Molekulare Klonierung von Genen des Larvenstadiums des Zestoden Taenia solium:
Gespeichert in:
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Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
9
2.
SCHRIFTTUM
10
2.1
TAENIA
SOLIUM
:
ENTWICKLUNG
UND
EPIDEMIOLOGIE
10
2.2
PATHOGENESE,
KLINISCHES
BILD
UND
THERAPIE
DER
ZYSTIZERKOSE
12
2.3
DIAGNOSTIK
14
2.4
PROBLEMSTELLUNG
UND
METHODIK
15
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
19
3.1
MATERIAL
19
3.1.1
CHEMIKALIEN,
ENZYME
UND
REAKTIONSKITS
19
3
1.2
PUFFER
UND
LOESUNGEN
21
3.1.3
OLIGODESOXYNUKLEOTIDE
21
3.1.4
BAKTERIENSTAEMME
23
3
1.5
VEKTOREN
23
3.1.6
MEDIEN
UND
PLATTEN
24
3.1.7
PARASITENMATERIAL
24
3.1
8
SEREN
25
3.1.9
EDV
25
3.2
METHODEN
ZUM
ARBEITEN
MIT
RNA
UND
DNA
26
3.2
1
ISOLIERUNG
VON
POLY(A)
'
-RNA
AUS
GESAMT-RNA
26
3.2.2
KONSTRUKTION
EINER
UNIZAP
XR
CDNA-EXPRESSIONSGENBANK
26
3.2.3
KOMPETENTE
ZELLEN
FUER
DIE
PHAGENPLATTIERUNG
28
3
2.4
AUSPLATTIERUNG
VON
UNIZAP
XR-PHAGEN
29
32
5
MARKIERUNG
SPEZIFISCHER
DNA-SONDEN
MIT
DIGOXIGENIN
29
3.2.6
PHAGENHYBRIDISIERUNG
MIT
EINER
DIGOXIGENIN-MARKIERTEN
SONDE
30
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.7
IMMUNOSCREENING
31
3.2.8
IN
VIVO
EXZISION
VON
PHAGEMIDS
(PBLUESCRIPT
SK
(+,-))
32
3
2.9
SCHNELLMETHODE
ZUR
PLASMID-DNA
ISOLIERUNG
33
3.2.10
POLYMERASE-KETTENREAKTION
34
3
2.11
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
UND
EXTRAKTION
VON
DNA-I'RAGMENTEN
35
3.2.12
PHENOLISIEREN
UND
EAELLUNG
VON
DNA
36
3
2.13
RESTRIKTIONSVERDAU
36
3.2
14
L.IGATION
37
3.2.15
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
NACH
DER
CACI
2
-METHODE
37
3.2.16
TRANSFORMATION
38
3.2.17
KOLONIEHYBRIDISICRUNG
MIT
EINER
DIGOXIGCNIN-MARKIERTEN
SONDE
38
3.2.18
KONSTRUKTION
VON
PGEX-3X
EUSIONSPROTEINCN
39
3.2.19
SEQUENZIERUNG
VON
DOPPELSTRAENGIGER
PLASMID-DNA
40
3.2.20
DENATURIERENDE
POLYACRYLAMIDELCKTROPHORE.SE
41
3.3
METHODEN
ZUM
ARBEITEN
MIT
PROTEINEN
42
3.3.1
PROTEINBESTIMMUNG
42
3.3.2
REINIGUNG
VON
GLUTATHION-S-TRANSFERASE-FUSIONSPROTEINCN
42
3.3.3
REINIGUNG
VON
SEREN
UEBER
EINE
CNBR-AKTIVIERTE
SCPHAROSESAEULE
43
3.3.4
ELISA
ZUR
TITERBCSTIMMUNG
POLYKLONALER
ANTIKOERPER
44
3
3.5
ECHINOKOKKEN-ELISA
44
3.3
6
SDS-POLYACRYLAMID-GCLELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
45
3.3.7
WESTERN-BLOT
45
4.
ERGEBNISSE
47
4.1
ERSTELLUNG
DER
CDNA-EXPRESSIONSGENBANK
47
4.2
NACHWEIS
DES
EMIO-ILOMOLOGS
DES
LARVENSTADIUMS
VON
TAENIA
SOLIUM
49
4.2.1
DNA-DNA-HYHRIDISIERUNG
49
4.2
2
IMMUNOSCREENING
50
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
POSITIVEN
CDNA-KLONE
50
4.2.3.1
SEQUENZDATEN
52
4.2.3.2
I
LOMOLOGIEVERGLEICH
55
4.2.4
EINSATZ
IM
WESTERN-BLOT
60
4.2.5
KONSTRUKTION
EINES
GLUTATHION-S-TRANSFERASE-FUSIONSPROTEINS
MIT
EINEM
TS9-SPEZIFISCHEN
PEPTIDANTEIL
61
4.3
NACHWEIS
VON
WEITEREN
REKOMBINANTEN
PHAGENKLONEN
64
4.3.1
IMMUNOSCREENING
64
4.3.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
POSITIVEN
CDNA-KLONE
64
4.3.2.1
SEQUENZDATEN
UND
HOMOLOGIEVERGLEICH
66
5.
DISKUSSION
67
5.1
NACHWEIS
DES
EMIO-HOMOLOGS
TS9
67
5.2
NACHWEIS
VON
WEITEREN
IMMUNREAKTIVEN
PHAGENKLONEN
68
5.3
SCHLUSSFOLGERUNG
UND
AUSBLICK
70
6.
ZUSAMMENFASSUNG
71
7.
SUMMARY
73
8.
L1TERATURVERZEICIINIS
75 |
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