Die TGF-beta vermittelte Suppression der antigenspezifischen Immunantwort kann durch CD28 Kostimulation überwunden werden:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Dr. Hut Verlag
2008
|
| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Pharmazeutische Biologie
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | VII, 124 S. graph. Darst. 210 mm x 148 mm, 195 gr. |
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| adam_text | I INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 1.1 DER TUMOR STEHT IN
WECHSELWIRKUNG MIT DER IMMUNANTWORT 1 1.1.1 TUMOR ASSOZIIERTE ANTIGENE 1
1.1.2 DAS KARZINOEMBRYONALE ANTIGEN (CEA) ALS MODELL-TAA 2 1.1.3 ,,TUMOR
ESCAPE : TUMOREN ENTGEHEN DER ERKENNUNG DURCH DAS IMMUNSYSTEM 3 1.2 DIE
TUMORUMGEBUNG IST IMMUNOLOGISCH AKTIV 5 1.2.1 IMMUNFORDERNDE UND
IMMUNSUPPRIMIERENDE ZELLEN IN DER TUMORUMGEBUNG 5 1.2.2 TRANSFORMING
GROWTH FACTOR-P (TGF-P ) UND INTERLEUKIN-10 (IL-10) SIND AN DER
SUPPRESSION BETEILIGT 7 1.3 DER IMMUNREZEPTORANSATZ IN DER TUMORTHERAPIE
10 1.3.1 ENTWICKLUNG DERADOPTIVEN IMMUNTHERAPIE 10 1.3.2 REKOMBINANTE
IMMUNREZEPTOREN: STRATEGIE, AUFBAU UND T-ZELL AKTIVIERUNG 12 1.4
ZIELSETZUNG 17 2 MATERIAL UND METHODEN 18 2.1 MATERIAL 18 2.1.1
STAMMLOSUNGEN UND PUFFER 18 2.1.2 LOSUNGEN UND PUFFER FUR DIE
GELELEKTROPHORESE 18 2.1.3 GROBENRNARKER FUR DIE GELELEKTROPHORESE 18
2.1.4 PUFFER UND SAULEN FUR DEN AUTOMACS* 19 2.1.5 PUFFER FUR DEN
FACSCANTO* ODER FACSCALIBUR* 19 2.1.6 MEDIEN FUR BAKTERIENKULTUREN UND
ZUSATZE 19 2.1.7 BAKTERIENSTAMM 19 2.1.8 ZELLLINIEN UND PRIMARE LINIEN
20 2.1.9 MEDIEN FUR DIE ZELLKULTUR SOWIE ZUSATZE 21 2.1.10 ANTIKORPER 22
2.1.10.1 PRIMARANTIKORPER 22 2.1.10.2 KONJUGIERTE SEKUNDARANTIKORPER 23
2.1.10.3 ANTIKORPER FUR MACS SEPARATIONEN 25 BIBLIOGRAFISCHE
INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/992163080 DIGITALISIERT DURCH
INHALTSVERZEICHNIS 2.1.11 PROTEINE UND REAGENZIEN 25 2.1.12
RESTRIKTIONSENZYME UND RESTRIKTIONSPUFFER 26 2.1.13 VEKTOREN 26 2.2
METHODEN 29 2.2.1 BAKTERIENKULTUR 29 2.2.1.1 ANZUCHT UND LAGERUNG VON
E.COLI DH5A BAKTERIEN 29 2.2.1.2 HERSTELLUNG CHEMOKOMPETENTER BAKTERIEN
29 2.2.1.3 TRANSFORMATION CHEMOKOMPETENTER E.COLI BAKTERIEN 30 2.2.2
PREPARATION VON PLASMID-DNA 30 2.2.2.1 MIDI-PREPARATION VON PLASMID-DNA
DURCH BINDUNG AN ERNE ANIONENAUSTAUSCHER-SAULE 30 2.2.2.2
MINI-PREPARATION VON PLASMID-DNA DURCH BINDUNG AN EINE
SILIKAMEMBRAN-SAULE 31 2.2.3 KONZENTRATIONSBESTIMMUNGEN VON
NUKLEINSAUREN 32 2.2.3.1 PHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG 32 2.2.3.2
MENGENABSCHATZUNG FIBER AGAROSEGEL IM VERGLEICH ZU MARKEM 32 2.2.4
NATIVE AGAROSE GELELEKTROPHORESE 33 2.2.5 ZELLKULTUR 33 2.2.5.1
KULTURBEDINGUNGEN 33 2.2.5.2 ADHARENTE ZELLEN 33 2.2.5.3
SUSPENSIONSZELLEN 34 2.2.5.4 KRYOKONSERVIERUNG VON ZELLEN 34 2.2.5.5
PREPARATION HUMANER PERIPHERER BLUTLYMPHOZYTEN (PBL) AUS
,,BUFFYCOAT -BLUTKONSERVEN MITTELS DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION.. 34
