Untersuchungen zur posttranslationalen Modifikation von Voltage-Dependent Anion Channels (VDACs) in bovinen Spermatozoen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
DVG Service
2007
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| adam_text | AUS DER KLINIK FUER GEBURTSHILFE, GYNAEKOLOGIE UND ANDROLOGIE DER GROSS-
UND KLEINTIERE MIT TIERAERZTLICHER AMBULANZ DER JUSTUS-LIEBIG-UNIVERSITAET
GIESSEN BETREUER: PROF. DR. G. SCHULER UND AUS DEM ZENTRUM FUER
DERMATOLOGIE UND ANDROLOGIE DER JUSTUS-LIEBIG-UNIVERSITAET GIESSEN
BETREUERIN: PROF. DR. E. HINSCH UNTERSUCHUNGEN ZUR POSTTRANSLATIONALEN
MODIFIKATION VON VOLTAGE-DEPENDENT ANION CHANNELS (VDACS) IN BOVINEN
SPERMATOZOEN INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINES DR.
MED. VET. BEIM FACHBEREICH VETERINAERMEDIZIN DER
JUSTUS-LIEBIG-UNIVERSITAET GIESSEN EINGEREICHT VON YVONNE KRAUSE GEB.
WAGNER TIERAERZTIN AUS WISSEN A. D. SIEG GIESSEN 2007 INHALT EINLEITUNG 8
1.1 DAS SPERMATOZOON 8 1.1.1 SPERMATOGENESE UND SPERMIOGENESE 8 1.1.2
MORPHOLOGISCHER AUFBAU DES SPERMATOZOONS 9 1.1.3 EPIDIDYMALE
SPERMATOZOENREIFUNG 11 1.2 PHYSIOLOGIE DER FERTILISATION 13 1.2.1
KAPAZITATION 13 1.2.2 AKROSOMALE REAKTION 14 1.2.3 DIE FUSION VON
SPERMATOZOON UND OOZYTE 15 1.3 DIE BEDEUTUNG VON POSTTRANSLATIONALEN
PROTEINMODIFIKATIONEN 17 1.4 DIE BEDEUTUNG DER VOLTAGE-DEPENDENT ANION
CHANNELS (VDACS) 18 1.4.1 VORKOMMEN UND FUNKTIONEN VON VDACS 18 1.4.2
VDACS IN SPERMATOZOEN 21^ 1.4.3 REGULATION VON VDACS 22 1.5 ZIELSETZUNG
DER ARBEIT 23 MATERIALIEN 24 2.1 CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN
24 2.2 EINGESETZTE ANTIKOERPER 27 2.3 MEDIEN UND LOESUNGEN ^ 28 2.4
VERWENDETE KITS 30 2.5 GERAETE 31 METHODEN 32 3.1 GEWINNUNG DES
UNTERSUCHUNGSMATERIALS 32 3.1.1 EPIDIDYMALE SPERMATOZOEN 32 3.1.2
EJAKULIERTE SPERMATOZOEN 33 3.2 GEWINNUNG UND IMMUNBIOCHEMISCHER
NACHWEIS VON VDAC PROTEINEN 34 3.2.1 EXTRAKTION BOVINER
SPERMATOZOENPROTEINE 34 3.2.2 REINIGUNG DER VDAC SUBTYPEN AUS
PROTEINEXTRAKTEN BOVINER SPERMATOZOEN 37 3.2.3 PROTEINPRAEZIPITATION 38
3.2.4 PROTEINBESTIMMUNG 39 3.2.5 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE 39
3.2.6 WESTERN BLOT 40 3.2.7 IMMUNBIOCHEMISCHE IDENTIFIZIERUNG VON VDAC
SUBTYPEN DURCH DAS CHEMILUMINESZENZVERFAHREN 40 3.2.8
MASSENSPEKTROMETRISCHE ANALYSE DER GEREINIGTEN VDAC PROTEINE 41 3.2.9
INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ ZUM NACHWEIS VON VDAC SUBTYPEN IN BOVINEN
SPERMATOZOEN 42 3.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR PROTEINPHOSPHORYLIERUNG IN
BOVINEN SPERMATOZOEN WAEHREND DER NEBENHODENPASSAGE 42 3.3.1
IMMUNBIOCHEMISCHE IDENTIFIZIERUNG PHOSPHORYLIERTER SPERMATOZOEN-
PROTEINE 42 3.3.2 IMMUNZYTOCHEMISCHE IDENTIFIZIERUNG PHOSPHORYLIERTER
SPERMATOZOEN- PROTEINE MIT HILFE DER INDIREKTEN IMMUNFLUORESZENZ 43
3.3.3 ANFAERBUNG VON PHOSPHOPROTEINEN IN POLYACRYLAMIDGELEN 43 3.3.4
AFFINITAETSCHROMATOGRAFISCHE TRENNUNG PHOSPHORYLIERTER UND NICHT
PHOSPHORYLIERTER PROTEINE 44 ERGEBNISSE 46 4.1 NACHWEIS DER VDAC
SUBTYPEN IN EPIDIDYMALEN UND EJAKULIERTEN SPERMATOZOEN 46 4.1.1
EXTRAKTION UND ANREICHERUNG DER VDAC SUBTYPEN 46 4.1.2 IMMUNOBLOT MIT
BOVINEN SPERMATOZOENPROTEINEN 50 4.1.3 MASSENSPEKTROMETRISCHE ANALYSE
DER GEREINIGTEN PROTEINEXTRAKTE 55 4.1.4 IMMUNFLUORESZENZOPTISCHER
NACHWEIS VON VDAC IN BOVINEN SPERMATOZOEN 57 4.2 PROTEINPHOSPHORYLIERUNG
IN BOVINEN SPERMATOZOEN WAEHREND DER NEBENHODEHPASSAGE UND IN
EJAKULIERTEN SPERMATOZOEN 61 4.2.1 IMMUNBIOCHEMISCHER NACHWEIS
PHOSPHORYLIERTER PROTEINE IN BOVINEN SPERMATOZOEN 61 4.2.2
IMMUNZYTOCHEMISCHER NACHWEIS PHOSPHORYLIERTER PROTEINE IN BOVINEN
SPERMATOZOEN 66 4.2.3 AFFINITAETSCHROMATOGRAFISCHE TRENNUNG
PHOSPHORYLIERTER UND NICHT PHOSPHORYLIERTER SPERMATOZOENPROTEINE 70 4.3
NACHWEIS VON PHOSPHORYLIERTEN VDAC PROTEINEN IN H/C GEREINIGTEN BOVINEN
5 6 7 8 9 SPERMATOZOENEXTRAKTEN 4.3.1 PHOSPHOPROTEINSPEZIFISCHE FAERBUNG
DER H/C GEREINIGTEN VDAC PROTEINE 4.3.2 IMMUNBIOCHEMISCHER NACHWEIS VON
PHOSPHORYLIERTEN VDAC PROTEINEN DISKUSSION 5.1 NACHWEIS UND LOKALISATION
DER VDAC SUBTYPEN IN EPIDIDYMALEN UND EJAKULIERTEN SPERMATOZOEN 5.2
PHOSPHORYLIERUNG BOVINER SPERMATOZOENPROTEINE WAEHREND DER
NEBENHODENPASSAGE 5.3 PHOSPHORYLIERUNG DER VDAC PROTEINE 5.4
ABSCHLIESSENDE BETRACHTUNG ZUSAMMENFASSUNG SUMMARY LITERATUR - ANHANG 9.1
DANKSAGUNG 9.2 VEROEFFENTLICHUNGEN IM RAHMEN DER DOKTORARBEIT 78 78 80 83
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