUREN 59 4.3.3. BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 59
BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION NACH BRADFORD 59 BESTIMMUNG DER
PROTEINKONZENTRATION NACH LOWRY 60 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION
UEBER DIE ABSORPTION BEI 280 NM 61 4.3.4. KONZENTRIERUNG VON
PROTEINPROBEN 62 TCA-FAEUUNG 62 METHANOL-FAELLUNG 62 ETHANOL-FAELLUNG 62
4.3.5. POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (PAGE) 62
NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 65
TRICIN-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (TRICIN-PAGE) 67 BLAUE
NATIV-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (BN-PAGE). 68
2D-POLYACRYLAMIDGELELKTROPHORES 5 INHALTSVERZEICHNIS 4.3.11. ISOLATION
VON MITOCHONDRIALEN AUSSENMEMBRAN-VESIKELN (OMVS) AUS RINDERGEWEBE 78
4.3.12. IMMUNPRAE2IPITATION 79 IMMUNPRAEZIPITATION OHNE IMMOBILISIERUNG
DER ANTIKOERPER 80 IMMUNPRAEZIPITATION MIT IMMOBILISIERUNG DER
ANTIKOERPER.. 81 4.3.13. PROTEOLYTISCHER VERDAU VON MITOCHONDRIEN UND
LIPIDVESIKELN 82 PROTEINASE K-VERDAU 82 TRYPSIN- UND PEPSIN-VERDAU. 82
4.3.14. ISOLATION VON REKOMBINANTEN TOM-PROTEINEN AUS E. COLI FUER DIE
ANTIKOERPER-HERSTELLUNG 83 REINIGUNGSPROTOKOLL FUER GST-FUSIONSPROTEINE 83
REINIGUNGSPROTOKOLL FUER HIS 6 -PROTEINE 84 4.3.15. ISOLATION VON
EINSCHLUSSKOERPERCHEN AUS E. COLI 84 4.3.16. REINIGUNG VON
HEXAHISTIDINYL-MARKIERTEM TOM40A UND TOM40B AUS EINSCHLUSSKOERPERCHEN 86
4.3.17. RUECKFALTUNG VON TOM40A UND TOM40B IN DETERGENZIEN.. 87 4.3.18.
REKONSTITUTION VON TOM40A UND TOM40B IN LIPIDVESIKEL 88 RUECKFALTUNG IN
LIPIDVESIKEL UNTER VERWENDUNG VON POLYSTYROL-KUEGELCHEN 89 REKONSTITUTION
DURCH DIREKTE RUECKFALTUNG IN LIPIDVESIKEL.. 90 4.3.19. MESSUNG VON
ZIRKULARDICHROISMUS (CD)-SPEKTREN VON ZURUECKGEFALTETEM TOM40A UND TOM40B
90 4.3.20. ELEKTROPHYSIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON TOM40A UND TOM40B
92 5. ERGEBNISSE 95 5.1. IDENTIFIZIERUNG UND EXPRESSION DER
TOM-KOMPONENTEN AUS RIND.. 95 5.1.1. IDENTIFIZIERUNG UND KLONIERUNG DER
TOM-KOMPONENTEN.. 95 TOM INHALTSVERZEICHNIS 6 REINIGUNG DER
TOM-UNTEREINHEITEN FUER DIE ANTIKOERPER- HERSTELLUNG 115 5.2. METHODISCHE
UNTERSUCHUNGEN ZUR ISOLIERUNG VON MITOCHONDRIALEN AUSSENMEMBRANEN UND
TOM-KOMPLEX AUS RINDERGEWEBE 117 5.2.1. ISOLATION VON MITOCHONDRIEN AUS
RINDERGEWEBE 117 5.2.2. ISOLATION VON AUSSENMEMBRANEN AUS MITOCHONDRIEN
119 5.2.3. ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES TOM-KOMPLEXES... 120
NACHWEIS DER TOM-UNTEREINHEITEN MITTELS WESTERN BLOT 121 ZUSAMMENSETZUNG
DES TOM-KOMPLEXES 121 MOLEKULARGEWICHT DES TOM-KOMPLEXES 123 STABILITAET
DES TOM-KOMPLEXES IN VERSCHIEDENEN DETERGENZIEN 124 5.3.
CHARAKTERISIERUNG DER UNTEREINHEITEN TOM40A UND TOM40B 126 5.3.1.
PRAEPARATION VON TOM40A UND TOM40B AUS E. COLI 128 5.3.2. RUECKFALTUNG VON
TOM40 IN DETERGENS 129 5.3.3. RUECKFALTUNG VON TOM40 IN IIPIDE 139 5.3.4.
CHARAKTERISIERUNG VON TOM40 144 6. DISKUSSION 151 6.1. DER TOM-KOMPLEX
IM RIND 152 6.2. CHARAKTERISIERUNG VON TOM40A UND TOM40B ALS ZENTRALE
KOMPONENTEN DES TOM-KOMPLEXES 159 HETEROLOGE EXPRESSION UND REINIGUNG
159 RUECKFALTUNG IN DETERGENS 160 CD-SPEKTROSKOPIE VON IN DETERGENS
ZURUECKGEFALTETEM PROTEIN 161 RUECKFALTUNG IN LIPIDVESIKEL 162
ZURUECKGEFALTETE TOM40-PROTEINE LIEGEN IN EINEM OLIGOMEREN ZUSTAND VOR
163 ZURUECKGEFALTETE TOM40-PROTEINE BILDEN KANAELE AUS 164 HANDELT ES SICH
BEI TOM40 UM EIN SS-BARREL-PTOTEKI? 16 7 INHALTSVERZEICHNIS VEKTORKARTEN
FUER RINDER-TOM22 201 VEKTORKARTEN FUER RINDER-TOM40A 202 VEKTORKARTEN FUER
RINDER-TOM40B 204 VEKTORKARTEN FUER RINDER-TOM70 205 9. DANK 207 10.
LEBENSLAUF 209 PERSOENLICHE DATEN 209 SCHULISCHE AUSBILDUNG 209 STUDIUM
209 PROMOTION 209
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