Seroepidemiologische Studien zum Nachweis von Röteln-Antikörpern in Tauben:
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| adam_text | Titel: Seroepidemiologische Studien zum Nachweis von Röteln-Antikörpern in Tauben
Autor: Sommerfeld, Mirjam
Jahr: 2008
Inhaltsverzeichnis
1 Theoretische Grundlagen 1
1.1 Virusinfektionen und Immunabwehr bei der Taube 1
1.2 Das Rötelnvirus 3
1.2.1 Historischer Überblick 3
1.2.2 Taxonomie 4
1.2.3 Aufbau des Rötelnvirus 5
1.2.4 Die Virusgenese 7
1.2.5 Antigenität und Immunogenität 9
1.2.6 Pathogenese und Symptomatik der Rötelninfektion 9
1.2.7 Epidemiologie der Rötelninfektion 11
1.2.8 Serodiagnostik des Rötelnvirus 12
1.2.9 Untersuchungen zur Rötelninfektion bei Tieren 14
1.2.10 Störfaktoren in der Rötelnserologie 15
1.2.10.1 Kofaktoren 15
1.2.10.2 Inhibitoren 15
1.2.10.3 Agglutinine 17
1.3 Das Paramyxovirus-1 -Virus (PMV-1) 17
1.4 Zielsetzung der Arbeit 18
2 Material und Methoden 20
2.1 Humane Patientenseren 20
2.2 Taubenseren 20
2.2.1 Blutentnahme 21
2.3 Der Hämagglutinationshemmtest (HHT) 21
2.3.1 Testprinzip des HHT 21
2.3.2 Der Röteln-HHT 22
2.3.3 DerPMV-HHT 24
2.4 Der Enzyme-Iinked immuno sorbent assay (ELISA) 25
2.4.1 Testprinzip des ELISA 25
2.4.2 Der humane „SERION ELISA classic Röteln-Virus IgG (quant.) 26
II
2.4.3 Der aviäre Röteln-ELISA 28
2.4.3.1 Kontrollen im aviären ELISA 28
2.4.3.2 Testung der Taubenseren im Röteln-ELISA 29
2.4.4 Der aviäre PMV-ELISA 30
2.5 Der Röteln-Immunoblot 31
2.5.1 Testprinzip 31
2.5.2 SDS-Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese(SDS-PAGE) 32
2.5.3 Gelelektrophorese 32
2.5.4 Der humane Röteln-Immunoblot 34
2.5.5 Der aviäre Immunoblot 34
2.5.5.1 Kontrollen im aviären Röteln-Immunoblot 34
2.5.5.2 Testung der Taubenseren im Immunoblot 35
2.6 Der Neutralisationstest (NT) 35
2.6.1 Testprinzip des NT 35
2.6.2 Testablauf des Plaque-NT 37
2.6.3 Auswertung 37
2.7 Statistik 38
3 Ergebnisse 40
3.1 Humane Patientenseren 40
3.1.1 Ergebnisse der humanen Seren im HHT 40
3.1.2 Ergebnisse der humanen Seren im ELISA 41
3.1.3 Ergebnisse der Patientenseren im Immunoblot 42
3.1.4 Spezifitäts- und Sensitivitätsberechnung 43
3.1.4.1 Cut off-Berechnung für den ELISA 45
3.2 Voruntersuchungen zur Etablierung eines aviären Röteln-ELISA
und Röteln-Immunoblots 47
3.2.1 Feststellung der Taubenserumkonzentration für den Röteln-ELISA und
Immunoblot und Vergleich der Substrate TMB und ABTS für den ELISA 47
3.2.2 Feststellung der Konjugatkonzentration mittels Kreuztitration für den
Röteln-ELISA und Immunoblot 50
3.2.3 Kontrolle des Röteln-ELISA-Versuchaufbaus mit dem aviären PMV-
ELISA 53
3.2.4 Zusammenfassung der Voruntersuchungen zur Etablierung eines
aviären Röteln-ELISA und -Immunoblots 56
III
3.3 Ergebnisse der Taubenseren 56
3.3.1 Ergebnisse der Testung von Taubenseren im Röteln-HHT 56
3.3.2 Ergebnisse der Taubenseren im aviären Röteln-ELISA 58
3.3.3 Ergebnisse spezieller Taubenseren im aviären Immunoblot 61
3.3.4 Ergebnisse spezieller Seren im Neutralisationstest 63
3.4 Spezifitätsuntersuchungen 63
3.4.1 Röteln-Antigen-Vorinkubation im HHT und aviären ELISA 63
3.4.2 Rötelntiter im Zeitverlauf 66
3.4.3 Untersuchung auf unspezifische Störfaktoren im HHT und ELISA 66
4 Diskussion 68
4.1 Die Bedeutung der Fragestellung nach Röteln-Antikörpern in
Tauben für die Rötelnforschung 68
4.2 Die Adaptation an humane Röteln-Testverfahren 69
4.3 Interpretation der serologischen Befunde im humanen System 70
4.3.1 Cut off-Bestimmung im humanen IgG-ELISA 73
4.4 Methodische Aspekte zur Entwicklung der Testverfahren für die
Taubenseren 74
4.5 Interpretation der serologischen Befunde der Tauben 76
4.6 Interpretation des Versuches zum Spezifitätsnachweis 78
4.7 Interpretation der Titerbestimmung im Zeitverlauf 79
4.8 Interpretation der Versuche auf Störfaktoren 79
4.9 Diskussion spezieller Taubenseren 80
4.10 Relevanz weiterer Untersuchungen 82
5 Zusammenfassung der Arbeit 84
6 Literaturverzeichnis 87
7 Abbildungs- und Tabellenverzeichnis 98
7.1 Abbildungsverzeichnis 98
7.2 Tabellenverzeichnis 100
IV
8 Anhang 102
8.1 Tabellen der humanen Seren und der Taubenseren 102
8.2 Verwendete Reagenzien 116
Selbstständigkeitserklärung 121
Tabellarischer Lebenslauf Mirjam Sommerfeld 123
Danksagung 122
V
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