Molekularpathologische Untersuchungen bei Tumoren der Papilla Vateri: immunhistochemische Subtypisierung, Aneuploidie und Mikrosatelliteninstabilität
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2008
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| adam_text | Titel: Molekularpathologische Untersuchungen bei Tumoren der Papilla Vateri
Autor: Gründobler, Bärbel
Jahr: 2008
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis:
1. EINLEITUNG . . . 5
1.1. Anatomie der Papilla Voten 6
1.1.1. Makroskopische Anatomie 6
1.1.2. Mikroskopische Anatomie 7
1.2. Neoplasien der Papilla Vateri 8
1.2.1. Epidemiologie 8
1.2.2. Klinische Befunde 8
1.2.3. Diagnostik 9
1.2.4. Pathogenese 10
1.2.4.1. Adenom-Karzinom-Sequenz 10
1.2.4.2. Molekularpathologische und immunhistochemische Befunde 10
1.2.5. Adenome 12
1.2.6. Karzinome 13
1.2.6.1. Ätiologie 13
1.2.6.2. Makroskopische Wuchsformen und TNM-Klassifikation 14
1.2.6.3. Histopathologie 15
1.2.7. Therapie und Prognose 17
1.3. Grundlagen zu den verwendeten immunhistochemischen Markern CDX 2, CK 7 und
CK20 20
1.4. Genetische Instabilität (MSI und CIN) 21
1.5. Fragestellung und Zielsetzung 24
2. MATERIAL ..... ... . 26
2.1. Gewebeproben und klinisch-pathologische Patientendaten 26
2.1.1. Tumoren der Papilla Vateri 26
2.1.2. PeriampuUäre Tumoren 27
2.2. Chemikalien 29
23. Antikörper, DNA-Sonden und Primer 29
2 J.l. Primär-Antikörper für die immunhistochemischen Färbungen 29
121. Fluoreszenzmarkierte DNA-Sonden für die Fluoreszenz-in-situ-Hybridisiening
(FISH) 30
233. OligonukleoÜd-Primer für die Mikrosatelliten-Analyse (MA) 30
2.4. Sonstige Reagenzien, Lösungen und Puffer 32
2.4.1. Immunhistochemie 32
2.4.2. Fluoreszenz-in-sItu-Hybridisierung (FISH) 32
2.4J. Färbung mit Methylenblau 32
2.4.4. Mlkrodissektion 32
2AJ5. Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) 33
2.4.6. Polyacrylamid-Gelelektrophorese (PAGE) 33
2.4.7. SUberfärbung. 33
1
Inhaltsverzeichnis
3. METHODIK 34
3.1. Anfertigung histologischer Schnitte 34
3.2. Tissue microarray (TMA) 35
32.1. Prinzip 35
3.2.2. TMA-Zusammensetzung 35
3 2 3. TMA-Herstellung 36
3.3. Immunhistochemie 38
33.1. Prinzip 38
3.3.2. Vorbereitungen 39
3.3.3. Immunhistochemische Färbung 39
33.4. Auswertung der Präparate 40
3 3 S. Bildmaterial 40
3.4. Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (F1SH) 40
3.4.1. Prinzip 40
3.4.2. FISH-Färbung. 42
3.4.3. Auszählung der Fluoreszenzsignale 43
3.4.4. Statistische Auswertungskriterien 44
3.4.5. Bildmaterial 44
3.5. Mikrodissektion und DNA-Isolierung 44
3.5.1. Vorbereitungen 44
3.5.2. Manuelle Mikrodissektion 45
3.5 3. Automatische DNA-Isolierung 45
3.6. Mikrosatcllüen-Analyse (MA) mittels Polyacrylamidgel-Elektrophorese (PAGE) 46
3.6.1. Prinzip 46
3.6.2. Poiymerase-Ketten-Reaktion (PCR) 47
3.63. Polyacrylamidgel-Elektrophorese (PAGE) 49
3.6.4. Silberfärbung 49
3.6.5. Interpretation der Bandenmuster. 50
3.7. Statistische Datenauswertung 51
4. ERGEBNISSE..- 52
4.1. Histologisehe Subtypen bei Tumoren derPapMa Voten 52
4.1.1. Häufigkeitsverteilung der histologischen Subtypen 52
4.1.2. Znsammenhang von Histologie und klinisch-pathologischen Parametern 52
