Untersuchung der Suizidrate HIV-positiver Menschen in England und Wales sowie der Suizidrate an AIDS erkrankter Menschen in den USA seit der Einführung der hochaktiven antiretroviralen Therapie (HAART):
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| adam_text | Titel: Untersuchung der Suizidrate HIV positiver Menschen in England und Wales sowie der Suizidrate an AIDS
Autor: Zillhardt, Anna Henrike
Jahr: 2008
Inhaltsverzeichnis
1 EINLEITUNG 1
1.1 Ziel und Hintergrund der Arbeit 2
1.2 Herzinsuffizienz 3
1.2.1 Definitionen und Ursachen der Herzinsuffizienz 3
1.2.2 Pathophysiologische Veränderungen bei Herz-insuffizienz 3
1.3 Die Natrium-Kalium-ATPase 5
1.3.1 Funktion 5
1.3.2 Struktur der Na+-K+-ATPase 7
1.3.3 Regulation der Na+-K+-ATPase 11
1.3.4 Die kardiale Na+-K+-ATPase am gesunden und insuffizienten menschlichen
Herzen 11
1.3.5 Isoformen der Na+-K+-ATPase 12
1.3.6 Kardiale Isoformen der Na+-K+-ATPase am gesunden und insuffizienten
menschlichen Herzen 14
1.3.7 Struktur der a-und ß-lsoformen 16
1.3.8 Regulation der Na*-K+-ATPase Isoformen 17
1.3.9 Enzymaktivität der Na+-K+-ATPase Isoformen 17
1.3.10 Ouabain-Affinitäten der Isoformen 18
1.4 Herzglykoside 19
1.4.1 Allgemeines 19
1.4.2 Geschichte 19
1.4.3 Substanzen 20
1.4.4 Strukturformeln 20
1.4.5 Wirkmechanismen 23
1.4.6 Struktur-Wirkungs-Beziehungen der verschiedenen Herzglykoside 25
TAB. 1: PHARMAKOKINETISCHE EIGENSCHAFTEN DER HERZGLYKOSIDE. 26
2 MATERIAL UND METHODEN 27
2.1 Materialien 28
2.1.1 Untersuchungsmaterial 28
2.1.1.1 Humanes Gewebe 28
2.1.1.2 Rattengewebe 28
2.1.1.3 Hefezellkulturen 28
2.1.1.4 Expressionsplasmide 29
2.1.2 Verwendete Substanzen und Lösungen 29
2.1.2.1 Substanzen für die Hefezellexperimente 29
2.1.2.2 Substanzen für die Radioligandenbindungsexperimente 29
2.1.2.3 Substanzen für die Nä1-K -ATPase-Enzymaktivitäts-untersuchungen.... 30
2.1.2.4 Substanzen für die Membranfraktionierung 3°
2.1.2.5 Substanzen für die Proteinbestimmung nach Bradford für die SDS-
Gelelektrophorese und die Immunoblots 30
2.1.2.6 Substanzen für die Gewinnung von humanen Einzelzellen 31
2.1.2.7 Lösungen für Membranpräparation der Hefezellen 32
2.1.2.8 Lösungen für die Radioligandenbindungsexperimente 32
2.1.2.9 Lösungen für die Na*-fC-ATPase-Enzymaktivitäts-unter-suchungen 32
2.1.2.10 Lösungen für die Membranfraktionierung 33
2.1.2.11 Lösungen für die Gewinnung von humanen Einzelzellen 33
2.2 Methoden 33
2.2.1 Untersuchungen an heterolog in Hefezellen exprimierten Na+-K+-ATPase
Isoformen 33
2.2.1.1 Herstellung der Expressionsplasmide 33
2.2.1.2 Transfektion von Saccharomyces cerevisiae 30-4 35
2.2.1.3 Membranpräparation 36
2.2.1.4 SDS-Extraktion 37
2.2.1.5 Radioligandenbindungsexperimente 37
2.2.1.6 Na+-IC-ATPase-Enzymaktivitätsuntersuchungen 38
2.2.2 Untersuchungen zur subzellularen Lokalisation der Isoformen der Na+-K -
ATPase 38
2.2.2.1 Membranpräparation 38
2.2.2.2 Membranfraktionierung durch Dichtegradientenzentrifugation 39
2.2.2.3 Proteinbestimmung 40
2.2.2.4 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) 41
2.2.2.5 Western Blot 41
2.2.3 Immunhistochemische Untersuchungen 4^
2.2.3.1 Einzelzeltpräparation der Kardiomyozyten 42
2.2.3.2 Immunhistochemische Aufarbeitung 42
2.2.4 Statistische Auswertung 43
3 ERGEBNISSE ^
3.1 Affinitätsuntersuchungen von klinisch eingesetzten Herzglykosiden zur
Na+-K+-ATPase 45
II
3.1.1 Herstellung der Expressionsplasmide 45
3.1.1.1 Darstellung der Expressionsplasmide 45
3.1.1.2 Maxiprep 47
3.1.2 Überprüfung der Expression mittels Western Blot 47
3.1.3 Radioligandenbindungsexperimente 48
3.1.3.1 Isoformspezifität der Herzglykoside 51
3.1.3.2 Vergleich der Herzglykosiden untereinander 55
3.1.4 Na+-K+-ATPase-Aktivitätsuntersuchungen an Hefezellen und humanem
Nierengewebe 59
3.2 Untersuchungen zur subzellularen Lokalisation der Isoformen der Na*-K*-
ATPase 61
3.2.1 Immunhistochemie 61
3.2.2 Dichtegratientenzentrifugation mit humanem Myokardgewebe 63
3.2.3 Dichtegratientenzentrifugation mit Rattenmyokardgewebe 64
4 DISKUSSION 65
4.1 Affinitäten der Herzglykoside zur Na*-K*-ATPase 66
4.1.1 Hefezellexpression zur Charakterisierung der Na+-K+-ATPase-lsoformen 66
4.1.2 Isoformspezifische Affinitäten der Herzglykoside zu den cxißi, ot2ßi und o^ß,
Isoformen 66
4.1.3 Herzglykoside unterscheiden sich pharmako-dynamisch 68
4.1.4 Bedeutung der Ergebnisse für den klinischen Einsatz von Herzglykosiden68
4.2 Die Isoformen der Na*-K+-ATPase unterscheiden sich in ihrer
subzellularen Lokalisation 71
4.3 Überlegungen zur zukünftigen Rolle der Na+-K+-ATPase bei der
Herzinsuffizienztherapie 73
5 ZUSAMMENFASSUNG 74
6 LITERATURVERZEICHNIS 77
7 VORABVERÖFFENTLICHUNGEN 87
8 ANHANG 89
9 LEBENSLAUF 91
III
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