2.2.5.6 SEPARATION HUMANER T-ZELLEN MIT DER AUTOMACS TECHNIK 35 2.2.6
RETROVIRALER GENTRANSFER 36 2.2.6.1 AKTIVIERUNG HUMANER T-ZELLEN FUR DEN
RETROVIRALEN GENTRANSFER 36 2.2.6.2 KO-TRANSFEKTION VON 293T ZELLEN 36
2.2.6.3 RETROVIRALE TRANSDUKTION HUMANER T-ZELLEN 38 2.2.
INHALTSVERZEICHNIS 2.2.10 PROLIFERATIONSTESTS 42 2.2.10.1
CFSE-MARKIERUNG VON T-ZELLEN UND BESTIMMUNG DER PROLIFERATION. 42
2.2.10.2 BESTIMMUNG DER T-ZELL PROLIFERATION DURCH EINBAU VON BRDU 43
2.2.11 IMMUNFLUORESZENZ (FACS) ANALYSEN 44 2.2.11.1 DETEKTION
REKOMBINANTER REZEPTOREN AUF DER OBERFLACHE HUMANER T-ZELLEN 44 2.2.11.2
FACS ANALYSE CFSE MARKIERTER ZELLEN 44 2.2.11.3 INTRAZELLULARE FACS
ANALYSE ZUM NACHWEIS VON GRANZYM A, GRANZYM B UND PERFORM IN T-ZELLEN 45
2.2.12 ZYTOKINARRAY 45 ERGEBNISSE 47 3.1 REZEPTORVERMITTELTE AKTIVIERUNG
HUMANER CD4 + UND CD8 + T-ZELLEN... 47 3.1.1 GENERIERUNG VON T-ZELLEN
MIT REZEPTOR BW431/26SCFV-FC-CD3 (#439) 47 3.1.2 DIE IMMUNREZEPTOR
VERMITTELTE T-ZELL AKTIVIERUNG RESULTIERT IN ZYTOLYTISCHER AKTIVITAT,
WN-Y SEKRETION UND PROLIFERATION REZEPTOR TRANSDUZIERTER T-ZELLEN 47
3.1.2.1 ZYTOLYSE 48 3.1.2.2 IFN-Y SEKRETION 50 3.1.2.3 PROLIFERATION 51
3.2 IL-2, IL-10 UND TGF-P WIRKEN VERSCHIEDEN AUF DIE REZEPTORVERMITTELTE
AKTIVIERUNG HUMANER CD4 + UND CD8 + T-ZELLEN 53 3.2.1 DIE
REZEPTORVERMITTELTE IFN-Y SEKRETION WIRD DURCH IL-2 VERSTARKT, ABER
DURCH IL-10 UND TGF-P NICHT BEEINFLUSST 53 3.2.2 DIE ZYTOLYTISCHE
AKTIVITAT REZEPTORTRAGENDER T-ZELLEN WIRD DURCH IL-10 UND TGF-P NICHT
VERANDERT 55 3.2. INHALTSVERZEICHNIS 3.2.5.1 DIE EXPRESSION VON GRANZYM
A UND B NIMMT IM VERLAUF DER T-ZELL AKTIVIERUNG AB 64 3.3 CD28
KOSTIMULATION BEEINFLUSST DIE TGF-P VERMITTELTE SUPPRESSION
REZEPTORAKTIVIERTER T-ZELLEN 66 3.3.1 CD28-CD3 KOSTIMULATION WIRKT DER
TGF-P VERMITTELTEN HEMMUNG DER PROLIFERATION REZEPTORTRAGENDER T-ZELLEN
ENTGEGEN 66 3.3.2 B7-CD28 KOSTIMULATION VERANDERT DIE ZYTOLYTISCHE
AKTIVITAT REZEPTORTRAGENDER CD8 + T-ZELLEN NICHT 69 3.3.3 CD28
KOSTIMULATION FIIHRT ZU ERHOHTER EXPRESSION ZYTOTOXISCHER
EFFEKTORMOLEKULE 70 3.4 IDENTIFIZIERUNG DER CD28 DOMANE, DIE DER TGF-P
VERMITTELTEN HEMMUNG ENTGEGENWIRKT 75 3.4.1 DAS LCK BINDEMOTIV DER CD28
SIGNALDOMANE IST ESSENTIELL FUR DIE RESISTENZ GEGENUBER DER TGF-P
VERMITTELTEN HEMMUNG DER T-ZELL PROLIFERATION 76 3.4.2 DAS LCK
BINDEMOTIV INNERHALB DER CD28 SIGNALDOMANE IST FUR DIE IL-2 PRODUKTION
REZEPTORTRAGENDER T-ZELLEN NOTWENDIG 78 3.4.3 IL-2 REVERTIERT DIE TGF-P
VERMITTELTE HEMMUNG DER PROLIFERATION 78 3.5 EINFLUSS WEITERER ZYTOKINE
AUF DIE REZEPTORSPEZIFISCHE T-ZELL AKTIVIERUNG UND DIE TGF-P VERMITTELTE
INHIBITION 81 3.5.1 IL-15 WIRKT DER TGF-P VERMITTELTEN HEMMUNG DER
PROLIFERATION REZEPTORTRAGENDER T-ZELLEN ENTGEGEN 81 3.5.2 IL-4, IL-10,
TNF-A, UND IFN-Y VERANDERN DIE REZEPTORABHANGIGE T-ZELL PROLIFERATION
NICHT 82 3.5.3 DIE REZEPTORVERMITTELTE ZYTOLYTISCHE AKTIVITAT VON CD8*
T-ZELLEN WIRD DURCH IL-12 UND IL-15 GESTEIGERT 83 3.5.
INHALTSVERZEICHNIS 3.6.2 KOSTIMULATION RESULTIERT IN VERSTARKTER
REZEPTORVERMITTELTER PROLIFERATION VON CD4 + UND CD8 + T-ZELLEN 93 3.6.3
DIE REZEPTORABHANGIGE IFN-Y SEKRETION WIRD DURCH EINFUGEN EINER
KOSTIMULATORISCHEN SIGNALDOMANE VERSTARKT 95 3.7 LS174T TUMORZELLEN
EXPRIMIEREN NACH TRANSIENTER TRANSFEKTION TGF-P 97 4 DISKUSSION 98 5
ZUSAMMENFASSUNG 113 6 ANHANG 114 7 LITERATURVERZEICHNIS 116 DANKSAGUNG
ERKLARUNG LEBENSLAUF
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