4.2. Immunhistochemische Expressionsbestimmung von CDX 2, CK 7 und CK 20 bei Tumoren
derPapiüa Vateri und periamputtären Tumoren 54
4.2.1. CDX 2-Expression 54
4.2.1.1. CDX 2-Expressionsmuster bei Tumoren der Papilla Vateri 54
4.2.1.2. Zusammenhang von CDX 2-Expression und klinisch-pathologischen Parametern
bei Tumoren der Papilla Vateri 55
4.2.1.3. CDX 2-Expression bei periampullären Tumoren 57
2
Inhaltsverzeichnis
4.2.2. CK 7- und CK 20-Expression 58
4.2.2.1. CK 7- und CK 20-Expressionsmuster bei Tumoren der Papilla Vateri 58
4.2.2.2. Zusammenhang von CK 7- und CK 20-Expression und klinisch-pathologischen
Parametern bei Tumoren der Papilla Vateri 60
4.2.2.3. CK 7- und CK 20-Expression bei periampullären Tumoren 64
4.23. Bildmaterial 65
4.3. Aneuploidie-Bestimmung bei Tumoren der Papilla Vateri und periampullären Tumoren
mittels Fluoreszenz-in-sUu-Hybridisierung (FISH) am TMA 67
43.1. Auftreten von Aneuploidie bei Tumoren der Papilla Vateri 67
4.3.2. Zusammenhang von Aneuploidie und klinisch-pathologischen Parametern bei
Tumoren der Papilla Vateri 70
433. Aneuploidie bei periampullären Tumoren 72
4.3.4. Bildmaterial 73
4.4. MikrosatellUen-Analyse (MA) und bnmunhistochemisehe Expressionsbestimmung der
MMR-Proteine bei Tumoren der Papüla Vateri 75
4.4.1. Mikrosatelliten-Analyse und Expressionsbestimmung der MMR-Proteine bei
einem Teilkollektiv der untersuchten Papillentumoren 75
4.4.1.1. Mikrosatelliten-Analyse 75
4.4.1.2. Immunhistochemische Expressionsbestimmung der MMR-Proteine 75
4.4.2. Mikrosatelliten-Analyse und Expressionsbestimmung der MMR-Proteine beim
Gesamtkollektiv der untersuchten Papillentumoren 77
4.4.2.1. Mikrosatelliten-Analyse 77
4.4.2.2. Immunhistochemische Expressionsbestimmung der MMR-Proteine 78
4.4.2.3. Zusammenhang von MSI-Status und klinisch-pathologischen Parameter bei
Tumoren der Papilla Vateri 79
4.4.2.4. Zusammenhang von MSI-Status und Aneuploidie bei Tumoren der Papilla Vateri 81
4.43. Bildmaterial 82
4.4.3.1. Mikrosatelliten-Analyse 82
4.4.3.2. Immunhistochemische Expressionsbestimmung der MMR-Proteine 82
5. DISKUSSION ~ 83
5./. Häufigkeitsverteilung und klinische Relevanz der verschiedenen histologischen Subtypen
bei Tumoren der Papilla Vateri 83
5.2. Immunhistochemische Bestimmung des Expressionsverhaltens von CDX2, CK 7 und
CK20bei Tumoren der Papilla Vateri und periampullären Tumoren 85
5.2.1. Immunhistochemische Bewertungskriterien 83
5.2.2. Bedeutung der CDX 2-Expression bei Tumoren der Papilla Vateri und
periampullären Tumoren 86
5.23. Bedeutung der CK 7- und CK 20-Expression bei Tumoren der Papilla Vateri und
periampullären Tumoren 89
5.3. Aneuploidie-Vntersuchung mittels Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) am TMA
bei Tumoren der Papilla Vateri und periampullären Tumoren 93
53.1. Angewandte Methodik. 93
532.. Bedeutung der Aneuploidie bei Tumoren der Papilla Vateri und periampullären
Tumoren 95
5.4. Bedeutung des MSI-Status bei Tumoren der Papilla Vateri 98
5.5. Genetische Instabilität (MSI und CIN) bei Tumoren der Papilla Vateri 102
3
Inhaltsverzeichnis
6. ZUSAMMENFASSUNG 104
7. LITERATURVERZEICHNIS 106
8. DANKSAGUNGEN 117
9. LEBENSLAUF 118
4
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