Assoziationen von Polymorphismen der endothelialen NO-Synthase mit dem Auftreten der Koronaren Herzkrankheit:
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2008
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1 EINLEITUNG 6
1.1 Ziel der Studie 6
1.2 Funktion des Endothels und Stickstoffmonoxid (NO) 6
1.2.1 Grundlagen 6
1.2.2 Geschichte der Entdeckung des endothelialen Stickstoffmonoxids (NO) 7
1.2.3 Molekulare Wirkungsmechanismen von NO 8
1.2.4 Funktionen des endothelialen NO im kardiovaskulären System 9
1.2.5 Die Bedeutung des endothelialen NO für die endotheliale Dysfünktion 10
1.3 Endotheliale NO-Synthase 11
1.3.1 Aktivität, Regulation und Bedeutung von eNOS 11
1.3.2 Charakterisierung des Glu298Asp (E298D) Polymorphismus 13
1.3.3 Charakterisierung des 27 bp Tandemrepeat-(4a/b)-Polymorphismus 14
1.3.4 Weitere Polymorphismen des eNOS Gens 14
1.4 Ätiologie und Risikofaktoren der koronaren Herzkrankheit 15
1.5 Bedeutung von genetischen Polymorphismen für die Entstehung der KHK 17
1.6 Fragestellungen der Arbeit 18
2 METHODEN UND MA TERIALIEN 19
2.1 Untersuchte Patientenkollektive 19
2.2 Eingesetzte Methoden zur Detektion der untersuchten Polymorphismen 20
2.2.1 DNA-Isolierung 20
2.2.2 Materialen 21
2.3 Genotypisierung des Glu298Asp-(E298D) Polymorphismus 22
2.3.1 PCR Amplifikation des 248 bp Fragmentes 22
2.3.2 Gelelektrophorese und Fotodokumentation des 248 bp Fragmentes 23
2.3.3 Detektion der Glu298Asp-Mutation durch Ban II Verdau 24
2.4 Genotypisierung des 27 bp Repeat (4a/b)-Polymorphismus im Intron 4 25
2.4.1 PCR-Amplifikation 25
2.4.2 Gelelektrophorese, Fotodokumentation und Detektion des PCR-Produktes 26
2.5 Statistische Methoden 27
3 ERGEBNISSE 29
3.1 Patientencharakteristik 29
3.2 Glu298Asp- (E298D) Polymorphismus des eNOS-Gens 30
3.2.1 Allelverteilung des Glu298Asp-(E298D) Polymorphismus 30
3.2.2 Genotypverteilung des Glu298Asp-(E298D) Polymorphismus 30
3.2.3 Stratifizierung der eNOS Genotypen 31
3.2.4 Stratifizierung nach Geschlecht 31
3.2.5 Stratifizierung nach Manifestationsalter der KHK 32
4
3.2.6 Differenzierung nach Hauptrisikofaktoren der KHK sowie nach dem Risikoprofil 33
3.3 27 bp Tandemrepeat- (4a/b) Polymorphismen des eNOS-Gens 33
3.3.1 Allelverteilung des 27 bp Tandemrepeat- (4a/b) Polymorphismus 33
3.3.2 Verteilung der eNOS 4a/b-Genotypen 33
3.3.3 Stratifizierung der eNOS-Genotypen __^_ 34
3.3.4 Stratifizierung nach Geschlecht und Manifestationsalter der KHK 34
3.3.5 Stratifizierung nach Hauptrisikofaktoren der KHK und Risikoprofil 35
3.4 Kopplungsanalyse der untersuchten Polymorphismen im eNOS-Gen 35
3.4.1 Verteilung zwischen den 4a/b-und E298D-Polymorphismen 35
3.4.2 Genotypenverteilung in Abhängigkeit vom Vorliegen der KHK 36
3.4.3 Kombinationsanalyse zwischen den 4a/b- und E298D-Polymorphismen und dem eNOS CA-
Repeat-Polymorphismus __^ 36
3.4.3.1 Verteilung zwischen dem E298D und dem CA-Repeat-Polymorphismus 36
3.4.3.2 Genotypenverteilung des E298D- sowie des CA-Repeat-Polymorphismus in Abhängigkeit vom
Vorliegen der KHK 38
3.4.3.3 Verteilung zwischen dem 4a/b und dem CA-Repeat-Polymorphismus 38
3.4.3.4 Genotypenverteilung des 4a/b- sowie des CA-Repeat-Polymorphismus in Abhängigkeit vom
Vorliegen der KHK 38
3.5 Überprüfung der Einflussfaktoren auf die KHK mit Hilfe der logistischen Regression 39
3.5.1 Einflussfaktoren der KHK 39
4 DISKUSSION 40
4.1 Bedeutung des GIu298Asp- (E298D) und des 27 bp Tandenrepeat- (4a/b)
Polymorphismus für die Aktivität der endothelialen NO-Synthase 40
4.1.1 Glu298Asp- (E298D) Polymorphismus 42
4.1.1.1 Manifestationsalter 43
4.1.2 27 bp Repeat- (4a/b) Polymorphismus 44
4.1.3 Kopplungsanalyse aller in der Cordis-Studie untersuchten Polymorphismen der eNOS 46
4.2 Methodische Aspekte der Studie 47
4.2.1 Fall-Kontroll-Studien 47
4.2.2 Methodische Beurteilungen 48
4.3 Assoziation von eNOS Polymorphismen zu komplexen Erkrankungen 49
4.4 Klinische Bedeutung der Polymorphismen der eNOS, Zukunft und Ausblick 50
5 ZUSAMMENFASSUNG_ 52
6 GLOSSAR 54
7 ERGEBNISTABELLEN 55
8 DANKSAGUNG 71
9 LEBEN SLA UF 72
5
10 ERKLÄUNG ÜBER SELBSTSTÄNDIGKEIT 73
11 LITERATURVERZEICHNIS 74
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